猪伪狂犬病的净化条件

●伪狂犬病基因缺失疫苗:　　1.　自然弱毒疫苗(缺失部分gE基因)　　2.　基因工程缺失疫苗(双缺失:TK、gE)　　●鉴别诊断技术:　　gE-ELISA　区分疫苗免疫动物和野毒感染动物。疫苗免疫接种是防制和控制乃至根除伪狂犬病的根本措施。早期的猪伪狂犬疫苗大多为弱毒苗和灭活苗,弱 毒苗和灭活苗在预防控制伪狂犬病方面 虽然能起一定的作用,但是弱毒苗不能防 止病毒在动物体内的复制和排出,即存在 着毒力返强和散毒的危险;而灭活苗虽然 安全性较好,但其免疫效率却较低,免疫时用量较大、有时还可能导致注射部位肿胀,出现过敏反应。因此…     

广南县一起非典型性猪伪狂犬病的诊治

正猪伪狂犬病病毒(PRV)属于疱疹病毒科猪疱疹病毒属,是引起家畜和某些野生动物发病的传染病病毒[1],对猪的危害最大,每年给养猪业造成巨大的经济损失。随着人们对猪伪狂犬病的重视程度越来越高,猪伪狂犬病疫苗的推广应用,几乎所有养猪场都进行猪伪狂犬病疫苗免疫,因此,典型的猪伪狂犬病越来越少。然而由于疫苗质量高低不一,免疫程序不合理,生物安全体系不完善等原因,猪伪狂犬病野毒在云南养猪场时有存在。     

猪伪狂犬疫苗研究进展

目前,疫苗接种是预防、控制甚至消灭猪伪狂犬病主要的措施之一。国内外已研制出猪伪狂犬病的灭活疫苗、弱毒疫苗、基因缺失弱毒疫苗已经相对成熟,而病毒载体重组疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗尚处于实验室研究阶段。本文对猪伪狂犬疫苗做简要综述。一、灭活疫苗灭活疫苗是将猪伪狂犬病毒接种于鸡胚或细胞,当病毒滴度达到要求时收获病毒,灭活后加入免疫     

我国规模化猪场对猪伪狂犬病的控制

猪伪狂犬病是由猪伪狂犬病病毒引起的一种急性传染病。规模化猪场应根据野毒感染的严重程度采取切合实际的控制策略,疫苗免疫是重要的控制手段。常规灭活苗、常规弱毒苗、基因缺失疫苗都有不同的特点和使用范围,经过分析国内规模化猪场使用基因缺失疫苗是最好的选择。笔者在免疫程序及方式方面对有争议的问题如首免日龄、超前免疫、免疫间隔时间、滴鼻免疫等进行了分析;强调了免疫监测的重要性。提出了规模化猪场净化猪伪狂犬病的措施及可行性,总结了国内某些场成功的经验,为猪场控制该病提供实践参考。     

规模化猪场猪伪狂犬病攻毒及免疫效果监测

伪狂犬病(PR)是由疱疹病毒引起的多种动物共患的急性传染病。在养猪生产中主要引起种猪不育、妊娠母猪流产、产死胎和木乃伊胎，新生仔猪和断奶仔猪大量死亡，肥猪增重减慢、饲料报酬降低等，给养猪业造成巨大的经济损失。目前该病主要通过疫苗接种进行预防，应用的免疫程序为：妊娠母猪产前30天应用猪伪狂犬病灭活苗免疫；疫区仔猪应用猪伪狂犬病基因缺失弱毒疫苗进行超前免疫或20～25日龄免疫。为验证现行的免疫程序特进行免疫效果监测和攻毒保护实验。     

猪伪狂犬病(PR)免疫效果的观察

伪狂犬病 (Ｐｓｅｕｄｏｒａｂｉｅｓ)是目前养猪业中最重要的疾病之一。以发热、流产、中枢神经系统引起的障碍等为特征 ,对哺乳仔猪致死率极高 ,繁殖母猪以流产和产弱胎、死胎、木乃伊为主 ,对规模养猪场造成了严重危害 ,使本区养猪业的经济收入造成了较大损失。因此 ,使用优质高效的疫苗是控制猪伪狂犬病的关键。1　材料和方法1 .1　疫苗来源　 国产的猪伪狂犬病二基因缺失苗和美国先灵葆雅公司生产的ＰＲＶ/ｍａｒｋｅｒ.Ｇｏｌｄ猪伪狂犬病四基因缺失苗。1 .2　观察和检测对象　本区具有一定规模猪场的免疫和非免疫猪。1 .3　ＰＲＶ抗…     

