一株抗多种水产病原菌放线菌的鉴定、发酵优化及其应用

对一株抗多种水产病原菌的海洋放线菌进行细胞壁化学组分和16S rDNA序列分析,初步鉴定为弗氏链霉菌（Streptomyces fradiae）。通过正交试验确定其最佳发酵培养基为：葡萄糖1．5％、牛肉膏2％、海盐1．5％、MgSO4·7H2O0．05％、K2HPO40．05％、CaCO30．1％。最佳发酵条件为：温度33℃、初始pH6．0、接种量10％、种子液菌龄48h。生物活性检测显示原始发酵液的生物效价相当于硫酸卡那霉素为550．81μg／mL,对嗜水气单胞菌的MIC值和MBC值分别为13．67μg／mL和27．35μg／mL。对由嗜水气单胞菌引起的鱼病的最佳治疗剂量为3050μg／（kg·d）,且无急性毒性。通过稳定性试验,发酵液中的抗菌活性成分对热、pH、光和贮藏时间都很稳定。     

嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件的优化

对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h.     

苦参内生拮抗细菌B36菌株最适发酵条件的研究

为提高拮抗菌株B36发酵生产的菌量和抗菌物质的产率,通过单因子试验和正交试验方法,对其摇床发酵培养基成分及发酵条件进行研究。结果表明,最适宜发酵条件为发酵温度28℃,转速150r·min^-1,接种量20％,初始pH值9．0,在250mL三角瓶的装液量为50mL,发酵36h。最佳培养基组成为葡萄糖2．0％,酵母粉0．5％,大豆粉0．5％,NHaNO3 0．5％,CaCO31．0％。     

嗜水气单胞菌、爱德华氏菌灭活菌苗免疫保护及药物治疗试验

嗜水气单胞菌、爱德华氏菌培养物经甲醛灭活后,制成灭活油乳剂苗、灭活菌苗、饵料吸附型疫苗,免疫罗非鱼2周后,分别以嗜水气单胞菌、爱德华氏菌活菌液攻毒,结果显示,注射型疫苗均优于口服型,其中嗜水气单胞菌以腹腔注射0．1mL嗜水气单胞菌灭活菌苗＋0．3mL生理盐水的效果最佳,免疫保护率为85．0％;而爱德华氏菌以腹腔注射0．4mL灭活油乳剂苗效果最佳,免疫保护率为90．0％。两者的药物治疗试验结果显示,以氟苯尼考、恩诺沙星、环丙沙星、氟哌酸治疗罗非鱼嗜水气单胞菌病、爱德华氏菌病均有一定效果,对减少发病率及死亡率、控制病情具有较好作用,其中以氟苯尼考的疗效最佳,其用量为20mg／kgH2O。     

用黄色隐球酵母发酵生产辅酶Q10最佳条件的选择

从黄色隐球酵母Cryptococcus luteolus L3302中提取辅酶Q10,经过对氮源、碳源、初始pH、发酵温度等的研究分析,得到最佳的发酵条件。通过最优化试验,确定培养基的碳源为蔗糖和葡萄糖各1．25g／L;氮源为酵母膏和玉米浆,各0．3g／L;pH值6．5,温度28℃,接种量5％,500mL锥形瓶中的装液量为50mL;生长因子以蛋白水解液为优。按此发酵条件上罐发酵,发酵液中菌体生长量为13．4g/L,辅酶Q10的产量为18．2mg／L。     

黄曲霉和黑曲霉发酵麻疯树废弃饼粕产蛋白酶的酶学性质初探

通过对黄曲霉和黑曲霉发酵麻疯树废弃饼粕所产蛋白酶的酶学性质进行初步研究,确定黄曲霉所产蛋白酶最适催化温度为45℃;最适pH值为6．0;Vmax=3333．33μg·min^-1,Km=31．25mg·mL^-1;Fe^3＋能对其活力产生强烈的抑制作用;适量有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用。黑曲霉所产蛋白酶最适催化温度为50％;最适pH值为4．0;Vmax=18．05μg·min^-1,Km=2．23mg·mL^-1;有机溶剂对蛋白酶活力有一定促进作用;Na^＋和Hg^2＋对蛋白酶活力则有十分强烈的抑制作用。     

