毛发皮质醇激素作为慢性应激评定指标的研究进展

将毛发皮质醇激素作为反映慢性应激程度的黄金标准具有前瞻性和创新性。毛发皮质醇激素不仅可用于检测及估计动物慢性应激程度,且有助于了解动物体生理病理过程,并及时制定行之有效的健康管理策略。血液、唾液、尿液及乳汁中皮质醇激素含量作为反映急性应激程度的模型,被用于检测和建立持续的皮质醇激素昼夜循环规律研究。而毛发作为一个很好的补充模型却可以回顾性地反映慢性应激程度。毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标不仅具有采样应激小、检测灵敏、方便的优点,而且是可遗传性状(h²=0.31),可以作为下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)活性标记,进而利用其解释遗传变异对慢性应激中HPA轴活性变化的影响程度。作者综述了皮质醇激素与动物体健康的关系,慢性应激下机体调节机理及遗传适应改变,慢性应激评定指标研究进展,毛发作为皮质醇激素研究模型的研究进展,以及毛发皮质醇激素作为反映慢性应激的生化指标的限制与未来面对的挑战。     

不同冷冻保护剂对黑熊成纤维细胞冷冻效果的影响

选用含有不同浓度的3种冷冻保护剂:二甲基亚砜(DMSO)、乙二醇(EG)、甘油(GC),对黑熊耳皮肤成纤维细胞进行冷冻保存,筛选出最佳冷冻保护剂和最佳浓度.用台盼蓝对解冻复苏的细胞进行染色,分析细胞活力,以细胞活率和24 h贴壁率评价冻存效果.结果表明:二甲基哑砜添加浓度7.5%和10%差异不显著,与其他组差异显著;甘油添加浓度10%和15%差异不显著,与其他组差异显著;乙二醇添加浓度15%显著高于其他组.研究结果显示,二甲基亚砜浓度为7.5%对黑熊耳部成纤维细胞冷冻效果最好.     

延边黄牛体细胞克隆囊胚中总基因组RNA的提取

以延边黄牛体细胞克隆囊胚为试验材料,采用试剂盒GMS12106的使用方法提取试材的总基因组RNA,在琼脂糖凝胶电泳检测后,得到最适的囊胚数为5个。通过试验发现,生殖细胞的特殊生理结构限制了RNA提取的效果。为提取完整、纯度高的RNA,采用链蛋白酶对囊胚的透明带进行了消化处理,最终得出链蛋白酶处理的最适时间为10min,提取的RNA质量好,可为后续试验奠定基础。     

末期去核在牛体细胞核移植中的应用

受体卵母细胞的去核对核移植的效率起决定性作用。很多去核方法已经应用到体细胞核移植当中,并且成功地产生了核移植胚胎。通常我们使用第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞作为受体细胞进行去核,但是去核效率很低。虽然使用荧光染料和紫外线的照射来完成去核程序可以提高去核效率,但是这些措施有损害细胞质的危险。所以,一种避免使用DNA染料和紫外线照射又能提高去核效率的末期去核方法被发展起来了。本文详述了牛卵母细胞末期去核方法在体细胞核移植中的应用,为从事哺乳动物克隆研究的学者提供参考。     

延边黄牛体细胞克隆融合条件的研究

以体外成熟培养22-24h的延边黄牛卵母细胞作为受体,颗粒细胞为供核细胞,挤压法去核,注入供体颗粒细胞到卵黄周隙中,甘露醇融合液中施加20μs时长的电脉冲刺激使之融合,复合化学方法激活,从融合前恢复培养时间、融合电场强度、甘露醇浓度等3个方面研究延边黄牛体细胞克隆的适宜融合条件．结果表明,2．5h处理组的融合率（70．9％）显著高于4．0h处理组（58．2％,P〈0．05）,2．5h处理组重组胚的卵裂率（77．9％）显著高于其它4组（P〈O．05）,其它各组间差异不显著（P〉0．05）;融合电场强度1100V／cm处理组的融合率（86．4％）显著高于900V／cm处理组（67．1％）和1200V／cm处理组（75．2％,P〈O．05）,重组胚的卵裂率（84．6％）显著高于900V／cm处理组（69．6％,P〈O．05）,囊胚发育率（26．1％）显著高于900V／cm处理组（10．0％）,1200V／cm处理组（8．0％,P〈O．05）;不同浓度的甘露醇对融合率和重组胚的卵裂率没有明显的影响,但是0．28mol／L组囊胚发育率（25．3％）显著高于0．25mol／L组（15．3％,P〈0．05）．因此,适合延边黄牛体细胞克隆的融合条件为融合前恢复培养2．5h,0．28mol／L甘露醇作为融合液,电场强度1100V／cm．     

谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟及重组胚发育的影响

为了提高卵母细胞的成熟率及重组胚胎的发育率,在体外成熟液中添加了不同浓度的谷氨酰胺,研究谷氨酰胺对延边黄牛卵母细胞成熟的影响,并观察它对重组胚胎后续发育的影响,从中筛选出最佳的体外培养条件。结果表明,1.0 mmol/L的谷氨酰胺能够显著提高卵母细胞的成熟率,同时也能提高囊胚发育率。说明谷氨酰胺能够提高延边黄牛卵母细胞的体外成熟率,并能促进囊胚发育。     

小分子硫醇对延边黄牛体细胞核移植重组胚发育的影响

探讨了在延边黄牛体细胞核移植重组胚早期培养液中添加L-半胱氨酸和β-巯基乙醇(β-ME)两种小分子硫醇类抗氧化剂,对其后续发育的影响,以期筛选出最佳的体外培养条件。结果表明:适合延边黄牛体细胞核移植重组胚后期发育的L-半胱氨酸和β-巯基乙醇的最佳浓度分别为0.6 mmol/L和50μmol/L。     

延边黄牛体细胞克隆早期胚胎端粒酶活性的测定

为了解延边黄牛体细胞克隆早期胚胎发育过程中端粒酶活性的变化规律,采用实时荧光定量PCR法检测体细胞克隆早期胚胎及卵母细胞端粒酶活性.研究结果表明,端粒酶活性在未成熟卵母细胞相对水平较高,2-细胞至16-细胞胚胎的端粒酶活性总体水平相对较低(P<0.05),桑椹胚的端粒酶活性总体水平显著升高(P<0.05),在囊胚阶段达到最高.     

牛磺酸对延边黄牛体细胞克隆重组胚发育的影响

研究了体外培养液中添加不同浓度的牛磺酸对重组胚发育率的影响。试验中设计了4个牛磺酸浓度组,分别是0、7.0、14.0、21.0 mmol/L。各浓度组之间的卵裂率没有差异,其中低浓度组7.0 mmol/L的囊胚发育率较其他组高,随着浓度的上升囊胚发育率逐渐降低。体外培养液中添加牛磺酸的最佳浓度为7.0 mmol/L,能够显著提高延边黄牛体细胞克隆牛重组胚的发育率。     

谷胱甘肽对卵母细胞成熟及胚胎发育影响的研究进展

体外成熟期间谷胱甘肽(Glutathione,GSH)的合成对卵母细胞及胚胎的发育有很重要的作用.GSH是属于含有巯基的、小分子肽类物质,具有抗氧化作用和整合解毒作用,GSH能激活细胞内多种酶,如巯基(-SH)酶-辅酶等,从而促进糖类、脂肪及蛋白质代谢,并能影响细胞的代谢过程.本研究就有关GSH的相关研究进行综述,探讨其在卵母细胞成熟及胚胎发育过程中的作用.