一株猪伪狂犬流行株的分离与鉴定

<正>猪伪狂犬是由猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)感染猪引起的急性传染病,该病毒属于疱疹病毒科(Herpesviridae)α-疱疹病毒亚科,与人源单纯疱疹病毒(HSV-1、HSV-2)、水痘带状疱疹病毒(VZV)及I型马牛疱疹病毒(BHV-1、EHV-1)等同属[1]。猪伪狂犬在世界上分布广泛,临床症状与狂犬病相似,曾被误认为是狂犬病[2]。目前,伪狂犬病疫情仍在蔓延扩     

规模化猪场猪伪狂犬病流行病学调查

猪伪狂犬病(PR)临床上以仔猪的神经症状、呼吸道系统疾病及种猪发生流产等繁殖性障碍为特征,猪伪狂犬病病毒(PRV)是引起PR的病原。猪呼吸道疾病综合征(PRDC)是由多种致病因素导致的一种猪复杂的呼吸道疾病,PRV也是引起PRDC的主要病毒性病原之一。近年来规模化猪场对PRV的免疫均选用了基因缺失苗,使用基因缺失苗能更好地利用针对特异性蛋白的Elisa检测方法,将缺失苗免疫动物与野毒感染动物或常规疫苗免疫动物区分开。2010年10月,我们对涪陵区19个使用过猪伪狂犬病gE缺失苗的规模化猪场进行了PRV病原抗体和疫苗抗体的监测。     

猪伪狂犬病的净化条件

疫苗免疫接种是防制和控制乃至根除伪狂犬病的根本措施。早期的猪伪狂犬疫苗大多为弱毒苗和灭活苗，弱毒苗和灭活苗在预防控制伪狂犬病方面虽然能起一定的作用，但是弱毒苗不能防止病毒在动物体内的复制和排出，即存在着毒力返强和散毒的危险；而灭活苗虽然安全性较好，但其免疫效率却较低，免疫时用量较大、有时还可能导致注射部位肿胀，出现过敏反应。     

首株动物基因工程疫苗问世

据《京郊日报》报道 :我国首株动物基因工程疫苗在四川农业大学问世。伪狂犬病是由伪狂犬病病毒引起的猪、牛、羊等多种家畜、家禽及野生动物的一种急性传染病 ,猪是这种病的主要宿主和传染来源。猪伪狂犬病目前已呈世界性分布 ,其流行正呈上升趋势 ,给畜牧业造成巨大损失。四川农业大学郭万柱教授等专家在国内率先系统地开展了伪狂犬病病毒生物学及分子生物学特性的研究 ,成功构建出系列伪狂犬病基因缺失疫苗株。“猪伪狂犬病 (基因缺失 )活疫苗(SA215株 )”获得了国家新兽药证书 ,从而成为我国第一株动物病毒基因工程疫苗。试验研究和应用效果表明 ,该疫苗较常规疫苗及同类疫苗具有遗传稳定性、安全性好、免疫原性强、抗潜伏感染能力独特等优点 ,达到国际同类疫苗的应用标准。首株动物基因工程疫苗问世     

Limits of detection of bluetongue virus with different assay systems

The sensitivity of different assay systems for detecting low concentrations of bluetongue virus (BTV) were compared. These assays included blind passage on baby hamster kidney (BHK-21) cells and on cattle pulmonary artery endothelial (CPAE) cells, immunoperoxidase staining of cells on multiwell slides, and cDNA/RNA hybridization of BTV infected cells. Nine serial 10-fold dilutions of a cell culture-adapted BTV serotype 11 were tested (each dilution was treated as a separate sample) in all assays. Visual inspection for cytopathic effects (CPE) during 3 passages in BHK-21 cells detected samples that contained greater than or equal to 3 plaque forming units (PFU)/ml of BTV. Evidence of CPE during 3 passages in CPAE cells detected samples that contained greater than or equal to 0.3 PFU/ml of BTV. A limit of detection (greater than or equal to 0.3 PFU/ml) was obtained faster by immunoperoxidase staining of BTV-inoculated CPAE cells on multiwell slides and incubated for 3 days. The cDNA/RNA hybridizations of CPAE and BHK-21 cells incubated for 2 or 3 days, respectively, with BTV dilution samples detected samples that contained greater than or equal to 30 PFU/ml. Of the assay systems examined, immunoperoxidase staining of CPAE cells on multiwell slides inoculated with cell culture-adapted BTV was the most sensitive and fastest assay for definitive virus identification.     

