羔山羊卵泡诱导发育及活体采卵研究

注射外源FSH诱导羔山羊卵泡发育并活体采卵,比较不同来源FSH、不同采卵间隔时间、不同重复采卵次间的实验效果.结果显示:1)用5 mg新西兰产FSH(Ovagen)处理后每只羊卵巢上平均有(18.3±3.5)个可用卵泡,较中科院产FSH效果(14.9±6.7)好.2)间隔7 d或14 d进行卵泡诱导发育及活体采卵,实验效果无显著性差异.3)羔山羊共4次用5 mg FSH(Ovagen)重复诱导卵泡发育并活体采卵,随次数增加,可用卵泡数和回收可用卵母细胞数呈下降趋势;不同重复次间卵泡直径、回收卵母细胞的可用率无显著性差异(P＞0.05).4)间隔7 d多次重复采卵过程中,平均每次采卵获可用卵8.4枚,COCs回收率和可用率分别为74.2%、78.5%;不同个体间卵母细胞回收率和可用率无显著性差异(P＞0.05).结论:新西兰产FSH(Ovagen)比中科院产FSH诱导羔山羊卵泡发育效果好;手术法活体采卵可获得稳定的卵母细胞回收率和可用率,羔山羊可以进行手术法重复活体采卵且最短采卵间隔时间宜为7 d.     

不同激素添加成分和受精液对山羊卵巢卵母细胞体外成熟与受精的影响

就成熟培养液中添加成分和不同受精液对山羊卵母细胞体外成熟与体外受精的影响进行了研究.结果表明,成熟培养液中添加HCG组的卵母细胞成熟率(85.7%)极显著高于PMSG组(50%)和FSH LH组(57.1%)(P<0.01),受精率比较则HCG组(62.2%)极显著高于PMSG组(34.7%)(P<0.01),显著的高于FSH LH组(45.2%)(P<0.05);添加了17β-雌二醇的成熟培养液对山羊卵母细胞的成熟率和受精率没有明显影响(P>0.05),而添加5%山羊卵泡液的成熟培养液则使卵母细胞的成熟率和受精率明显下降,卵裂率(7,7%)却显著高于对照组(0.0%)和17β-雌二醇组(0.0%) (P<0.05);分别以TALP液、BO液、M-199液为基础液组成的三种受精液(I液、II液、Ⅲ液)中II液的受精率(62.2%)显著高于Ⅲ液(44.7%)(P<0.05),而且II液的卵裂率(21.6%)显著高于I液(9.1%)(P<0.05),极显著高于Ⅲ液(0.0%)(P<0.01).     

不同培养条件对奶牛体外受精效果的影响

为了提高奶牛体外受精效果,研究了体外成熟卵母细胞在IVF-100、BO、TALP 3种体外受精液中的受精效果,同时比较了裸卵(NOs)与卵丘卵母细胞复合体(COCs)对受精效果的影响。结果显示,体外成熟卵母细胞在受精液IVF-100中的卵裂率显著高于BO液(P0.05),而TALP液中的卵裂率与IVF-100和BO液的差异都不显著(P0.05);裸卵(NOs)的卵裂率低于卵丘卵母细胞复合体(COCs),但差异不显著(P0.05);NOs的囊胚率极显著低于COCs(P0.01)。不同受精液及有无卵丘细胞对卵母细胞的体外受精效果有明显的影响。     

改进山羊超数排卵方法的研究

实验以黑龙江地方山羊为实验材料 ,应用国产激素研究了单纯使用 FSH和 FSH结合PMSG,以及氯前列烯醇 (PG)和孕酮 (Pr)的超排和发情同步效果。结果显示 ,单纯用 FSH处理的山羊 (N=6 )平均排卵 6 .83± 1.19个 ,平均获卵 5.83± 1.0 1个 ,获卵率在 85.30 % ;用 FSH结合 PMSG处理的母羊 (N=17)平均排卵 13.94± 1.11个 ,平均获卵 10 .59± 0 .97个 ,获卵率为 78.2 0 % ;t检验证明 ,两种处理山羊的排卵和获卵数差异均显著 (P <0 .0 5) ;说明 FSH与PMSG联合使用大大提高了山羊的排卵和获卵数。尽管 PG和 Pr两种同步发情方法都使山羊在开始超排处理后 72到 96 h之间发情 ,但用 PG处理的超排山羊 (N =2 0 )发情时间更为集中 ,大多数 (70 % )都于注射 PG后 2 4～ 30 (开始超排处理后 72～ 78) h开始发情。注射 h CG(发情 )后2 4～ 30 h,70 %以上的卵母细胞都具有第一极体 ,为新排的卵母细胞 ;到 h CG后 36～ 4 0 h,只有不到 4 0 %的卵子有第一极体     

