响应面分析法优化酶法提取小米谷糠蛋白工艺

采用酶法提取小米谷糠蛋白,对小米谷糠进行脱胶、脱脂处理,以提取率为考察指标,从5种蛋白酶中筛选最适酶制剂.采用单因素试验和响应面试验优化酶的添加量、作用时间、作用温度、浸提pH值,得出对谷糠蛋白提取率的影响.结果表明,小米谷糠蛋白的最佳提取率对应的工艺条件如下:添加0.7％碱性蛋白酶,调节pH值为9,于50℃提取1.8 h,提取率为72.29％.由此可见,用碱性蛋白酶提取谷糠蛋白是一种高效的方法.     

响应面法优化酶法提取麦麸膳食纤维工艺

研究了酶法提取麦麸膳食纤维工艺.通过氨基态氮含量筛选了最适蛋白酶;可溶性糖含量分析了混合酶配比,最适pH和温度.然后以膳食纤维的持水性、得率为响应值,采用响应面法优化酶法提取麦麸膳食纤维的工艺.结果表明:木瓜蛋白酶为该工艺的最适蛋白酶;混合酶中α-淀粉酶与糖化酶质量最佳比值为1∶3,混合酶最适pH值为3.6,最适温度为45℃;响应面法优化工艺参数为蛋白酶用量0.4%,蛋白酶反应时间60 min,混合酶用量0.5%;混合酶反应时间30 min,持水性达到8.87714 g·g-1,得率达到71.6985%.     

小白链霉菌武夷变种HWM DNA的制备及最适酶切条件确定

为构建小白链霉菌武夷变种(Streptomyces albulus var. wuyiensis)的细菌人工染色体(bacterial artificial chromosomes,BAC)文库,提取了小白链霉菌武夷变种高分子量DNA(high molecular weight DNA,HMW-DNA)。用低熔点琼脂糖(low melting point agarose,LMP)包埋小白链霉菌武夷变种菌丝球,胶块经溶菌酶、蛋白酶K、两种限制性内切酶(BamHI、Hind III)处理后,使用箝位匀强电场(CHEF)凝胶电泳检测DNA片段大小。电泳结果显示提取HWM DNA完整,满足构建BAC文库的条件,确定了最适酶切条件为Hind III0.2 U酶切10min,为小白链霉菌武夷变种功能基因的研究奠定了基础。     

鲢鱼蛋白质酶水解最佳工艺条件的研究

以酸法提取的鲢鱼蛋白为原料,采用复合蛋白酶进行酶解,研究了底物浓度、酶解时间、酶解温度及反应pH对蛋白酶水解鲢鱼蛋白的影响,通过正交试验确定最佳酶解条件优化水解工艺。结果表明:复合蛋白酶水解鲢鱼蛋白的最适条件为:底物浓度2%,温度55℃,pH值7.5,酶解时间55 min,优化后的水解液蛋白质回收率约为50.88%。     

木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶对牛肉的嫩化效果研究

蛋白酶具有水解肌纤维膜和肌原纤维蛋白质作用,故其作为肉类嫩化剂应用广泛,但不同的蛋白酶具有较强的专一性。本文采用化学提取法分别从木瓜及菠萝中提取出木瓜蛋白酶及菠萝蛋白酶,分析其酶活性,并通过对照R1、木瓜蛋白酶处理R2和菠萝蛋白酶处理R3的牛肉样品感官、镜检及剪切力等指标的对比研究了两种酶对牛肉的嫩化效果。结果表明:本试验提取的菠萝蛋白酶活力(8 752.7±3.3 U·g~(-1))高于木瓜白酶(6 348.0±2.6 U·g~(-1)),二者均具有较好的嫩化效果,牛肉综合感官效果和牛肉纤维断裂程度的镜检结果均表现为菠萝蛋白酶处理R3木瓜蛋白酶处理R2对照R1,剪切力则为对照R1木瓜蛋白酶处理R2菠萝蛋白酶处理R3。综合说明,本试验提取的菠萝蛋白酶对牛肉的嫩化效果优于木瓜蛋白酶,这与所提取的酶活力结果一致。     

水解小麦蛋白对蛋白质风味影响研究

试验通过利用碱性蛋白酶和酸性蛋白酶对小麦蛋白进行水解,采用不同水解时间、水解温度处理,得到碱性蛋白酶最佳水解时间为4.5 h,酶解温度为50℃;然后在最适水解度下测定游离氨基酸的含量,并进行比较,通过游离氨基酸量的变化来研究蛋白质风味的变化.     

