重组牛生长激素对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的影响

将３０７枚Ａ、Ｂ级卵丘－卵母细胞复合体（ＣＯＣ）分别培养于：改良ＴＣＭ１９９＋ＦＳＨ（１０μｇ／ｍｌ）＋ＬＨ（２０μｇ／ｍｌ）＋２０％ＮＣＳ（Ａ液）、Ａ液＋重组牛生长激素（ｒｂＧＨ）１５ｎｇ／ｍｌ、改良ＴＣＭ１９９＋ｈＣＧ（２０μｇ／ｍｌ）＋ｒｂＧＨ＋２０％ＮＣＳ三种培养基中，获得５３１％、６７９％和６３５％的成熟率。结果表明，ｒｂＧＨ对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟是有益的。     

白山羊COC细胞质密度对卵母细胞体外培养成熟率和体外受精率的影响

按白山羊卵丘细胞—卵母细胞复合体（ＣＯＣ）的细胞质密度的不同，将其分成Ａ、Ｂ两个级别：Ａ级ＣＯＣ细胞质特别致密；Ｂ级ＣＯＣ细胞质比较致密。将Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ分别放入相同的环境条件下培养２４～２６小时。Ａ、Ｂ两级ＣＯＣ的卵母细胞成熟率差异极显著（ｔ＝３．１６２５，Ｐ＜００１）。表明白山羊ＣＯＣ的细胞质密度与卵母细胞体外培养成熟率呈极显著正相关。Ａ级和Ｂ级ＣＯＣ经体外成熟培养后，其成熟卵母细胞的体外受精率差异不显著。     

无籽西瓜组培快繁技术初步研究

在无菌苗上切取带子叶的顶芽接种在增殖培养基上，可以促进芽的大量增殖。增殖芽在Ｍ（改良ＭＳ）＋ＢＡ１５ｍｇＬ＋ＩＢＡ０２５ｍｇＬ＋ＬＨ２５０ｍｇＬ培养基上培养２５～３０天，一个芽可扩增为５～１３个无根芽苗。无根芽苗转入Ｍ＋ＩＢＡ０３ｍｇＬ＋ＬＨ５００ｍｇＬ培养基上培养２０～２５天，生根率达８９５％～９１４％，茎蔓高为１５～７ｃｍ，８０％以上可作接穗。嫁接成活率８６５％，嫁接苗移栽田间成活率为９３５％。再生植株染色体仍为三倍体（３ｎ＝３３）。果实品质优良，无籽。     

体内外成熟与老化对小鼠卵激活刺激敏感性的影响

小鼠体外成熟卵母细胞组的乙醇激活率显著低于体内成熟卵母细胞组水平,在体外成熟过程中（培养液：ＴＣＭ－１９９＋ＦＣＳ（２０％）＋ｈＣＧ（２ＩＵ／ｍｌ））卵丘细胞的存在极显著地降低了成熟卵的乙醇激活率,卵激活率由５８．７％（裸卵）降为１３．８％（卵丘卵母细胞复合体）超排卵子随着卵龄的增加,卵子的乙醇激活率逐渐升高,而且体内卵的激活率高于体外老化同龄组的水平。     

水牛卵母细胞孤雌激活方法研究

对体外成熟（ＩＶＭ）２７￣２８ｈ的水牛卵母细胞经７％酒精（ＥＨ）激活处理５ｍｉｎ后,置入不同浓度的（０,０．６２５μｇ／ｍｌ,１．２５μｇ／ｍｌ,２．５μｇ／ｍｌ,５μｇ／ｍｌ）放线功酮（ＣＨＸ）培养１０ｈ,而后固定染色或在胚胎培养液（ＣＭ）中继续培养检查激活分裂率。结果培养在０．６２５μｇ／ｍｌ和１．２５μｇ／ｍｌ ＣＨＸ的卵母细胞的激活分裂率和总原核形成率明显高于对照组（Ｐ〈０．０５）,而培养     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ,１７β－Ｅ２,ＦＳＨ,ＬＨ对山羊卵泡卵母细胞成熟的作用,及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明,添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ,１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２,２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟,并放出第一极体。而成熟培养２０,２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５）,核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟,对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数为１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。     

牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了ＦＣＳ,１７β－Ｅ２,ＦＳＨ,ＬＨ对牛卵泡卵母细胞成熟的作用及培养时间对卵母细胞核和细胞质成熟的影响。结果表明,添加体积分数为１０％～１５％的ＦＣＳ,１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２,２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ和１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ有利于提高卵母细胞核成熟,放出第一极体。而成熟培养２０,２４ｈ的卵母细胞成熟率显著高于培养１６ｈ（Ｐ＜０．０５）,核成熟后培养３～４ｈ有利于卵母细胞质成熟,对其后的受精、卵裂及胚胎的进一步发育有重大影响。且ＴＣＭ１９９＋质量分数１０％～１５％的ＦＣＳ＋１～２ｍｇ·Ｌ－１１７β－Ｅ２＋１０ｍｇ·Ｌ－１ＦＳＨ＋２０～５０ｍｇ·Ｌ－１ＬＨ是卵母细胞成熟的理想培养系统。     

山羊小腔卵泡卵母细胞的体外受精试验

抽吸法采集２￣６ｍｍ山羊卵巢大腔卵泡卵母细胞后，以１．５ｍｍ间距纵横切割卵巢，回收（２ｍｍ小腔卵泡卵母细胞。随机测量其直径为１２９．８６±１８．８４μｍ。将２１８枚卵丘细胞层致密完整的卵母细胞分别培养于含颗粒细胞并用２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ缓冲的①ＴＣＭ１９９＋１％ＧＳ，②①＋ＦＳＨ，ＬＨ（１０μｇ／ｍＬ）＋１７β－Ｅ２（１μｇ／ｍＬ），③②＋ＩＴＳ（５μｇ／ｍＬ Ｉｎｓｕｌｉｎ，Ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉ     

猪安氟醚麻醉的血流动力学变化

应用无创伤性连续心排血量监测仪 （ Ｂ Ｏ Ｍ Ｅ Ｄ Ｎ Ｃ Ｃ Ｏ Ｍ ３） 监测猪在不同浓度安氟醚麻醉时血流动力学参数的变化。结果显示： 随着安氟醚吸入浓度的升高, 平均动 脉压 （ Ｍ Ａ Ｐ） 下降５５６％ ～３０４７％ （ Ｐ ＜ ００１）; 射血速 率指数（ Ｅ Ｖ Ｉ） 下降２３０２％ ～４５３２％ （ Ｐ ＜ ００５～００１）; 心搏出量 （ Ｓ Ｖ） 和每搏指数 （ Ｓ Ｉ） 分别下降２１３２％ ～４９１９％ 和２５３０％～５２０４％ （ Ｐ ＜ ００５～００１）; 心率 （ Ｈ Ｒ） 在吸入麻醉过程中显著低于基础值, 但在吸入１５和２０最低肺泡有效浓度（ Ｍ Ａ Ｃ） 时不再继续下降; 心输出量 （ Ｃ Ｏ） 和心脏指数 （ Ｃ Ｉ） 分别下降１９４９％ ～４７１８％ 和２４２７％ ～５１４６％ （ Ｐ ＜００１）; 射血速率指数／胸腔液体指数 （ Ｅ Ｖ Ｉ／ Ｔ Ｆ Ｉ） 下降２１２５％ ～４８０８％ （ Ｐ ＜ ００１）; 心室射血时间 （ Ｖ Ｅ Ｔ） 虽有延长但差异不显著; 胸腔液体指数 （ Ｔ Ｆ Ｉ） 未见明显变化。实验结果表明, 安氟醚对猪心血管功能的抑制与吸入浓度有关。     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过体外受精试验检验了肝素和羊血清在绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显著（５０％ＶＳ１４．７％Ｐ＜０．０５）;获能液ＳＯＦＭ＋２０％ＳＳ中再加入５、１５、２５ＩＵ／ｍｌ肝素可明显增强获能效果,所得卵裂率（８１．４％,８０．４％,８１．３％）与不加肝素的对照组（４６％）相比,差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