受精液种类、卵丘细胞及卵巢保存温度对奶牛体外受精效果的影响

为了提高奶牛体外受精效果,研究了体外成熟卵母细胞在IVF-100、BO和TALP三种体外受精液中的受精效果,同时比较了裸卵(NOs)与卵丘卵母细胞复合体(COCs)对受精效果的影响,卵巢的不同保存温度对卵母细胞受精效果的影响。结果显示,体外成熟卵母细胞在受精液IVF-100中的卵裂率显著高于BO液的(P0.05),而TALP液中的卵裂率与IVF-100和BO液的差异都不显著(P0.05);裸卵(NOs)的卵裂率低于卵丘卵母细胞复合体(COCs),但差异不显著(P0.05);NOs的囊胚率极显著低于COCs的(P0.01);卵巢在10和37℃下保存2~3 h,卵母细胞卵裂率和囊胚率差异均不显著(P0.05)。     

不同处理方法对波尔山羊胚胎移植效果的影响

为了提高波尔山羊繁殖力,应用两种处理方法对波尔山羊进行了同期发情及超数排卵研究。结果表明:两种处理方法(PG-FSH法与CIDR-FSH法)对波尔山羊的同期发情率无显著差异(P>0.05),波尔山羊同期发情率达到92.5%;CIDR-FSH法处理的供体卵巢上的平均黄体数及平均采卵数均显著高于(P<0.05)PG-FSH法,而两者的平均获胚数与平均可用胚数差异不显著(P>0.05),说明CIDR-FSH法对波尔山羊的超排处理效果要优于PG-FSH法。试验还表明,移胚数量对受体妊娠率无显著影响(P>0.05),而对受体产羔率有极显著(P<0.01)的影响。移植双胚可以提高受体的产羔率。     

细毛羊羔羊超数排卵及体外胚胎生产移植

[目的]研究羔羊日龄、羔羊体重、超排方法、精卵共孵育时间对细毛羔羊超排效果及卵母细胞体外受精效果的影响.[方法]用国产FS3H对4.～9周龄羔羊进行两种超排方法处理,回收可用卵母细胞1 032枚,体外受精后移植受体98只,产羔25只.[结果]不同周龄羔羊只均获卵数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05);不同激素方案处理组的发育卵泡两种处理方案在发育卵泡数上无显著差异(P＞0.05),但在回收率和可用卵数上差异显著(P＜0.05);不同体重组只均发育卵泡数和可用卵数之间差异显著(P＜0.05).[结论]4～6周龄的细毛羊羔羊超排获得卵母细胞数目较多;重复超排的羔羊超排效果不理想;同时,将受精液pH值调为7.5 ～7.6,并将精卵共孵育时间控制在22 ～26 h,卵母细胞体外受精及发育效果较好.     

山羊大腔卵泡卵母细胞的体外成熟和体外受精

从屠宰场采集卵巢。抽吸法回收2～6mm大腔卵泡卵母细胞。随机抽样后,测量其直径为167.42±17.43μp。A,B级卵泡卵母细胞进行体外成熟培养,其成熟率为67.50％。山羊新鲜精液以BO液或MD-H液处理后,与体外成熟卵母细胞进行授精,受精率分别为56.61％（17／30）和63.33％（19／30）,两组间差异不显著（P＞0.05）。BO和MD-H液均适宜于山羊精子获能处理。体外受精卵的2细胞胚发育率为16.67％（6／36）,4细胞胚发育率为2.78％（1／36）。     

山羊卵泡卵母细胞的采集及体外成熟效果研究

为了获取高质量的卵泡卵母细胞,提高山羊体外胚胎生产的效率,采用切剖法与抽吸法采集卵泡卵母细胞,并对获得的可用卵母细胞进行了体外成熟培养。结果表明,切剖法能够获得较多的可用卵母细胞,可以明显增加用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞的体外成熟率与卵泡直径密切相关,大卵泡与中卵泡的卵母细胞成熟率明显高于(P<0.05)小卵泡;山羊卵泡卵母细胞的体外成熟培养液中FCS的添加比例以10%～15%为益。在一定范围内,提高FCS的浓度,并不能提高卵母细胞的成熟率。     