Hepatitogenicity of three plaque purified mutants of hepatotropic mouse hepatitis virus, MHV-2.

Hepatitogenicity of three plaque purified mutant strains of mouse hepatitis virus, designated as MHV-2S, -2M and -2L, isolated from MHV-2 infected SR-CDF1-DBT cells was studied. After intraperitoneal inoculation with 2 x 10(5) PFU of parental MHV-2 and its mutants to 4-week-old female ICR mice, 40% of mice inoculated with MHV-2S and 20% of mice with -2M died in one week, whereas with -2L all mice survived. All mice inoculated with MHV-2 died in 3 days postinoculation (p.i.). Virus titer of the liver of mice inoculated with MHV-2, -2S and -2M reached peaks (MHV-2:10(7) PFU/0.2 g, -2S: 10(5) PFU/0.2 g and -2M: 10(6) PFU/0.2 g) at 96 hr p.i., while with -2L a peak titer (10(3) PFU/0.2 g) was shown at 48 hr p.i. Immunofluorescence revealed MHV specific antigen in the liver of MHV-2S infected mice in and around necrotic areas though less extensive than that of parental MHV-2 infected mice. With MHV-2M specific fluorescence was restricted in degenerated hepatocytes in the small necrotic foci. In mice inoculated with MHV-2L only faint fluorescence was detected. Histopathologically, in the liver of MHV-2S infected mice zonal necrosis and cell infiltration were observed. There were spotty necrosis and focal cell infiltration in the liver of MHV-2M infected mice and only small inflammatory foci were seen in MHV-2L infected mice. Large number of extracellular virions were detectable in MHV-2S but not in -2M and -2L infected mice by electron microscopy.     

猪细小病毒CG-05株在ST细胞上的增殖规律研究

通过将猪细小病毒CG-05株同步接种于ST细胞,测定不同时间收获的病毒液的TCID50和HA,研究了CG-05株病毒在ST细胞上的增殖规律。病毒接种后镜检观察接毒细胞,在接种病毒后24 h,即可在细胞较少的区域看到非常轻微的病变。测定病毒TCID50,检测到接毒后培养17h病毒已经明显增殖;当培养到40h左右,其TCID50即接近高峰,达到10-7.2/0.1mL以上,并进入平台期;继续培养,TCID50最高可达到10-8.5/0.1mL,且直到122 h也不见明显降低。病毒HA价也出现同样的平台期,但比TCID50的平台期出现得晚,到50 h才进入平台期。结果表明,用ST细胞培养CG-05株病毒,接种病毒培养56～96 h后,如病变达到80%以上,且细胞脱落已形成20%以上空斑,此时收获病毒可获得高效价的病毒液。该研究可为制备高效价的PPV病毒抗原提供数据资料。     

一株MDBK细胞的低血清悬浮驯化研究

研究选取一株背景清晰、纯净的MDBK贴壁细胞,通过直接驯化和逐级降低血清相结合的办法,获得了一株可以在低血清培养基中全悬浮培养的MDBK细胞。该细胞在含0.5%胎牛血清的培养基中悬浮培养48 h后的细胞密度稳定在5.0×10⁶/mL以上,培养72 h后细胞密度最高可达1.16×10⁷/mL,且细胞形态良好,活力在93%以上,具有良好的传代稳定性。应用筛选获得的悬浮培养MDBK细胞株分别接种伪狂犬病毒和传染性牛鼻气管炎病毒后,检测病毒敏感性。细胞在24 h均发生了皱缩,72 h大部分死亡。悬浮培养的MDBK细胞对传染性牛鼻气管炎病毒的滴度在24 h达到最大值107.6TCID50/mL,对伪狂犬病毒的滴度在48 h达到最大值107.6 TCID50/mL,说明虽然细胞的培养方式发生了改变,但并没有影响上述两种病毒在该细胞上的增殖特性。对MDBK细胞的全悬浮驯化研究可为相关病毒类疫苗规模化生产及工艺的升级改进提供细胞学基础资料。     

