适合金银花不同组织总RNA提取方法的筛选

对Trizol法、CTAB法、十二烷基磺酸钠(SDS)法、多糖多酚试剂盒法、改良多糖多酚试剂盒法5种RNA提取方法提取金银花叶片、茎、根、花蕾组织RNA的效果进行比较,以期获得质量较好的金银花不同器官的RNA,为后续分子生物学试验奠定基础。结果表明:改进后的多糖多酚试剂盒法能够克服金银花中RNA提取难度大的问题,能够提取到质量、产量都很高的RNA,且稳定性好、无DNA污染,可以满足进一步的半定量反转录PCR(RT-PCR)等试验需要。     

越橘果实总RNA提取方法比较研究

越橘成熟果实富含多糖、多酚和花色素苷等次生代谢物质,严重影响果实总RNA的提取.试验以越橘成熟果实的果肉和果皮为试材,采用适合多糖多酚植物RNA提取试剂盒及试剂和改良的CTAB法提取越橘果肉和果皮中总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白测定仪(NanoDrop 2000)检测.结果表明,改良的CTAB法效果最好,提取的总RNA完整性好,纯度高.通过RT-PCR验证,所提取的总RNA可以满足基因克隆等分子生物学试验的要求.     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

观赏海棠不同组织中RNA的几种提取方法

以观赏海棠不同组织为试材,用常用的CTAB法、异硫氰酸胍法及Tris-硼酸法,比较其提取RNA的质量和纯度。结果表明:CTAB法提取RNA成本低、RNA质量较高;异硫氰酸胍法提取RNA的质量好、纯度高、提取效率高;而Tris-硼酸法则较不适合于果实类多酚多糖组织的RNA提取。     

人参根组织RNA提取方法的研究与优化

针对人参根组织中多酚和多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB-LiCl法、pBIOZOL植物提取试剂法、植物RNAout法和优化的Trizol法4种RNA分离提取方法。结果表明:4种方法均能从新鲜的多年生人参根组织中分离提取到总RNA。其中优化的Trizol法能有效地抑制多酚和多糖对总RNA提取的影响,能从成熟的根组织中获得完整性好的总RNA,每克人参根组织RNA产量为100～120μg,OD260/OD280为1.8～2.0,OD260/OD230为2.0～2.3。     

一种改进的鸭梨总RNA提取方法

本文介绍了一种适应于鸭梨RNA提取的方法。该方法是在常规CTAB法的基础上,在植物匀浆中缓缓加入100%的乙醇2.5 ml,消除了梨皮中DNA、多糖、多酚和其它次生代谢物的污染,提取得到了高纯度、完整性较好的RNA,得到的RNA量大约是改进前的2倍,且上样孔无糖类物质干扰。该方法适合于富含多糖、多酚的植物RNA的提取,试剂简单经济,实验结果稳定。     

富含多糖·多酚植物组织RNA的提取

[目的]介绍一种适合于富含多糖、多酚植物材料的RNA提取方法。[方法]采用改进的异硫氢酸胍法提取植物材料的RNA,用紫外分光光度计测定其浓度和纯度,并通过RT-PCR进一步检测其质量。[结果]提取总RNA中的28、18、5s条带清晰,比例适中,OD260nm/OD280nm。为1．8—2．0。以提取的总RNA反转录合成的cDNA为模板,能扩增出预期长度的片段,无非特异性产物。[结论]该方法简便易行,成本较低,适合于富舍多糖、多酚植物材料的RNA提取。     

顽拗植物龙眼果皮中总RNA的提取方法研究

【研究目的】为建立适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA提取的方法;【方法】采用TRIzoL法、Tris-硼酸法和改良CTAB法提取龙眼果皮的总RNA。并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质;【结果】改良CTAB法、Tris-硼酸法所提取的RNA经电泳检测。28SrRNA和18SrRNA条带清晰。RT-PCR得到的条带与目的片断大小一致。说明所提取的RNA纯度高、质量好;TRJZOL法所得到的RNA降解严重,没有得到完整的电泳条带;【结论】改良CTAB法和Tris-硼酸法适于富含多糖和多酚等物质的龙眼果皮总RNA的提取。     