猪卵泡液和胎牛血清对猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响

本研究探讨了猪卵泡液(pFF)和胎牛血清(FCS)对猪小腔卵泡卵母细胞体外成熟的影响。将猪小腔卵泡(直径<2mm)卵母细胞-卵丘复合体(COCs)以15～35枚为一组随机置于添加不同浓度(0、5%、10%、20%)pFF(试验一)或不同浓度(0、5%、10%、20%)FCS(试验二)的改良TCM-199成熟液中培养44～48h,观察卵母细胞的核成熟率和卵丘扩散情况。试验一结果显示,成熟液中添加10%pFF与对照组和添加5%、20%pFF组相比,显著提高猪小腔卵泡卵母细胞的核成熟率(28 2%比20 5%、20 9%、22 3%;p<0 05);添加5%和20%pFF组与对照组相比,它们的小腔卵泡卵母细胞核成熟率之间差异不显著(p>0 05);添加5%pFF组的COCs卵丘细胞呈现第3类扩散,添加10%和20%pFF组的COCs卵丘细胞呈现第4类扩散,而不添加pFF的对照组的COCs卵丘细胞呈现第2类扩散。试验二结果显示,成熟液中添加10%FCS与对照组和添加5%、20%FCS组相比,明显提高猪小腔卵泡卵细胞的核成熟率(60 0%比37 5%、40 2%、43 9%;p<0 05);添加5%和20%FCS组与对照组相比,它们的小腔卵泡卵细胞核成熟率之间差异不显著(p<0 05);FCS在COCs体外成熟培养的前22～24h促进了卵丘扩散(3个处理组的COCs卵丘细胞呈现第3类扩散,而对照组COCs的卵丘细胞呈现第2类扩散)。研究结果表明:(1)成熟液中添加pFF可促使猪小     

屠宰山羊卵巢有腔卵母细胞体外培养

以屠宰奶山羊的新鲜卵巢为材料,利用抽吸法和切割冲卵法相结合,回收可培养卵丘-卵母细胞复合体(COC),回收率为1 43个/卵巢。将可培养COC置于M199+FBS培养液(10%)+10IU/mLFSH+20μg/mLLH培养微滴中,在5%CO2、95%空气、饱和湿度的CO2培养箱中,不同温度下培养24～26h。于38 0℃、38 5℃、39 0℃不同温度下,获得成熟率分别为82 1%,81 6%,83 3%。结果表明只要培养温度在山羊正常体温的变化范围内,则有腔卵母细胞的体外成熟率就没有明显差异。     

孕马血清促性腺激素对狗卵母细胞体外核成熟的影响

[目的]研究孕马血清促性腺激素(PMSG;eCG)对狗卵母细胞体外成熟效果的影响。[方法]采用切割法收集卵巢表面卵丘卵母细胞复合体(COCs),并且随机分为4组,在添加不同浓度的PMSG的基础培养液(含有10%胎牛血清的DMEM)中,5%CO2,38.5℃培养箱内培养48 h。在含有0.1%透明质酸酶的D-PBS中用细小玻璃管剥离卵丘细胞从而获得裸卵,为了鉴别核成熟期,用4%甲醛溶液固定裸卵15 min,然后用10μg/ml Hoechst33342染色、压片,荧光显微镜下观察核形态。[结果]体外培养48 h后,添加PMSG处理组卵丘扩散明显,但发育到MⅠ-MⅡ的比率都没有显著差异(P(0.05)。100 IU/ml PMSG处理组GVBD期率显著低于对照组。[结论]添加PMSG改善了卵丘扩散的效果,但是没有提高核成熟率,需进一步改进狗卵母细胞体外成熟率的培养体系。     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

