牛兔异种体细胞以兔卵母细胞为核受体的牛体细胞克隆研究

随着同种动物克隆后代的不断降生,人们又开始尝试异种动物体细胞核移植。用兔的卵母细胞作为核受体进行牛的体细胞核移植,研究表明,颗粒细胞作为供核体与兔去核卵母细胞的融合率(60.5%,57.9%)稍高于皮肤成纤维细胞的融合率(52.2%,48.4%),但两者间差异并不显著。颗粒细胞与皮肤成纤维细胞均采用饥饿培养和接触抑制培养两种不同的方式进行诱导处理,融合卵在电激活后能够卵裂并发育的情况差异显著(72.6%对51.4%;70.4%对52.2%)。有少数重构胚发育至囊胚,证明在哺乳动物异种重构胚早期发育中,异种细胞核与细胞质间是相容的。     

羊妊娠诊断的研究进展

羊的妊娠诊断,尤其是早期妊娠诊断,对及时发现空怀母羊,提高母羊的繁殖率有着重要意义。本文对羊妊娠诊断的几种方法进行了归纳和总结。     

黄淮杜泊羊线粒体DNA遗传多态性研究

线粒体DNA遗传变异丰富,是研究群体遗传多样性的重要手段。通过对黄淮杜泊羊、杜泊羊、鲁西黑头羊和小尾寒羊的线粒体D-loop遗传变异进行检测,分析4个品种的遗传多样性和品种间的遗传分化,构建系统发育树,并计算4个品种的遗传关系和遗传距离。结果表明,黄淮杜泊羊群体遗传多样性丰富（单倍型多样度h=0.984 21,核苷酸多样度P_i=0.015 50）,遗传稳定;系统发育树黄淮杜泊羊的黑头群体和白头群体聚为一类,与鲁西黑头羊、杜泊羊和小尾寒羊明显区分;黄淮杜泊羊与杜泊羊遗传距离最近（0.055）、与小尾寒羊遗传距离最远（0.070）,且黄淮杜泊羊与鲁西黑头羊、杜泊羊和小尾寒羊品种间遗传分化程度大。说明黄淮杜泊羊的遗传多样性丰富、遗传分化程度高,在遗传上明显区别于鲁西黑头羊、杜泊羊和小尾寒羊,黄淮杜泊羊黑头和白头群体的遗传一致,且群体遗传稳定,试验结果与育种设计方案相吻合,说明黄淮杜泊羊具备了新品种的遗传条件。     

牛Oct4基因克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

为了克隆奶牛Oct4基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生逆转录病毒质粒pMSCV-Oct4的包装细胞株.我们以50～60日龄的胎牛原始生殖嵴为材料,用RT-PCR的方法扩增出牛Oct4基因全序列,全长为1 083 bp与GenBank公布的序列的同源性为99.4%.将其插入到逆转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,获得重组逆转录病毒质粒pMSCVneo-Oct4.鉴定正确后,通过Lipofectamine2000将其转导入包装细胞PT67,用含有G418的培养液进行抗性筛选,获得阳性细胞克隆.细胞上清经过RT-PCR、透射电镜及病毒滴度测定等方法鉴定,证实所包装病毒存在,其滴度值为8.83×107 cfu/mL.试验结果表明我们已获得携带牛Oct4基因的高滴度感染性逆转录病毒.     

奶牛干细胞多能性基因Nanog和Lin28克隆分析及其逆转录病毒表达载体的构建与包装

以50~60日龄的Holstein奶牛胎儿原始生殖嵴组织为材料,通过RT-PCR的方法克隆奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框(ORF)全序列。序列全长分别为903 bp和618 bp。所克隆的奶牛Nanog与Lin28基因序列与GenBank中已经发表的参考序列进行比对同源性均为100%。将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到反转录病毒载体pMSCVneo的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,应用lipofectamine2000介导转染PT67包装细胞,经过14 d G418连续抗性筛选,挑选抗性集落扩大培养。收集病毒上清经过RT-PCR与透射电镜检测,并用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果表明,病毒上清中含有逆转录病毒颗粒,Nanog与Lin28基因在筛选后的包装细胞PT67细胞中均有转录,病毒上清感染滴度值分别达到7.5×107cfu/mL和9.19×107cfu/mL。结果表明,本试验已经成功克隆出奶牛Nanog与Lin28基因开放性阅读框全序列,并建立高效、稳定产生包含有pMSCV-Nanog与pMSCV-Lin28质粒的感染性病毒颗粒的包装细胞株,为进一步产生奶牛诱导性多能干细胞(Induced pluripotentstem cells,iPSCs)奠定基础。     

良种肉牛MOET育种技术的研究

研究期间,通过MOET育种技术,选育出良种肉牛80头,其中德国 黄牛42头,皮埃蒙特牛20头,比利时蓝白花牛18头     

微卫星标记在家畜遗传育种上的应用

<正> 微卫星(microsatellite)标记是20世纪80年代末期发展起来的一种新型的分子遗传标记。近年来,随着国内外学者对其结构、遗传特性等研究的不断深入,人们发现它具有数量多、分布广、多态性丰富、呈孟德尔共显性遗传、检测快速方便等许多优点,越来越多被应用于动植物的遗传育种研究中,加速了动植物的遗传育种进程。1 微卫星标记的特性 微卫星又称简单序列重复(SSR),或称短串联重复(STK)。这是一类由几个核苷酸(一般2～4个)为重复单位,重复10～20次的串联重复序列。这些串联重复序列由于重复次数的不同而造成序列长度的多态性,因此称之为简单序列长     

牛胚胎移植、冷冻及一步解冻技术

供体牛应选择品种优良、生产性能好、遗传性能稳定、谱系清楚、体质健壮、繁殖机能正常、无遗传性和传染性疾病的种牛，年龄在15月龄到10岁以内为宜。若供体牛的数量多时，应对供体牛进行同期化发情处理，便于集中冲卵。     

奶牛重复超排试验观察

为探讨中国荷斯坦牛多次重复超排的效果,对9头供体奶牛进行6次重复超排,每次超排间隔3个月左右,采胚47头次,生产可用胚胎292枚,平均每头次冲胚获可用胚6.2枚。每批获可用胚胎数依次为49,50,46,48,55,44枚。可用胚胎数并未随超排次数的增加而呈现下降趋势,说明荷斯坦牛以3个月的间隔多次重复超排是可行的。