番茄果实RNA提取方法比较

从富含多糖、多酚的番茄果实中提取高质量的总RNA,对进行下一步分子生物学研究至关重要。采用CTAB-LiCl法和Trizol法分别对番茄果实的总RNA进行提取和分析。结果表明,CTAB-LiCl法提取的总RNA产量低,而且有基因组DNA的污染;Trizol方法提取的RNA产量相对较高,很少有基因组DNA污染。     

观赏山梨叶片总RNA的提取及质量分析

为了从富含多糖和多酚等物质的观赏山梨幼叶中提取和分离出高质量的RNA,利用Trizol法、改良的Trizol法、异硫氰酸胍法、硼砂-CTAB法和硼砂-SDS法提取观赏山梨叶片总RNA。通过RNA产率、纯度、电泳图谱和RT-PCR结果等分析来确立适用于观赏山梨RNA分离的方法。结果表明,硼砂-SDS法提取的RNA呈现出28S rRNA,18S rRNA和5S rRNA三条较清晰的条带,RNA的得率和纯度均较高、很少有降解。RT-PCR结果进一步证实了硼砂-SDS法提取的观赏山梨叶片总RNA可用于分子生物学的下游试验。此方法简便易行,成本也较低,适合于富含多糖、多酚植物材料RNA的提取。另外4种方法获得的RNA得率、纯度较低,降解严重,有较多小分子和盐存在,因此不适合用于观赏山梨总RNA的提取。     

一种有效提取无核荔枝幼胚总RNA的方法（英文）

A total RNA extraction method for young embryo of seedless litchi was introduced.CTAB,Phenol(saturated with water),chloroform,Guanidine isothiocyanate were used as main extraction reagents.Polyphenolic compounds were removed effectively by added PVP into the extraction buffer solution.RNA was purified intensively by phenol,chloroform extraction,and ethanol deposition after deposited by LiCl.Both the results of formaldehyde denatured agarose gel electrophoresis and ultraviolet spectrophotometer analysis showed high integrity and purity of RNA.So the quality of extracted RNA could meet the demand of most molecular biology experiments that require higher quality RNA.     

醋酸铵法提取卵形鲳鲹基因组DNA

建立了一种简便、安全、经济的提取卵形鲳鲹基因组DNA的方法,即醋酸铵法。该方法采用7.5mol·L~(-1)醋酸铵代替酚、氯仿,通过高盐-SDS去除蛋白和多糖,异丙醇在一定浓度醋酸铵存在条件下选择性沉淀DNA,而不沉淀蛋白,并通过酶切和AFLP验证该法抽提的DNA纯度。该法提取的DNA质量较高,无蛋白质和RNA污染,较酚/氯仿法和试剂盒法抽提得到量多,酶切和AFLP试验结果表明,提取的DNA可用于酶切分析和分子标记等试验。此法安全、简便、经济,该方法更适合于对大量样品的提取。     

2种提取猪肝基因组DNA方法的比较

[目的]对2种猪肝基因组DNA提取方法,进行比较研究。[方法]分别采用试剂盒法和常规的氯仿／异戊醇抽提法,提取新鲜猪肝基因组DNA,并对其进行综合分析。[结果]试剂盒方法得到的DNA浓度较低,其OD260nm／OD280nm比值达到2.05,虽然蛋白质除的较干净,但是含RNA较高;而氯仿／异戊醇抽提法得到的DNA浓度高,其OD260nm／OD280nm比值1.88,纯度较高,且成本低。[结论]氯仿／异戊醇法对猪肝基因组DNA提取效果优于试剂盒法。     

Trizol法提取厚皮甜瓜果实RNA条件的筛选

采用改良的Trizol法提取厚皮甜瓜‘银帝’果实中的RNA.利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法和RT-PCR法进行纯度、浓度和RNA完整性检测.结果表明:1 mL Trizol用于提取200 mg甜瓜果实量时,得到的RNA产量最大,氯仿抽提2次时提取到的RNA的A260/A280在1.9~2.0之间,所提取的RNA无蛋白质和DNA污染,室温沉淀和低温沉淀对RNA的产量无明显影响.将提取的RNA反转录后扩增β-actin基因片段,扩增的条带与设计大小一致,验证了该方法提取的RNA可用于RT-PCR.     

