白藜芦醇和褪黑素对绵羊胎儿成纤维细胞转染及卵母细胞体外成熟的影响

试验旨在利用白藜芦醇(Re)和褪黑素(MT)提高绵羊胎儿成纤维细胞电穿孔转染(电转)效率、优化卵母细胞体外成熟体系,以提高转基因动物生产效率。将绵羊胎儿成纤维细胞分为6组:对照组、添加白藜芦醇高、中、低(R^-5、R^-6、R^-7)3种浓度组及白藜芦醇和褪黑素联合添加组(R^-5M^-5、R^-6M^-7),通过电转效率和细胞凋亡情况确定电转体系优化方案;通过对细胞周期、线粒体膜电位及活性氧(ROS)的检测研究其作用机制。将绵羊卵母细胞分为对照组及白藜芦醇和褪黑素(R^-5M^-5、R^-6M^-7)联合添加组,通过绵羊卵母细胞体外成熟后卵丘细胞扩展、第一极体排出及体外受精胚胎的卵裂率检测其对卵母细胞体外成熟的作用。研究结果显示,分离的绵羊胎儿成纤维细胞P3代增殖旺盛,细胞生长曲线呈典型的S型;与对照组相比,所有试验组胎儿成纤维细胞的电转效率均显著提高(P<0.05),R^-5M^-5组电转效率最高;R^-6M^-7组显著降低细胞凋亡率(P<0.05),R^-5、R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组均显著促进细胞增殖(P<0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组G1期细胞增加,S期细胞相对减少,但差异均不显著(P>0.05);R^-6、R^-7、R^-5M^-5和R^-6M^-7组成纤维细胞内ROS水平均显著降低(P<0.05),R^-6、R^-5M^-5和R^-6M^-7组线粒体膜电位均显著增加(P<0.05);R^-6M^-7组显著促进绵羊卵丘细胞扩展、提高卵母细胞第一极体排出率和体外受精胚胎发育能力(P<0.05)。综上,白藜芦醇和褪黑素可以优化绵羊胎儿成纤维细胞电转体系,提高卵母细胞体外成熟效率,为白藜芦醇和褪黑素在转基因动物生产中的应用提供参考依据。     

中国人白细胞介素-12 (hIL-12)cDNA克隆及序列分析

根据已发表的IL-12两个亚基P35 cDNA序列（NM-000882）与P40 cDNA序列（NM-002187）设计2对引物。以LPS刺激的人脐血淋巴细胞为材料，采用RT-PCR技术从总RNA扩增hIL-12基因，包括完整的前体蛋白编码序列。所得到的序列与GenBank中发表的一致，但与CLMF和NKSF序列有所差异。P35同CLMF相比，244aa密码子GAC（Asp）→GAT（Asp）、247aa密码子ACG（Thr）→ATG（Met）；与NKSF比较，44aa密码子GTC（Val）→GTG（Val）。P40同NKSF比较239aa密码子AAC（Asn）→AAG（Lys），291aa密码子ACC（Thr）→ACG（Thr）；P40同CLMF相比较，氨基酸与核苷酸序列完全一致。通过与不同物种氨基酸及核苷酸序列比较分析，P40亚基与其它动物的同源性80％以上，P35亚基与其它动物同源性在70％。     

克服昆明白小鼠胚胎发育阻滞的初步研究

为克服昆明白小鼠胚胎的2—细胞阻滞并使受精卵发育到囊胚期,本研究设两个实验组和一个对照组。第1实验组所用培养液为Brinster氏化学合成培养液与输卵管上皮和输卵管液混合的协同培养液;第2实验组用改良Brinster氏化学合成培养液;对照组用经典的Brinster培养液。培养是在5％CO_2和95％空气,37℃的CO_2箱内进行。3次体外培养试验结果是:第1实验组小鼠胚胎从受精卵发育到囊胚期平均发育率为43.7±7.76％;第2实验组的平均发育率为17.1±5.06％;对照组的平均发育率是15.3±3.06％。统计学分析表明,添加输卵管上皮和输卵管液的Brinster培养液对克服昆明白小鼠胚胎2—细胞阻滞具有一定作用。     

猪肝脏组织表达序列标签(ESTs)的初步分析

 构建了猪肝脏组织cDNA文库 ,并对文库中随机挑选的 4 38个克隆的表达序列标签 (ESTs)进行了研究。结果表明 ,在所研究的 4 38个ESTs中 ,186个在猪种中已有匹配序列 ,37个在人类及其它物种中可以找到同源序列 ,2 15个为未知功能基因。试验还测定了文库中 4 5个cDNA克隆的全长插入序列 ,结果表明 ,19个为已知功能基因 ,11个没有发现开放阅读框 ,其它 15个具有开放阅读框 ,但基因的功能未知。这些结果初步代表了肝脏组织的功能基因表达谱。     

肌肉发生相关基因的网络调控研究

在胚胎发育过程中,肌肉的形成经历了由间充质细胞迁移、分化为成肌细胞,再进一步分化为成熟肌细胞的过程。脊椎动物的肌纤维在胚胎期已经形成,出生后数目不再改变,此时肌肉生长依赖于卫星细胞的增殖(hyperplasia)、分化(differentiation)而引起肌纤维长度的增加和周径增大,而不是依赖于细胞的增生(proliferation)。因此,研究肌肉发生对于了解胚胎发育、细胞决定具有重要意义。以成肌决定因子、抑肌素为核心的信号转导网络在脊椎动物成肌过程中的作用已得到公认。然而,上述两者对肌肉发生的控制还依赖于其他调节因子的作用。文章从动物系统发…     