不同激素和重复超排对家猫超排效果的影响

用促卵泡素(FSH)和孕马血清促性腺激素(PMSG)对橘猫进行超数排卵,手术法冲取卵母细胞,并对卵巢上的排卵点和获卵数进行统计,探讨不同激素和重复超排对橘猫超排效果的影响。结果表明:FSH组排卵点数和卵母细胞数分别为6.8和8.8个,国产PMSG组和韩国PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为5.1、7.7及6.2、8.5个, 3组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著;重复超排时,国产FSH组超排获得的排卵点数和卵母细胞数分别为3.5和5.2个,国产PMSG组排卵点数和卵母细胞数分别为3.1和4.5个,两组间排卵点数和卵母细胞数差异不显著。这一研究说明FSH和PMSG均可用于家猫超数排卵,为开展家猫胚胎工程相关研究奠定了基础。     

延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟的研究

[目的]对延边奶山羊羔羊超数排卵及体外成熟进行研究.[方法]以延边奶山羊为试验对象,研究不同超排方案对羔羊卵泡发育的影响,比较了羔羊超排处理后与成年母羊卵巢内的卵母细胞体外成熟的差异.[结果]延边奶山羊的最佳超排方案为CIDR＋PMSG 800 IU注射1次＋FSH（加拿大）20 IU/次,间隔12 h注射6次;宁波产FSH超排效果不稳定,卵泡回收率低.成年母羊卵母细胞的体外成熟率显著高于母羔羊超排卵母细胞.[结论]该研究为建立延边奶山羊JIVET技术体系提供依据.     

山羊卵泡卵母细胞的采集与体外成熟研究

为了建立针对山羊卵母细胞的理想体外成熟培养体系,研究了山羊卵泡卵母细胞的采集方法和采集获得的可用卵母细胞的体外成熟培养条件,结果表明:切割法能够获得较多的可用卵母细胞,且明显增加了用于体外成熟的卵母细胞数;卵母细胞在37.0℃下培养的成熟率显著低于在38.5℃、39.0℃下培养的成熟率(P＜0.05);卵母细胞培养18 h和培养20h的成熟率极显著低于培养24 h和培养26 h的成熟率(P＜0.01);此外,卵母细胞体外成熟培养时,培养液中的胎牛血清添加量以10%～15%为宜.     

羔羊超数排卵及体外受精技术研究

用FSH+ PMSG和FSH+LH 2种处理方法,对8只6周龄的高山细毛羊进行超数排卵试验,4只作对照组,并对采集到的卵子进行体外受精,探索羔羊超数排卵的可行性及体外受精的效果.结果表明:2组处理共获得发育卯泡583个,回收卵母细胞255枚.卵母细胞经体外培养24 h后与上游法获能的精子进行体外受精,48 h后2组处理...     

山羊卵母细胞的体外成熟研究

1.比较了在卵母细胞成熟液中添加相同浓度(10ng/ml)的表皮生长因子(EGF),胰岛素样生长因子(IGF),EGF IGF后,不同生长因子对卵母细胞体外发育率的影响。结果表明,在成熟培养液中添加EGF后,其卵母细胞的成熟率(70.9%)与对照组(67.3%)相比有所提高,但差异不显著;在成熟培养液中分别添加IGF、EGF IGF,其卵母细胞的成熟率分别为80.0%,82.4%,显著高于对照组卵母细胞的成熟率(67.3%)。2.比较了不同季节采集的卵母细胞在体外成熟的情况。结果发现,12月份到来年的1月份,采集的卵母细胞,其体外成熟率最高,为81.0%;11月份采集的卵母细胞,其体外成熟率次之,为74.1%;3—5月份和9—10月份采集的卵母细胞,其体外成熟率为66.0%、69.6%;6—7月初采集的卵母细胞,其体外成熟率最差,为54.7%。3.比较了OM液pH值对卵母细胞体外成熟的影响。当OM培养液的pH值为7.2和6.8￣7.0时,卵母细胞成熟率的为66.2%和61.0%,显著高于pH≥7.5时的成熟率(50.9%,P<0.05)。     

