嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定蛋白酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃振荡培养1周后，培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE－Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析，得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS－PAGE测定分子量为55kD，该酶的最适反应温度为70℃，最适作用pH值为6.0。该酶具有很好的耐热性，在pH值6.0 50℃条件下酶是稳定的；60℃保温1h，仍保留92％的原酶活性；90℃时酶活半衰期为6min，抑制剂试验证明，该酶为丝氨酸蛋白酶。     

无花果蛋白酶的分离纯化及其理化性质研究

以无花果良种布兰瑞克和紫果１号为材料，其匀浆滤汁经有机溶剂沉淀、超滤等方法处理，得到无花果蛋白酶粉。酶比活力为１５．３４ｕ／ｍｇ·ｐｒｏｔｅｉｎ，纯化倍数为１１．６８％，酶产率为１．５％，酶活力回收率为２７．４％，酶最适ｐＨ为８．０，在ｐＨ５￣１０范围内处理０．５ｈ活性稳定，酶最适温度为４０℃，在温度５０℃以内活性稳定。酶具有巯基蛋白酶特性，能被半胱氨酸和ＥＤＴＡ激活，而被ＨｇＣｌ２抑制。     

黑曲霉木聚糖酶性质的初步研究

对黑曲霉菌株所产的木聚糖酶性质进行了研究。结果表明:该酶的酶活力为69913IU·g-1,最适反应温度为45℃,最适pH值为3.6,pH稳定范围较广,热稳定性在50℃以下,一般金属阳离子对该酶影响不大,适用于低聚木糖工业生产。     

里氏木霉β-葡聚糖酶稳定性研究

研究了里木霉GXCβ－莆聚糖酶的稳定性。结果发现：β－葡聚糖酶粗酶液的稳定必于酶液,两者的耐热温度分别为70℃和60℃,其pH稳定范围都为3．0－5．0。Cu^2 ,Mn^2 和Fe^3 对酶有抑制作用,Zn^2 和Co^2 有激活作用,其他离子Ca^2 ,Mg^2 ,Fe^2 和K^ 在不同浓度条件下对β－葡聚糖酶有不同的作用。胰蛋白酶和胃蛋白酶对β－葡聚糖酶活力无显著影响。     

角蛋白酶的提取和理化性质的初步研究

用弗氏链霉菌Ｓ－２２１变种的羽毛粉发酵液离心后上清液经８０％浓度乙醇沉淀离心提取的角蛋白酶，酶比活力１２４．８ｕ／ｍｇｐｒｏｔｅｉｎ，纯化倍数３．６，酶活力回收率５８．８％．酶解羽毛粉的最适ｐＨ值９．０，在ｐＨ６～９范围处理３０ｍｉｎ酶活性稳定；最适温度５０℃，在７０℃以内处理３０ｍｉｎ活性稳定．酶能被巯基乙醇激活，被ＭｇＳＯ４，ＣａＣｌ２，ＨｇＣｌ２抑制。     

恭城月柿果胶粗酶的酶学特性初探

对恭城月柿中的果胶酶进行了提取和初步分离纯化,并对其酶学性质进行了初步的探讨.结果表明:月柿果胶酶在高酸、中性和碱性条件下不稳定,在pH值为4.0～5.0时较稳定,酶反应的最适pH值为4.5;在低于温度40℃时酶较稳定,温度70℃酶活性基本全部丧失,酶反应的最适温度为45℃;Mg2 、Al3 和Cu2 对酶有激活作用,但Ca2 、Fe3 有明显抑制作用.     

轮纹大茎点菌葡糖淀粉酶部分酶学性质研究

轮纹大茎点菌在液体培养条件下产葡糖淀粉酶酶活很低,而在固态培养条件下酶活相对较高。对粗酶液中葡糖淀粉酶的部分酶学性质进行研究,结果表明,该酶的最适反应温度为50℃,30~50℃之间有较高活性;40℃以下稳定,50℃保温1 h酶活性损失60%以上。酶的最适pH为8.0,在pH 7.0~11.0之间有较高的酶活性:pH 5.0以下酶不稳定,活性迅速丧失,5.0~10.0之间酶相对稳定。K+、Fe2+、Ca2+对酶的活性基本没有影响,而Cu2+、Mg2+、Zn2+、Mn2+、Na+对酶的催化活性有激活作用,其中Mn2+激活作用最为强烈。     