产k-卡拉胶酶菌株的筛选及其发酵条件的优化

对K-卡拉胶酶产生菌进行富集培养,以K-卡拉胶为唯一碳源的平板初筛,从多种海藻上分离纯化获得32株具有卡拉胶酶活性的菌株,经摇瓶复筛,从亮管藻上分离的HC4菌株酶活力最高,为50．75U／mL。测定了HC4菌株的16SrRNA基因序列1436bp,在核苷酸序列数据库（NCBI）中进行同源性检索,发现它与Tatrtlana agarivorans的相似性为98％。通过单因子筛选和正交试验,确定该菌株产酶的最佳培养基组成为：碳源K-卡拉胶5g/L;氮源蛋白胨3g／L和NaNO3 1g／L;元机盐NaCl20g／L、K2HPO4·3H2O1g／L、MgSO4·7H2O 0．5g／L和CaCl20．1g／L。最佳培养条件为：摇床转速150r／min,250mL三角瓶中发酵培养基的装液量50mL,接种量4％,发酵培养基起始pH7．5,温度28℃,培养时间28h。经培养基组成及培养条件优化后,HC4菌株的K-卡拉胶酶酶活力提高到602．30U／mL,是优化前的11．87倍。     

蛇莓ISSR-PCR反应体系的建立与优化

采用单因素试验对蛇莓ISSR—PCR反应体系中的6种主要反应因子（模板DNA、Mg^2＋、Taq DNA聚合酶、BSA、dNTP及引物）进行优化筛选，确立了适合蛇莓ISSR分析的最佳PCR扩增反应体系，即10μl PCR反应体积中含：1×TaqDNA聚合酶配套缓冲液（10mmol／L Tris·HCl，pH值9．0；50mmol／L KCl；0．1％Triton X-100），1．75mmol／L Mg^2＋，2mg／ml BSA，0．2mmoL／L 4×dNTP，10ng模板DNA，18pmol引物，0．5U Taq DNA聚合酶。     

常用抗生素对林蛙嗜水气单胞菌抑制效果的检测

为有效防治林蛙"红腿病",试验以林蛙"红腿病"病料中分离的嗜水气单胞菌为菌株,选择21种常用抗生素,通过药敏试验、最低抑菌浓度试验(MIC)、最低杀菌浓度试验(MBC)及其杀菌时间的测定,检测其对林蛙嗜水气单胞菌的抑制效果。药敏试验结果表明,林蛙嗜水气单胞菌对21种常用抗生素呈不同程度的敏感性。MIC试验和MBC试验及其杀菌时间的测定结果表明,氟哌酸的最低抑菌浓度为1μg/mL,最小杀菌浓度为2μg/mL,杀菌时间为0.5h;氯霉素的最低抑菌浓度为8μg/mL,最小杀菌浓度为16μg/mL,杀菌时间为4h。     

挤压加酶脱胚玉米生产酒精的试验研究

为提高酒精生产的淀粉出酒率、缩短发酵时间、降低能源消耗,该研究采用五因素五水平、1／2实施的二次正交旋转组合设计,建立数学模型,得出淀粉出酒率较高的工艺参数的范围为：挤压加酶量0．9175．0．9500L·t^-1,糖化加酶量0．9800～1．0175L·t^-1,糖化时间58．05～60．30min,液化加酶量0．572—0．600L·t^-1,酵母添加量为0．5075％～0．5195％。对照试验结果表明,挤压加酶蒸煮脱胚玉米生产酒精工艺经发酵48h后淀粉出酒率可达到59．19％,与传统酒精生产工艺的56．60％相比,出酒率可提高2．60％。     

