小分子硫醇对延边黄牛体细胞核移植重组胚发育的影响

探讨了在延边黄牛体细胞核移植重组胚早期培养液中添加L-半胱氨酸和β-巯基乙醇(β-ME)两种小分子硫醇类抗氧化剂,对其后续发育的影响,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:适合延边黄牛体细胞核移植重组胚后期发育的L-半胱氨酸和β-巯基乙醇的最佳浓度分别为0.6 mmol/L和50μmol/L。     

谷胱甘肽对卵母细胞成熟及胚胎发育影响的研究进展

体外成熟期间谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的合成对卵母细胞及胚胎的发育有很重要的作用.GSH是属于含有巯基的、小分子肽类物质,具有抗氧化作用和整合解毒作用,GSH能激活细胞内多种酶,如巯基(-SH)酶-辅酶等,从而促进糖类、脂肪及蛋白质代谢,并能影响细胞的代谢过程.本研究就有关GSH的相关研究进行综述,探讨其在卵母细胞成熟及胚胎发育过程中的作用.     

自由基吸收类抗氧化剂对延边黄牛体细胞克隆重构胚发育的影响

为提高延边黄牛体细胞克隆重构胚发育率,研究了在体外培养液中单独添加不同浓度的自由基吸收类抗氧化剂维生素E(VE)、表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)和亚硒酸钠(SS)对克隆重构胚发育率的影响。试验中选择成熟培养20～22h的卵母细胞,脱颗粒细胞后选择排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核操作,然后将融合、激活后的重构胚在添加不同种类不同浓度抗氧化剂的体外培养液中进行培养。结果表明,在卵裂率上,VE的100μmol.L-1组显著高于其他3组(84.58%vs 57.64%、70.87%、67.64%);50和200μmol.L-1组之间无差异,但都显著高于0μmol.L-1组(70.87%、67.64%vs 57.64%)。EGCG的7.5和15μmol.L-1组显著高于加0μmol.L-1组(79.47%、81.67%vs 69.47%)且其他2组间差异不显著。SS的添加,5ng.mL-1组与0和10ng.mL-1组有显著差异(80.44%vs 70.27%、67.16%);与2.5ng.mL-1组差异不显著(80.44%vs 73.92%),且其他2组间差异不显著;在囊胚发育率上,VE的100μmol.L-1组要显著高于其他3组(26.36%vs 13.04%、18.08%、17.26%)。EGCG的15μmol.L-1组显著高于0和30μmol.L-1组(24.86%vs 8.99%、12.10%),和7.5μmol.L-1组无差异。SS的5与0组和10ng.mL-1组有显著差异(23.31%vs 10.32%、12.65%);2.5ng.mL-1组与0和10ng.mL-1l组有显著差异(19.97%vs 10.32%、12.65%)且其他2组间差异不显著。体外培养液中分别单独添加浓度为100μmol.L-1、15μmol.L-1和5ng.mL-1的维生素E,EGCG和亚硒酸钠都能够显著提高延边黄体细胞克隆牛重构胚的发育率。     

金属螯合剂对延边黄牛体细胞核移植重组胚发育的影响

由于在核移植试验中,所用的水和化学物质都不可避免的会被一些金属离子轻微污染,造成胚胎内抗氧化物和过氧化物之间难以保持平衡,从而导致胚胎发育率降低,本试验以此为出发点,探讨了在延边黄牛体细胞核移植重组胚早期培养液中添加乙二胺四乙酸钠（EDTA-Na）和柠檬酸钠（sodium citrate）2种金属螯合剂类抗氧化剂,对其后续发育的影响,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明：适合延边黄牛体细胞核移植重组胚后期发育的EDTA-Na和柠檬酸钠的最佳浓度分别为50μmol/L和0.6mmol/L。     

嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响

[目的]提高卵母细胞体外成熟率及其后续发育能力。[方法]以延边奶山羊为试验对象,活体采卵所获得的卵母细胞为材料,利用核成熟抑制剂HX和IBMX分别进行体外成熟培养,研究嘌呤核苷类核成熟抑制剂对延边奶山羊卵母细胞体外成熟的影响。[结果]所有浓度HX和IBMX均可有效维持卵母细胞停留在GV期且呈剂量依赖性逐渐升高。最适宜延边奶山羊卵母细胞成熟的HX和IB-MX添加浓度分别为2和0.2 mmol/L。[结论]该研究可为延边奶山羊的转基因和体细胞克隆试验等提供稳定的成熟卵母细胞来源。     

激素在现代生殖调控技术中的发展与应用

动物的生殖过程主要是由生殖激素调控的。这种调控是精密严格的,深入研究生殖激素对于畜牧生产具有重要的指导意义。综述了几种重要的生殖激素以及生长因子的来源和生物学特性等,并对影响生殖的因素进行了总结。     

化学辅助去核法对延边黄牛卵母细胞去核率及其重构胚发育率的影响

为提高延边黄牛体细胞克隆的效率,采用化学辅助去核法--化学诱导剂脱羰秋水仙碱(Demeeoleine,简称Deme)处理体外成熟的MⅡ期延边黄牛卵母细胞,经显微操作构建重构胚后观察发育情况.试验研究了,Deme的处理浓度、作用时间对延边黄牛卵母细胞去核效果及其重构胚发育的影响.结果显示:体外成熟的卵母细胞在0.2μg/mL、0.3 μg/mL、0.4 μg/mL的Deme溶液中处理45 min,显核率与去核率无显著差异,去核率达100%,但是0.2 μg/mL处理组的囊胚发育率显著高于其他处理组;45 min处理组的显核率显著高于30 min、60 min处理组,45 min处理组的囊胚率高于其他处理组;化学辅助去核法的囊胚率显著高于盲吸法.化学辅助去核能够准确定位去除细胞核,并提高了延边黄牛体细胞克隆的去核率及重构胚的体外发育率.     

谷氨酰胺对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

为了提高延边黄牛体细胞克隆重组胚发育率,研究了在体外培养液中添加不同浓度的谷氨酰胺对克隆重组胚发育率的影响.试验中选择成熟培养20～22 h的卵母细胞,脱颗粒细胞后选择排出第一极体的卵母细胞进行去核与注核操作,然后将融合、激活后的卵母细胞在添加不同浓度谷氨酰胺的体外培养液中进行培养.结果显示,体外培养液中添加浓度为1....     

牛卵母细胞显微操作机械去核方法的比较

分别采用挤压去核法、盲吸去核法和点击去核法对延边黄牛卵母细胞进行去核操作,在操作时间、成功率、去核率及重组胚后期发育等方面进行比较.结果表明,去核率上,盲吸法低于其他2种方法;去核成功率上,挤压法和点压法高于盲吸法;操作耗时上,挤压法和盲吸法耗时较短;3种方法所构建的重组胚卵裂率以及囊胚发育率均差异不显著.因此,挤压去核法是一种较适合延边黄牛卵母细胞去核的有效方法.     

抗凋亡因子cFLIP在延边黄牛性周期黄体中表达的研究

为了研究延边黄牛黄体中抗凋亡因子(Cellular FLICE-like inhibitory protein:cFLIP)的变化情况及其与细胞凋亡的关系,本实验采用免疫染色方法,观察cFLIP在延边黄牛周期黄体中的表达变化,并从组织化学角度分析了cFLIP作为抗凋亡因子参与延边黄牛的黄体退化。