中国黄牛卵巢卵母细胞体外成熟与体外受精的研究

自屠宰场和临时屠宰的黄牛体内取卵巢2批共25次,黄牛97头,共得可用卵巢卵母细胞657个。用TCM—199加雌激素(FSH、LH、雌二醇—17β)培养于5％CO_2与95％空气的39℃的CO_2培养箱中,使第1批成熟率达到55.04％,第2批成熟率达到61.7％。第1批受精率达到61.97％,移于兔输卵管中发育到卵裂,移于羊输卵管中发育到晚期桑桩胚和早期囊胚。第2批废卵率为38.3％;第10次的体外培养发育率为23.8％;羊输卵管培养发育率达到91％。利用肝素(0.005mg/ml)使精子获能,授精时的精子浓度为25×10~6/ml。用小滴培养法(小滴量为50μl)加盖无菌石蜡培养。结果证明中国老龄黄牛的卵巢还是有利用价值的。     

颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响

试验系统研究了颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为68.3%、45.6%和6.1%,组间差异显著(P<0.05),卵裂率分别为41.5%、8.1%和0,差异显著(P<0.05)。对照组和15×104个/ml、150×104个/ml颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为65.9%、60.2%和64.6%,无显著差异(P>0.05),但均显著高于1 500×104个/ml(50.0%)和1.5×108个/ml(30.3%)颗粒细胞组(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系统卵母细胞成熟率为75.8%,显著高于150×104个/ml颗粒细胞条件培养液组(63.4%)和M199培养液组(66.7%)(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系卵裂率为50.0%,显著高于150×104个/ml条件培养液组(36.7%)和M199培养液组(38.2%)(P<0.05)。     

卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响

 以屠宰场牛卵巢为材料，研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1：按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体（COCs）分为4个试验组：＞8 mm组、2～8 mm组、腔前卵泡（PF）卵母细胞组和混合（将前3种卵母细胞混合）组。结果表明，卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育，同时，源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养，可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2：将源自优势卵泡（＞8 mm）、小卵泡（2～8 mm）和混合（所有卵泡液混合）的牛卵泡液（BFF），按照10%添加到成熟培养液中，3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05)，但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连，易于造成丢失。试验3：与未添加BFF的对照组相比，成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF，均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05)，但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此，成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。     

颗粒细胞去除方法对猪成熟卵母细胞冷冻效果的影响

采集新鲜猪卵巢表面直径2～5 mm的卵泡中卵丘-卵母细胞复合体,采用透明质酸酶消化法和机械法去除成熟卵母细胞外围的颗粒细胞后进行冷冻,解冻后观察其形态正常率和二乙酸荧光素染色存活率,探讨去除颗粒细胞的方法对猪成熟卵母细胞冷冻效果的影响.结果表明:卵母细胞冷冻-解冻后,其形态正常率和存活率均显著降低;酶消化法和机械法去除部分颗粒细胞后的卵母细胞,经冷冻-解冻后形态正常率分别为90.6%和90.2%,两者差异不显著;而存活率分别为49.3%和43.9%,两者显著差异.     

卵丘细胞对活体取卵来源的裸卵在体外成熟中的作用

本文探讨了卵丘细胞对活体取卵(ovumpickup,OPU)来源的裸卵在体外成熟中的作用。实验分3组:自然裸卵组(NO),裸卵独自成熟培养;共成熟组(CM),自然裸卵与A级卵丘卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes,COCs)共成熟培养;非裸卵组(NN),正常AB级COCs成熟后,去除卵丘再进行体外受精与体外培养。结果显示:NN组的成熟率最高,其卵裂率及囊胚率高于NO组,但与CM组相似;CM组的成熟率与NO组没有显著差异,但卵裂率和囊胚率均比NO组高。表明OPU来源的裸卵和A级COCs共成熟能显著改善裸卵的发育能力;卵丘细胞对卵母细胞的促成熟作用可直接作用于裸卵,促进裸卵的成熟及随后的发育。