生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病病毒工艺优化

旨在筛选伪狂犬病病毒（PRV）敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID₅₀病毒滴度等参数为指标,优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件,在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示,筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株,BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×10⁶cells·mL^-1、搅拌转速120 r·min^-1、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达（7.61±0.18）×10⁶ cells·mL^-1、细胞活率为（96.93±1.18）%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×10⁶cells·mL^-1、搅拌转速80 r·min^-1,5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值（7.13±0.11） lgTCID₅₀·mL^-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。     

猪伪狂犬病毒CC株的分离与鉴定

从吉林省长春市某猪场送检的一头发热、流涎、肌肉痉挛、角弓反张的9日龄仔猪中分离到一株病毒。该病毒能在猪肾细胞(PK-15),仓鼠肾细胞(BHK-21)和非洲绿猴肾细胞(Vero)增殖并产生典型的细胞病变(CPE),从流行病学,临床症状和病理变化均与伪狂犬病相似,该病毒能被伪狂犬病毒阳性血清中和,电镜观察可见椭圆形、直径为110-180nm典型疤疹病毒粒子,用该病毒接种家免和小白鼠均出现典型的伪狂犬病症状。经鉴定,证明此病毒确为伪狂犬病病毒(PRV),并将该病毒命名为PRVCC株。     

一株猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株的分离与鉴定

试验旨在分离并鉴定从发病猪场分离的一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株。从某疫情猪场病猪体内分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株,经细胞传代培育成功增殖性能稳定的新毒株,命名为PRRSV-CHD。该毒株接种细胞后能够产生细胞病变(CPE),病毒滴度达10^-6 TCID50/0.1 mL,在Vero与BHK-21细胞上不出现细胞病变。采用间接免疫荧光法(IFA)检测病毒抗原分布在细胞浆中。与VR2332、CH-1a、HUN4序列比对及系统进化树分析结果表明,该分离株属于美洲型PRRSV;与PRRSV VR2332、CH-1a等比对,Nsp2基因序列在2780—2782 nt有3个核苷酸小缺失和2933—3019 nt的87个核苷酸大缺失,属PRRSV变异株。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒在PK-15细胞中的增殖特性

利用光学显微镜观察、间接免疫荧光（IFA）、Real-time PCR和病毒感染滴度（TCID50）等测定方法,分别从病毒抗原分布、病毒基因组复制水平以及病毒感染滴度变化等方面对猪血凝性脑脊髓炎病毒（HEV-67N）在猪肾上皮传代细胞系（PK-15细胞）上的增殖特性进行了研究。使用HEV-67N株感染24孔细胞培养板内的PK-15细胞,接种剂量为400个TCID50（104.37）/孔,间接免疫荧光检测结果显示,在感染后8h即可检测到被荧光抗体标记的感染细胞,且随着感染时间的延长,出现荧光的细胞数量逐渐增多,至感染后32h,几乎所有的细胞均出现有荧光。Real-time PCR检测结果显示,病毒基因组RNA的复制在感染后32～48h呈快速上升趋势,其基因组拷贝数在感染后48h达到最高值,之后增殖速度减慢,至感染后56h细胞出现CPE。TCID50的测定结果显示,HEV感染滴度的变化趋势与基因组RNA含量的变化相一致,在感染后32～48h增殖速度最快,之后逐渐减缓,至72h病毒感染滴度达到最高。     

猪伪狂犬病病毒LX株的分离与鉴定

从辽宁某猪场采集病料,经处理后接种BHK-21细胞进行猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)分离,结果有2份病料在该细胞上盲传后可见典型的CPE,经测定其毒价为10^-7.8 TCID₅₀/mL。间接免疫荧光试验可见黄绿色荧光,用电镜对纯化的病毒进行观察,可见有囊膜包裹的圆形病毒粒子,直径为140~200 nm。该病毒对氯仿、乙醚、酸和热敏感。对有CPE的细胞培养物进行RT-PCR,结果为阳性。接种试验动物出现典型的猪伪狂犬病临床症状且死亡。结果表明,成功分离到1株PRV。