一种产中性蛋白酶的凝结芽孢杆菌Liu-g1活菌制剂的制备方法

为提高发酵液中产中性蛋白酶凝结芽孢杆菌Liu-g1 的活菌数量,采用单因素和正交实验研究不同培养基配方和不同发酵条件对凝结芽孢杆菌Liu-g1 活菌数量的影响。结果表明：优化培养基配方为大豆粕1%、玉米淀粉1%、碳酸钙0.2%。选用最优培养基配方,在发酵温度为45℃、接种量2%、装液量50 mL、发酵液pH 7.5、发酵时间为48 h、发酵转速为180 r/min时,发酵剂活菌数量最高,为9.53×109 CFU/mL。在此优化条件下,发酵剂的活菌数量是优化前的28.88倍。,发酵剂的活菌数量是优化前的28.88倍。     

马eCG/LHβ亚基基因多态性研究

马绒毛膜促性腺激素(equine chorionic gonadotropin,eCG)是由妊娠期母马胎儿尿膜—绒毛膜细胞分泌的一种由α、β两个亚基组成的异源二聚体糖蛋白,具有FSH、LH的双重活性。采用PCR-SSCP和测序方法对28匹蒙古马和25匹纯血马的eCG/LHβ亚基基因的多态性进行研究,结果发现,在蒙古马eCG/LHβ亚基基因5′调控区存在一突变位点:G-415A分为AA、BB、AB 3种基因型,AA、BB、AB基因型频率分别为0.89、0.07、0.04;纯血马此基因中未检测到多态性。     

猪单核/巨噬细胞吞噬能力的测定和遗传参数估计

实验通过对大白猪单核/巨噬细胞吞噬能力的测定,寻找能在实验室检测机体一般抗病力的方法,估计其遗传参数,为猪的抗病育种研究提供参考。以MTT-HCT-8法检测猪外周血单核/巨噬细胞的吞噬积,运用软件进行描述性统计,计算遗传力,分析其与胴体性状、肉质性状的表型相关和遗传相关。结果表明：吞噬积的平均值为3.05±1.87,遗传力为0.13。相关性研究表明,吞噬积与胴体性状表型相关的范围为-0.22～0.015,其中与胴体重表型相关为-0.15(P<0.05),与胸腰长表型相关为-0.22(P<0.01);二者遗传相关的范围为-0.82～0.047。吞噬积与肉质性状表型相关的范围为-0.08～0.038(P<0.05);二者遗传相关的范围为-0.87～0.30。综上所述,吞噬积的遗传力为低遗传力,与胴体性状、肉质性状的表型相关较弱,遗传相关较强,大多呈负相关。     

副干酪乳杆菌KL1制剂对蛋鸡生产性能、蛋品质及鸡蛋中胆固醇含量的影响研究

旨在利用从藏灵菇中筛选的可显著降低血清胆固醇和耐受胃肠道逆环境的副干酪乳杆菌KL1菌株制备微生态制剂,探讨该制剂在低胆固醇鸡蛋生产中对蛋鸡生产性能、蛋品质及鸡蛋中胆固醇含量的影响。本试验将120只30周龄健康状态良好且产蛋率接近的农大3号矮小蛋鸡随机分为低、中、高剂量试验组和对照组,每组5个重复,每个重复6只蛋鸡,试验组在基础饲粮中分别添加10⁵、10⁶、10⁷ CFU·（只·d）^-1副干酪乳杆菌KL1微生态制剂,对照组饲喂基础饲粮,连续饲喂10周。对蛋鸡的生产性能、蛋品质和鸡蛋中的胆固醇进行测定和计算。结果表明：1）中剂量组的蛋鸡饲养日产蛋率与对照组相比有显著提高（P<0.05）;2）与对照组相比,中、高剂量组的蛋壳强度、蛋壳厚度和血清钙水平有显著提高（P<0.05）,蛋黄相对重有极显著提高（P<0.01）;3）低、中、高剂量组的蛋黄胆固醇含量及血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量均极显著低于对照组（P<0.01）;高剂量组的血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量分别极显著高于对照组（P<0.01）和显著低于对照组（P<0.05）。在饲粮中添加副干酪乳杆菌KL1微生态制剂可显著提高蛋鸡生产能力和蛋壳品质,降低鸡蛋中胆固醇含量,总体来看,以10⁶ CFU·（只·d）^-1作为最终添加剂量效果最佳,在低胆固醇鸡蛋的生产中具有良好的应用价值。     

利用体内外成熟卵母细胞生产转TLR4基因抗病克隆绵羊的研究

研究旨在提高羊的抗病性能、生产培育高抗病力的转基因羊。本实验分别利用绵羊超数排卵获得的体内卵母细胞和体外成熟培养的卵母细胞作为核受体进行转基因克隆羊的生产。体内超排共获卵2 431枚,其中可用卵77.29%(1 879/2 431);体外成熟培养共获卵3 292枚,其中可用卵70.90%(2 334/3 292)。体内外核移植实验分别获得体内重构胚1 879枚、体外重构胚1 786枚。结果表明:体内核移植重构胚融合率(81.12%)显著性高于体外核移植重构胚(68.88%)(P<0.05);将部分体内、外重构胚以手术法分别移植于89只及72只受体,体内重构胚移植妊娠率为10.11%,显著高于体外重构胚移植妊娠率(2.78%)。体内、外重构胚移植后各产羔1只,PCR检测均为转TLR4阳性。本实验初步建立了一套较有效的体内外核移植生产转基因克隆羊的方法,并比较了不同来源卵母细胞对核移植效率的影响,发现体内超数排卵所获取的成熟卵母细胞数量、质量均优于体外成熟培养获卵。