短短芽孢杆菌JK-2菌株抑茵活性物质产生条件的优化

短短芽孢杆菌JK-2菌株对多种植物病原真菌和病原细菌具有明显的抑制作用。以JK．2发酵液对番茄枯萎病菌的抑制作用为活性指标,对其培养基成分和培养条件进行了优化。由正交试验和单因素试验得出的最佳培养基配方为淀粉1,0％、牛肉浸膏0．5％、蛋白胨0．3％、蔗糖1．0％、酵母粉0．5％和CaCl2 0．5％,初始pH值7．0。在30℃、170r／min振荡培养条件下,最佳发酵时间为48h,装液量100mL／瓶,接种量1％。     

适于规模化应用的红掌离体高效繁殖体系的建立

以红掌完全展开的幼嫩叶片作为外植体,利用不同浓度的BA和2,4-D的30个组合为脱分化培养基,利用4个不同BA浓度作为增殖与分化培养基,以5个不同浓度NAA作为生根培养基进行对比试验,结果表明：最佳脱分化培养基为MS＋BA1．0mg·L^-1＋2．4-D0．2mg·L^-1．愈伤组织诱导率达到90％;最佳的增殖和分化培养基为MS＋BA1．0mg·L^-1;最佳的生根培养基为1／2MS＋NAA0．5mg·L^-1。     

纳豆激酶液体发酵条件的优化

以纳豆枯草芽孢杆菌（Bacillus subitilis natto）为出发菌株，对其液体发酵生产纳豆激酶（Nattokinase，NK）的培养基组成（碳源、氮源、碳氮比和金属离子组成）和培养条件（温度、pH值，发酵时间、接种量和装液量）对产酶量的影响进行了研究。结果表明：液体发酵培养基的最佳碳源为木糖，浓度为1．5％；最佳氮源为大豆蛋白胨，浓度为2．0％；添加无机盐组分为MgSO4 0．05％、CaCl2 0．02％、K2HPO4／KH2PO 40．1％／0．1％。发酵培养的最佳温度为37℃，pH7．0时有利于菌体产酶，最适装液量为100mL／250mL，接种量以2％为最佳，最适种龄为18h；发酵周期为3d。通过优化培养基和发酵条件，产酶量达到1081 U／mL。     

嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件的优化

对嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶条件进行如下优化:用单因素法优化了氮源、碳源等培养基成分及温度和初始pH值等培养条件;用三因素三水平的正交试验对氮源浓度、碳源浓度、盐离子浓度进行优化.结果发现:较低浓度的氮源、碳源有利于酶的产生,表面活性剂能明显提高酶的产量.嗜水气单胞菌产弹性蛋白酶的最佳条件:胰蛋白胨5 g·L-1,蔗糖5 g·L-1,NaCl 2.5 g·L-1,K2HPO4 2.0 g·L-1,Tween-80 1 g·L-1,初始pH为7.5,28 ℃培养48 h.     

25％噻嗪酮·异丙威可湿性粉剂对稻飞虱的田间药效

25％噻嗪酮·异丙威可湿性粉剂100g／667m^2、125g／667m^2、150g／667m^2 3种不同剂量防治稻飞虱,药后1、3、7d的防效均在81．05％-95．76％,能有效控制稻飞虱的危害。生产上推荐25％噻嗪酮·异丙威可湿性粉剂防治稻飞虱的使用剂量为125—150g／667m^2。     

竹黄多糖液态发酵培养基优化研究

[目的]为竹黄多糖的工业化生产提供理论依据。[方法]通过组织分离,从野生竹黄子实体中获得能产生竹黄多糖的无性株,然后用其进行液态发酵培养,通过摇瓶正交试验确定其最佳培养基配方。[结果]碳源、氮源、生长因子和初始pH值的影响均达显著水平（α=0．05）。其显著性依次为：碳源浓度〉生长因子浓度〉酸碱度〉氮源浓度,在交互作用中只有CGF×CN的影响达显著水平。方差分析结果表明,最佳培养基配方为：蔗糖20g／L＋酵母膏8g／L＋玉米浆2g／L,最佳初始pH值为6．0。当摇瓶装量为50／250ml（V／V）。接种量为10％（V／V）,培养温度为28℃,摇床转速为120r／min时,120h后发酵液的竹黄多糖含量为8g／L。[结论]该试验初步研究了利用竹黄无性菌株通过液态发酵生产竹黄多糖的培养基组成及培养条件。     