红肉桃果实总RNA提取方法的研究

以红肉桃果实为材料,采用Unizol总RNA提取试剂盒、CTAB法、冷酚法和改良SDS法4种方法分别提取果皮和果肉中总RNA,以期获得提取红肉桃果肉中总RNA的最适方法。比较,发现改良后的SDS法更适合于红肉桃果实总RNA的提取。此方法所得RNA完整性好,纯度和浓度均较高,可用于RT-PCR分析研究及后续实验。     

无花果蛋白酶的不同提取方法比较及酶学性质研究

以无花果叶为原料,对乙醇沉淀、单宁沉淀和盐析沉淀3种方法提取的无花果蛋白酶进行了比较。结果表明,乙醇沉淀法操作简单,提取的无花果蛋白酶易分离纯化,比酶活最高,蛋白酶的回收率达47.99%,总纯化系数为2.05。无花果蛋白酶反应的最适温度为65℃,最适pH值为7.0,当pH值为6.5和8.5时酶活性稳定,Km值约为0.656 0 g/L。     

香菇多糖提取条件的优化研究

研究了采用微波协同高压热水浸提法从香菇中提取活性多糖的最适条件。通过单因素试验和正交试验,探讨了料液比、微波功率、微波处理时间、高压浸提时间及高压浸提温度对香菇多糖提取率的影响,并以香菇多糖提取率为评价指标,优化提取工艺。试验结果表明,微波协同高压热水浸提法提取香菇多糖的最适条件:料液比为1∶50(g∶mL),微波功率为640 W,微波处理时间为6 min,高压浸提温度为115℃,高压浸提时间为100 min。在此条件下,香菇多糖的提取率为13.8%。     

黑木耳多糖提取条件的研究

研究了黑木耳多糖的不同提取方法。结果表明,采用超声波协同酶解并结合高压热水浸提法可显著提高多糖的提取率,其最适提取条件为:浸提剂倍数为50,超声波功率为120W;复合酶反应最适pH值为5,最适温度为50℃,添加量为1.5%,反应80 min;蛋白酶反应最适pH值为6,最适温度为50℃,添加量为2.0%,反应60 min;高压热水浸提温度1150C,浸提80 min。黑木耳多糖提取率可达16.82%。     

双酶水解法提取水溶性苦瓜多糖的研究

采用水提醇沉法从苦瓜中提取出水溶性多糖 ,经除小分子物质、除色素、脱蛋白后 ,通过DEAE 3 2柱的进一步纯化 ,得到单一组分。对其进行理化性质检测 ,证实其为多糖 ,并命名为PMCⅠ。继而在苦瓜水溶性多糖的浸提及脱蛋白过程中分别加入纤维素酶和中性蛋白酶 ,通过正交实验确定其最佳水解条件分别为 :纤维素酶 ,提取温度 5 0℃ ,pH值 6.0 ,酶用量 5 % ;中性蛋白酶 ,水解时间 48h ,pH值 7.0 ,酶用量 10 %。通过双酶法与常规法的比较表明 ,双酶法提取水溶性苦瓜多糖 ,不仅使提取的工艺条件更为温和 ,并且多糖的产率及含量均有显著提高。因此 ,酶法提取PMCⅠ为从药用植物、真菌及果蔬中提取分离有效成分开辟了新的思路与途径。     

花生子叶RNA提取方法比较与分析

以HY22组培苗为材料,比较改良胍酸酚抽提法、改良CTAB法及离心柱式试剂盒法提取RNA的效果,以筛选出适合花生子叶RNA提取的方法。结果表明：试剂盒法由于样品在通过离心柱时会出现阻塞现象,易使RNA提取结果受到较大影响,而改进后的胍酸酚抽提法与改良CTAB法则能避免该情况且更节约成本;经紫外分光光度法与电泳检测,改进后的两种方法的RNA提取效果均较好;RT—PCR结果表明,提取的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学实验。     