松辽黑猪脏器总RNA提取方法的改进及应用

[目的]改进松辽黑猪脏器总RNA的高效快速提取方法,为检测脏器组织RNA提供基础。[方法]采用液氮研磨,利用Trizol使细胞膜破裂,并通过氯仿、异丙醇、无水乙醇处理,使RNA与杂质分离,得到高质量的RNA。[结果]得到的松辽黑猪脏器总RNA浓度和纯度都比较高,并且未被降解。[结论]该方法提取的RNA质量没有DNA污染、纯度高、没有降解、完整性好,稳定可靠,并且用时少。     

饱和苯酚-氯仿抽提法与Chelex-100树脂法提取DNA在研究犬STR基因座多态性中的应用比较

在研究犬STR基因座多态性中,比较使用了饱和苯酚-氯仿抽提法和Chelex-100树脂法,两种方法提取的DNA在扩增后的检测结果均能准确地反映实验结果。尽管从平均峰面积和平均峰高值等指标上,利用Chelex-100树脂法提取的DNA质量和扩增后的检测效果较饱和苯酚-氯仿抽提法差,但Chelex-100树脂提取法更为简单快捷,适合在建立警犬STR基因座等位基因数据库中和犬亲缘关系鉴定中广泛使用。     

适宜于实验教学的动物组织总RNA提取的操作方法

为探索适宜于实验教学的动物组织总RNA的提取方法,采用氯仿处理实验器皿、耗材和水以降低外源性RNA酶对RNA的降解作用。结果表明,操作过程中合理利用氯仿能够有效降低外源性RNA酶的污染;与DEPC水处理效果相比,提取的总RNA均可用于分子生物学研究和RT-PCR扩增,但使用氯仿处理更为安全。     

质粒DNA提取的简便方法

以质粒pBR322为对象,在经典的质粒提取方法的基础上进行了一些改进,将酚氯仿异戊醇抽提和氯仿异戊醇抽提省去。比较了简便方法和经典方法提取质粒的效果,结果显示:两种方法均能够提取出质粒DNA,RNA的量并没有比经典方法提出来的多;简便方法抽取的质粒,蛋白含量稍稍多于后者;简便方法节省了大约一半的提取时间及大量的药品,并且减少了有害的化学物质对人体的危害,是一种经济实用的方法,完全可以满足一般实验需要。     

无氯仿提取小麦半籽粒DNA的方法

为克服从小麦叶片提取DNA用于PCR受季节的限制以及氯仿不易购买等问题,研究以从叶片中提取的以及用氯仿从小麦籽粒中提取的DNA为对照,用无氯仿方法提取小麦籽粒中的DNA,并用多重PCR进行检测。结果表明,用无氯仿方法提取的DNA浓度比从叶片中提取的和用氯仿提取的DNA浓度要低,而且用无氯仿方法提取的DNA扩增效果稍差,但该问题可通过增加上样量或采用聚丙稀酰胺凝胶电泳等途径来解决。因此,无氯仿小麦籽粒DNA提取方法可在对DNA质量要求不高以及氯仿无法及时得到时使用。     

候鸟基因组DNA分离方法优化

候鸟分子生物学研究的前提是获得质量好的基因组DNA,采用标准血液DNA提取试剂盒和苯酚-氯仿法分别对采自鄱阳湖的部分候鸟血液进行基因组DNA提取。结果表明,这2种标准方法所获得DNA质量均不合要求,因此在苯酚-氯仿法基础上开展优化试验,得到优化后的苯酚-氯仿法提取条件为组织裂解液500μL、血液样品20μL、蛋白酶K 10μL和酶解时间8 h,在此条件下能分离到高质量的基因组DNA。