16％咪·唑·清热雾剂防治橡胶白粉病的效果

进行了16％咪·唑·清热雾剂防治橡胶白粉病的药效试验。结果表明：16％咪·唑·清热雾剂对橡胶白粉病有较好的防治效果．以1800g／hm^2的用量最佳,防效可达81．80％,且对作物安全,可以大面积推广使用。     

苯甲酸雌二醇对小鼠生殖器官肥大细胞的影响

为研究苯甲酸雌二醇（E2）对小鼠生殖器官肥大细胞数量和分布的影响,将4周龄小鼠随机分成2个对照组和3个试验组,每组10只（雌雄各半）,连续腹腔注射E2（0．05、0．5、5mg·kg^-1·d^-1）7d后手术采取各组睾丸、附睾、卵巢和子宫,组织经PBS配置4％多聚甲醛固定24h,石蜡包埋,5μm厚切片,采用改良甲苯胺蓝染色法（MTB）观察生殖器官中肥大细胞数量分布。结果表明,注射0．05mg·kg^-1·d^-1剂量使子宫肥大细胞增多,注射0．5mg·kg^-1·d^-1和5mg·kg^-1·d^-1剂量均使子宫肥大细胞减少;注射这3种剂量均使卵巢肥大细胞增多;注射0．05mg·kg^-1·d^-1和0．5mg·kg^-1·d^-1剂量使睾丸和附睾肥大细胞增多,注射5mg·kg^-1·d^-1剂量却使睾九和附睾肥大细胞减少。     

南极适冷菌Rheinheimera sp.97产抗菌活性物质发酵条件的优化

[目的]优化南极适冷菌Rheinheimerasp．97产抗茵活性物质的发酵条件。[方法]通过单因素和正交试验对南极适冷茵R．sp．97产抗茵活性物质的发酵培养基进行了优化,并通过单因素试验对其发酵条件进行了优化。[结果]菌株R．sp．97产抗菌活性物质的最佳培养基为：蛋白胨3．Og／L,硫酸铵1．0g／L,淀粉2．0g／L,NaCl15．0g／L;最佳发酵条件为：发酵培养基初始pH8,发酵温度10℃,摇瓶装液量30．0％（V／V）,接种量1．0％（V／V）。优化后菌株R．sp．97发酵液的抗茵活性较优化前提高了22．2％。[结论]为研究南极适冷茵R．sp．9r7的活性物质奠定了基础。     

堆肥中生物表面活性剂产生菌的筛选及培养条件优化

[目的]筛选堆肥中生物表面活性剂产生菌,优化其培养条件。[方法]采用富集培养、菌种纯化等方法从农业好氧堆肥中筛选出能产生生物表面活性剂的菌株,并采用正交试验对菌株的培养条件进行优化。[结果]从农业好氧堆肥中筛选出1株能产生生物表面活性剂的菌株BS-2,该菌株能将发酵液的表面张力降到40mN／m以下,在温度20—100℃和pH值6．0～9．5条件下,其表面张力始终保持在40mN／m以下,具有良好的表面活性及对堆肥环境的稳定性。该菌株的最佳培养条件为：可溶性淀粉25．0g/L、NH4NO3 8．0g／L、KH2PO4 2．0g／L、K2HPO42．5g／L、KCl 1．1g／L、NaCl 1．1g／L、MgSO4 0．15g／L、FeSO4·7H2O 5．0×10^-5g／L、EDTA 1．0g／L、酵母浸膏0．2g／L、初始pH值为7．0、温度为30℃、摇床转速为150r／min、发酵培养时间为3d。在该条件下,发酵液的表面张力最低,为29．3mN／m。[结论]菌株BS-2初步鉴定为枯草芽孢杆菌。