一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法

在药用植物中开展分子生物学研究时的常见困难是RNA提取困难,提取的RNA质量不能满足下一步试验要求。探索了一种适用于地黄不同组织器官的RNA提取方法并对提取的RNA质量在随后的分子生物学中进行了检验。结果证实通过该方法提取的RNA纯度和完整性较好,完全可以满足后续的分子生物学实验要求,也可以作为其它药用植物RNA提取的参考方法。     

3种芹菜茎组织总RNA提取方法的比较研究

[目的]为了获得质量较好的芹菜茎的总RNA,为后续分子生物学试验提供基础。[方法]试验对1种RNA提取方法(Trizol法)和2种RNA提取试剂盒(RNA prep Pure Plant Kit法、RNA simple Total RNA Kit法)方法进行比较研究。[结果]RNA prepPure Plant Kit方法得率低,且OD260/OD280值低于1.8,Trizol法OD260/OD230高于2.0,且得率低于RNA simple Total RNA kit法。只有RNA simple Total RNA kit法提取的RNA质量最好,得率最高。[结论]与Trizol法和RNA prep Pure Plant Kit法相比,RNA simple Total RNA Kit法提取的芹菜茎总RNA得率高,完整性好,凝胶电泳泳道无杂质,可以满足半定量RT-PCR的试验需要。     

木耳总RNA提取方法研究

为了获得木耳总RNA理想的提取方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以木耳菌丝为试验材料,采用了CTAB法、RNA prep pure Plant Kit试剂盒和 Trizol法3种方法提取木耳总RNA。结果表明3种方法均能从木耳菌丝中提取分离到总RNA,然而Trizol 法能提取到纯度较高、完整性较好的总RNA,28S及18S带型清晰无弥散,A260/A280值为191,RNA 产率为68264 μg·g-1,提取的总 RNA 适用于 RT PCR等分子生物学试验研究。     

富含多糖多酚的侧柏叶片总RNA提取方法

以侧柏叶片为试验材料,利用Trizol法、CTAB法、SDS酚法和改进的SDS酚法提取RNA,结果表明:Trizol法和CTAB法都不能提出侧柏叶片总RNA;SDS酚法提取,提取物中含有大量多糖,提取的RNA质量少,不足以用于后续的研究;改进的SDS酚法提取的RNA纯度高,电泳效果好.进一步通过反转录和特异引物扩增试验发现:利用改进的SDS酚法提取的RNA反转录效果好,能扩增出预期的基因片段,可很好地应用于基因克隆与基因表达分析等分子生物学试验研究.     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法

笔者采用改良CTAB法从富含多酚的无核荔枝幼胚中提取总RNA,并用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计对所提RNA质量进行检测,旨在为多糖、多酚含量较高的植物材料RNA的提取提供一种有效方法。     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法（英文）

A total RNA extraction method for young embryo of seedless litchi was introduced.CTAB,Phenol(saturated with water),chloroform,Guanidine isothiocyanate were used as main extraction reagents.Polyphenolic compounds were removed effectively by added PVP into the extraction buffer solution.RNA was purified intensively by phenol,chloroform extraction,and ethanol deposition after deposited by LiCl.Both the results of formaldehyde denatured agarose gel electrophoresis and ultraviolet spectrophotometer analysis showed high integrity and purity of RNA.So the quality of extracted RNA could meet the demand of most molecular biology experiments that require higher quality RNA.     

新型试剂-D．S．G在烟草RNA提取与纯化中的应用

核酸提取是分子生物学实验的基础,提取高质量的核糖核酸(RNA)是构建cDNA文库和进行基因表达研究工作的前提。笔者比较了TRIREAGEN法、D.S.G法、异硫氰酸胍氯化铯密度梯度分离法、D.S.G和TRIREAGENT结合法、TRIREAGENT和D.S.G结合法等5种烟草RNA提取方法,结果表明D.S.G和TRIREAGENT两种试剂的配合使用均可有效地去除烟草植物细胞壁中的多聚糖及其它成份,获取较高质量的RNA。这说明新型试剂-D.S.G与TRIREAGENT的配合使用有利于获得高质量的RNA,但D.S.G单独使用效果并不佳。