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目的:通过对滩羊体细胞的体外分离培养和保存,在细胞水平上保存其种质资源。方法:用胰蛋白酶消化分离培养肾和睾丸组织的原代细胞,用组织块法培养耳缘组织的原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中保存。细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性和微生物污染的检查。结果:滩羊肾、睾丸和耳缘组织的原代细胞生长良好,细胞冻存后复苏检查的细胞活力在91.12%~97.74%,细胞形态和长势良好,生长曲线呈近"S"型曲线,最大增殖浓度为在2.12~3.19×10~5/ml,倍增时间在24.62~28.1 h,细菌、真菌、支原体和病毒检查为阴性。结论:滩羊的种质资源细胞库成功构建,使这一物种的种质资源在细胞水平上得到保存。 相似文献
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旨在筛选伪狂犬病病毒(PRV)敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID50病毒滴度等参数为指标,优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件,在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示,筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株,BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×106cells·mL-1、搅拌转速120 r·min-1、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达(7.61±0.18)×106 cells·mL-1、细胞活率为(96.93±1.18)%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×106cells·mL-1、搅拌转速80 r·min-1,5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值(7.13±0.11) lgTCID50·mL-1。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。 相似文献
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河曲马睾丸组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河曲马睾丸组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖数量为4.32×105 mL-1,倍增时间为34.58h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2 N=64,二倍体为85%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,共有4条谱带,其中LDH3浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。表明已成功建立河曲马睾丸组织成纤维细胞系,使河曲马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 相似文献
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二十一世纪的今天,我国各个方面都迅猛发展,不管是经济、教育等方面都取得了巨大的成就,特别是科技对农业发展起到了巨大影响,农业机械化的出现是现代农业不可抵挡的时代潮流。本文从我国农业机械化发展存在的问题、策略、趋势几个方面简述了关于我国农业机械化发展的一些看法,供相关人员参考借鉴。 相似文献
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用胰蛋白酶对欧拉羊胎儿皮肤组织进行热消化分离并培养原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化成纤维细胞,扩大培养至第3代时用液氮保存,复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染检测和连续传代培养试验。结果显示,欧拉羊胎儿皮肤细胞呈成纤维型,复苏活力93.5%以上,生长良好,细胞生长曲线呈“S”型,最大增殖量为3.31×105 mL-1,倍增时间为26.2 h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性,连续传代培养在10代内生长正常。表明欧拉羊胎儿皮肤细胞分离培养成功,使这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征疫苗研究现状 总被引:2,自引:0,他引:2
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是一种对养猪业危害严重的传染病,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为有囊膜的单股正链RNA病毒,且具有高度的变异性,有美洲型和欧洲型两个血清型。猪肺泡巨噬细胞(PAM)、恒河猴胎肾细胞系MA-104及源于MA-104的传代细胞系(如Marc-145、CL-2621、HS.2H和CRL-1171)对PRRSV敏感。预防该病的常规疫苗有灭活疫苗和弱毒疫苗两种。通常以特定种毒在适当细胞系中培养增殖,经灭活或致弱,加入佐剂制得相应疫苗。灭活疫苗交叉保护性差,但使用安全;弱毒疫苗抗体产生快、持续时间长、保护力强,但源毒能在猪群中持续存在而有安全隐患。 相似文献