木瓜蛋白酶凝乳特性的研究

研究结果表明，木瓜蛋白酶最适凝乳温度为９５℃；７５℃以下，３０ｍｉｎ以内酶凝乳活性稳定，８５℃处理３０ｍｉｎ活性完全丧失；ｐＨ为５￣８时凝乳活性随乳的ｐＨ值的降低而增强；酶在ｐＨ３．２￣７．７之间处理２０ｈ凝乳活性稳定；Ｃａ＾２＋具有明显的促凝乳作用；底物浓度对酶活性的影响符合米氏规律。     

木瓜蛋白酶凝乳特性的研究

研究结果表明，木瓜蛋白酶最适凝乳温度为９５℃；７５℃以下，３０ｍｉｎ以内酶凝乳活性稳定，８５℃处理３０ｍｉｎ活性完全丧失；ｐＨ为５～８时凝乳活性随乳的ｐＨ值的降低而增强；酶在ｐＨ３．２～７．７之间处理２０ｈ凝乳活性稳定；Ｃａ２＋具有明显的促凝乳作用；底物浓度对酶活性的影响符合米氏规律     

温度及pH对胞外乳糖酶酶学性质的影响

试验分析了温度、pH对亮色毛霉产胞外乳糖酶酶学性质的影响。结果表明,亮色毛霉所产乳糖酶的最适温度为60℃,属于高温乳糖酶;4℃保存可以提高酶的稳定性,纯酶液的相对酶活性在30d后稍有变化;酶活力最适pH为4.5,pH稳定性试验表明,该酶pH稳定范围在4.0～5.5。     

嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporusβ-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性研究

采用室内培养、测定方法，对嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiaeus var．1ez，lecisporus产生的β-葡萄糖苷酶进行了分离纯化及特性研究。粗酶液经硫酸铵沉淀、DEAE—Sepharose Fast Flow阴离子层析、Phenyl-Sephamse疏水层析等步骤获得了凝胶电泳均一的β-葡萄糖苷酶。结果表明，经12％SDS-PAGE测得酶的单亚基分子量约为118kDa,凝胶过滤层析测得酶的分子量约为350kDa。该酶反应的最适温度和最适pH分别为80℃和4．5～5．0，在pH5．0条件下．该酶在70℃条件下基本稳定，80℃保温30min，剩余酶活为15％。金属离子对β-葡萄糖苷酶活性影响较大．其中Ca^2＋、Ba^2＋对酶有激活作用；Ag^＋、Fe^3＋、Cu^2＋对酶有显著的抑制作用。该酶对水杨苷具有很强的底物特异性。     

核酸酶P1高产菌选育及酶学特性研究

采用紫外线诱变方法选育到一株高活力核酸酶Ｐ１产生菌，其酶活可达５００ｕ／ｍＬ，该菌株最适培养条件为２８￣３０℃下培养３￣４ｄ。粗酶液的贮存稳定性好，在４℃可贮存４个月仍保留８０％的活性，该酶在６０℃以下，ｐＨ５￣８条件下稳定。其最适作用条件为底物浓度１％，ｐＨ６．５￣７．０，反应温度７０℃下降解２ｈ，其ＲＮＡ降解率和５－核苷酸生成率分别可达９０％和８０％。     

黄酒用脲酶产生菌9043C12发酵条件和酶学特性的研究

通过对９０４３Ｃ１２菌株培养条件的研究，使其产脲酶活力达２．４Ｕ／ｍｌ，较原活性０．３４Ｕ／ｍｌ，提高７．１倍，对该酶的酶学特性进行初步研究表明，尿素对该菌脲的生物合成具有显著促进作用，其最适ＰＨ为５．０ 最适温度为４２℃，但在含２０％（ｖ／ｖ）乙醇下最适ＰＨ为４．５，最适温度为４６℃３５℃以下较稳定，酶经６５℃１５ｍｉｎ巴氏消毒完全失活，模拟试验结果表明，２５℃ＰＨ５．０条件下，在含乙醇１６％或     

梅果苦杏仁苷酸特性与青梅汁脱基工艺的研究

对青梅果实叶苦杏仁苷酶的研究结果表明：核仁中酶的活力为果肉的１７倍；此酶的最适适应温度为４０℃，最适ＰＨ为４．６，ＰＨ稳定范围４．０－７．０。经因素三水平正交试验，得出青梅原汁酶法脱苦工艺条件的优化组合为：温度４５－５０℃，ＰＨ４．６，酶液稀释度１：２５，反应时间１ｈ。     

