生物工程专业酶工程课程教学改革研究与实践

“酶工程”是生物工程专业的主干课,其教学内容涵盖酶学理论基础知识、酶制剂生产工艺及酶的应用.为了使酶工程教学适合创新型人才培养模式,通过优化课程教学内容、改进实践教学方法和手段等措施,有效地提高了酶工程教学的课堂效率和学生的自学能力,加强了学生对综合知识运用、分析解决实际问题的能力及自主创新意识     

抗逆生防木霉筛选及其相关因子诱导

对供试各木霉菌株经303、5、404、55、0℃保温24 h后,于28℃培养6~7 d,进行耐高温菌株筛选。结果表明,耐高温生防木霉菌株T-30经热激后可产生抗逆蛋白,且表达量较大。对高温抗逆蛋白进行DEAE-32及Sephadex G-100柱层析得到单一蛋白洗脱峰。SDS-PAGE电泳发现该抗逆蛋白含有2个亚基,分子量分别为30和42 kD。酶学检测发现,该高温抗逆蛋白有几丁质酶活力,其最适pH值为5.0,最适温度为50℃,Km值为0.91 mg/ml,对Na+有较强的耐受性。     

枯草芽孢杆菌防治植物真菌病害研究进展

介绍了枯草芽孢杆菌防治植物真菌病害的研究进展,阐述了枯草芽孢杆菌生防机制、育种及发酵培养研究概况。讨论了目前枯草芽孢杆菌在生防研究中存在的问题及发展前景。     

营养添加剂对枯草芽孢杆菌G3 str在土壤中繁殖及其抑菌物质分泌能力的影响

从生防菌G3菌株筛选到的抗链霉素自然突变株G3^str,保持G3原有的抑菌活性,产伊枯草菌素和生物表面活性素,能抑制多种植物病原真菌.25℃下,营养添加剂对G3^str菌在不灭菌土壤中前5d有一定的增殖作用;10d后G3^str菌在土壤中主要以芽孢的形态存活;60d后,G3^str菌在土壤中仍以106cfu/g水平存活.G3^str菌在土壤中增殖时分泌少量的伊枯草菌素,但被快速分解;同时分泌较多的生物表面活性素,营养添加剂的加入明显促进其分泌.     

耐碱锰超氧化物歧化酶（Mn-SOD）基因工程菌的构建及其表达条件研究

利用PCR技术以Bacillus sp.110-2基因组DNA为模板,扩增出606 bp编码锰超氧化物歧化酶的基因Mn-sodA,将其连接到原核表达载体pET-30a(+),得到重组载体pET-sodA,重组载体在大肠杆菌BL21(DE3)中经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导得到表达。SDS-PAGE分析显示融合表达产物的分子量大小为26.5k Da,同核酸序列测定的推导值相符。对含有sodA的基因工程菌表达情况研究表明：重组蛋白全部以可溶性形式存在;重组酶的比活力252 U/mg,为原始菌株的2.1倍,目的基因在大肠杆菌中实现了高效表达;而且,重组酶还保留了野生型酶显著的耐碱能力。BL21（pET-sodA）基因工程菌的构建一方面提供了一种可利用的耐碱蛋白资源,另一方面探索了一种极端酶的生产方法。     

耐碱Mn-SOD基因克隆与真核表达载体的构建

以高产耐碱Mn-SOD产生菌Bacillussp.110-2总DNA为模板,通过PCR扩增得到耐碱Mn-SOD基因,编码一个完整的开放阅读框,共202个氨基酸,含18个碱性氨基酸,包括12个赖氨酸和6个精氨酸。与地衣芽孢杆菌同源性为99%,与极端耐碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)同源性为78.7%。克隆片段酶切后,插入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPIC9K中,获得毕赤酵母真核表达载体pPIC9K-SOD。     

“头脑风暴法”在酶工程参与式课堂教学中的应用

如何将理论知识的学习转变成探索型学习过程,进而激发学生的学习主动性和创造性,始终是高等教育课堂教学需要探讨的热点问题。本文阐述了"头脑风暴法"在《酶工程》课程中的应用及其优势,并在课堂教学、讨论和点评过程中,注重以学生为主体,利用"头脑风暴法"等教学方式,引导学生深入思考,培养学生的创造性和解决实际问题的能力以及团队合作的精神,此教学模式对高校开展实践创新高素质人才培养大有裨益。     

木霉生防耐药因子的诱导及其生化特性研究

为了研究以含药(施佳乐)培养基筛选和诱导生防木霉菌株T-21产生耐药性生防蛋白因子———几丁质酶的效果。利用含药(施佳乐)培养基筛选诱导生防木霉菌株T-21产生几丁质酶,通过DEAE 32纤维素柱层析法进行分离纯化,用SDS-PAGE测定其分子量,并分析温度和pH值对酶活力的影响以及耐药酶对灰霉菌的抑制作用。生防木霉菌株T-21对化学农药施佳乐具有一定的抗性,浓度达1 000μg/ml时生长及产孢情况良好。通过分离纯化的几丁质酶,其分子量为45 kD,其最适反应温度为50℃,最适pH值为5.0,对灰霉菌有明显抑制作用。生防木霉菌株T-21产生的几丁质酶,可与化学杀菌剂混合使用,以增强田间的防治效果、减少化学农药的用量,进而减少化学农药对农作物的污染及残留。     

中性β-葡萄糖苷酶基因表达载体的构建

利用RT-PCR方法从芽孢杆菌Bacillus Subtilis CY110中克隆出β-葡萄糖苷酶基因,将此目的基因连接到pBS-T载体后导入大肠杆菌DH5α。测序结果表明,获得的目的基因片段大小为1 398 bp,该序列与Gen-Bank中的β-葡萄糖苷酶基因ABQN01000006.1序列相比同源性达到99.8%,氨基酸序列同源性达到99.5%。将产物与pET-28 a表达载体连接,经双酶切检验,证明原核表达载体构建成功。