奶山羊精子体外获能与体外受精

供体用FSH+LH超排,卵母细胞从注LH后约30h回收。将获能精子与10枚卵母细胞在受精液(mDM+输卵管上皮细胞)和培养液(mDM+30％供体羊血清)中连续培养(38℃)24h后,有6枚卵受精,抛出第二极体。将6枚受精卵移植到3只受体中,有1只妊娠,产出1只试管母山羊。初步表明,本试验的奶山羊精子体外获能与体外受精程序是简便而有效的。     

波尔山羊羔羊超数排卵及体外受精的研究

本试验探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精效果。应用4种不同的促性腺组合,对16只7周龄的波尔山羊进行超排,并对采集的卵子实施体外受精。共获得卵母细胞918枚,其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49,87,429,293枚,各组间差异显著（0．01〈P〈0．05）。卵母细胞进行体外培养24h后与上游法获能的精子体外受精,48h后各组的卵裂率分别为27％,21％,60．2％,69％,其中CIDR＋PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）;6d到10d各组囊胚率分别为7％,6．5％,18％,13％,PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、CIDR＋PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）。结果表明,CIDR＋FSH处理组和CIDR＋PMSG＋FSH处理组能显著提高超排效果,两组获得的卵子受精后的卵裂率和囊胚率高于其他组。     

保存温度对卵母细胞体外成熟率的影响及牦牛卵母细胞体外成熟培养方式初探

【目的】探索不同卵巢保存温度对卵母细胞体外成熟的影响以及两种培养方式对牦牛卵母细胞体外成熟的影响。【方法】通过对绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛卵母细胞进行体外成熟培养,比较两种保存温度对5种卵母细胞成熟率的影响,并以牦牛卵母细胞为研究对象比较两种培养方式对牦牛卵母细胞成熟率的影响。【结果】卵巢保存温度为20～25℃时,山羊卵母细胞体外成熟率显著高于卵巢保存温度26～30℃(P=0.021)。蒙古牛卵巢保存于20～25℃时,其卵母细胞成熟率极显著高于卵巢保存在26～30℃(P=0.001)。保存温度为20～25℃时,绵羊、牦牛和奶牛的卵母细胞体外成熟率都较高于卵巢保存温度为26～30℃时的成熟率。另外,牦牛卵母细胞在四孔板中成熟培养的成熟率与在35 mm培养皿中成熟率并没有显著差异(P=0.65)。【结论】绵羊、山羊、牦牛、蒙古牛和奶牛的卵巢保存于20～25℃为宜,该卵巢保存温度可提高卵母细胞体外成熟率。牦牛卵母细胞在四孔板中培养的成熟率高于在35 mm培养皿中成熟率。     

中国黄牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

自屠宰场和临时屠宰的黄牛体内取卵巢2批共25次,黄牛97头,共得可用卵巢卵母细胞657个。用TCM—199加雌激素(FSH、LH、雌二醇—17β)培养于5％CO_2与95％空气的39℃的CO_2培养箱中,使第1批成熟率达到55.04％,第2批成熟率达到61.7％。第1批受精率达到61.97％,移于兔输卵管中发育到卵裂,移于羊输卵管中发育到晚期桑桩胚和早期囊胚。第2批废卵率为38.3％;第10次的体外培养发育率为23.8％;羊输卵管培养发育率达到91％。利用肝素(0.005mg/ml)使精子获能,授精时的精子浓度为25×10~6/ml。用小滴培养法(小滴量为50μl)加盖无菌石蜡培养。结果证明中国老龄黄牛的卵巢还是有利用价值的。     

屠宰山羊卵母细胞的体外成熟培养

屠宰白山羊卵巢在２５～３５℃下于２～３小时运回实验室。每个卵巢获可培养卵丘细胞－卵母细胞复合体（ＣＯＣ）０４２个（１９３４５６）；可培养ＣＯＣ在Ｍ１９９＋ｈＣＧ１ＩＵｍｌ＋１７－β－雌二醇１μｇｍｌ＋牛血清白蛋白１０ｍｇｍｌ＋庆大霉素５０ＩＵｍｌ的培养微滴中于５％ＣＯ２、空气、饱和湿度或标准气（５％ＣＯ２、５％Ｏ２、９０％Ｎ２）、饱和湿度，３９℃培养２４～２６小时，卵母细胞成熟率为９０３％（１８６２０６）。成熟卵母细胞体外受精率为７１５％（１３３１８６）。结果表明此培养系统适合于屠宰白山羊卵母细胞的体外成熟培养     

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。