梅果苦杏仁苷酶特性与青梅汁脱苦工艺的研究

对青梅果实中苦杏仁苷酶的研究结果表明：核仁中酶的活力为果肉的１７倍；此酶的最适反应温度为４０℃，最适ｐＨ为４６，ｐＨ稳定范围４．０￣７．０。经四因素三水平正交试验，得出青梅原汁酶法脱苦工艺条件的优化组合为：温度４５￣５０℃，ｐＨ４．６，酶液稀释度（粗酶液∶青梅原汁）１∶２５，反应时间１ｈ。     

丝素蛋白葡萄糖氧化酶膜的储存稳定性

以共价交联法将葡萄糖氧化酶固定化在丝素蛋白膜上，探讨丝素酶膜在不同体系下的储存稳定性。研究结果表明：糖醇类小分子物质（乳糖、肌醇、甘露醇）和聚乙二醇、牛血清白蛋白等大分子物质组成的混合体系对酶膜存在着明显的稳定作用，聚乙二醇、牛血清白蛋白、乳糖等单一体系也能降低酶膜在储存过程中的失活作用。其中牛血清白蛋白＋肌醇＋赖氨酸这一体系稳定作用最为显著，７８ｄ储存后酶膜仍能保持原来活力的９２．１％（４℃）、８２．１％（室温）     

日本对虾的酚氧化酶特性研究

本文以日本对虾为材料提取和部分纯化酚氧化酶，并对其特性进行了研究，以邻苯二酚为作用底物，该酶的最适ｐＨ为６．５，在ｐＨ５．０－８范围内较高稳定性，最稳定的ｐＨ为７．０，最适温度为４０℃，在４０℃以下表现出较高的热稳定性，而在５０℃以上迅速失活。该酶对不同的酚类物质表现出不同的底物专一性，由高至低的趋势依次为三元酚、二无酚和单元酚。米氏常数Ｋｍ值测定表明，该酶对邻苯二酚比ＤＬ－多巴有更高的亲和力。浓     

日本对虾的酚氧化酶特性研究

本文以日本对虾为材料提取和部分纯化酚氧化酶，并对其特性进行了研究，以邻苯二酚为作用底物，该酶的最适ｐＨ为６．５，在ｐＨ５．０－８范围内较高稳定性，最稳定的ｐＨ为７．０，最适温度为４０℃，在４０℃以下表现出较高的热稳定性，而在５０℃以上迅速失活。该酶对不同的酚类物质表现出不同的底物专一性，由高至低的趋势依次为三元酚、二无酚和单元酚。米氏常数Ｋｍ值测定表明，该酶对邻苯二酚比ＤＬ－多巴有更高的亲和力。浓     

适于荧光原位杂交的大薯叶片染色体制片技术

为克服利用根尖制备染色体标本的局限性，拟通过优化酶解去壁低渗法中的材料幼嫩程度、预处理方法以及酶解时间，建立大薯嫩叶染色体制备技术体系。结果表明:取刚展开的大薯嫩叶，用0.002 mol·L?1 8?羟基喹啉于4 ℃下预处理2 h，用3.5%纤维素酶和1.75%的果胶酶混合溶液于37 ℃下解离1 h，能获得较好的大薯染色体制片。最后，以大薯45S rDNA 序列为探针，对有丝分裂间期和中期细胞进行荧光原位杂交检测，杂交信号清晰稳定。本研究建立的适于荧光原位杂交的大薯嫩叶染色体制备技术可为分子细胞遗传学研究提供一种简便实用的细胞学方法。     

枯草杆菌AS1.398制备中性蛋白酶的研究

本文研究了枯草杆菌ＡＳ１．３９８发酵培养制备中性蛋白酶。对发酵培养基配比，培养条件，金属离子的影响等进行了摇瓶试验。制备的ＡＳ１．３９８中性蛋白酶有如下性质：最适ｐＨ７．２－７．４，在ｐＨ６．５－８．０稳定。最适温度４２￣４４℃，３５℃下处理２小时能保持约８５％酶活力６０℃下１０分钟酶完全失活，此酶被ＥＤＴＡ和Ｃｕ＾２＋所抑制。