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采集岷县黑裘皮羊肾组织,用胰蛋白酶热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法进行继代培养和细胞纯化,并对复苏细胞的形态、活力、生长曲线、荧光蛋白质粒转染表达、核型以及乳酸脱氢酶同工酶等生物学特性进行了分析。结果显示:原代和传代细胞生长形态均好,群体倍增时间为28.3 h;染色体2 n=54,二倍体占主体(84%)乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,未见LDH4、LDH5谱带,与其它羊有明显区别;外源性荧光蛋白转染质粒在该细胞中能进行复制和表达;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性。表明该研究已成功建立岷县黑裘皮羊肾组织成纤维细胞系,为在细胞水平上保存岷县黑裘皮羊种质资源以及进行相关研究提供了理想的生物材料。 相似文献
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目的:通过对滩羊体细胞的体外分离培养和保存,在细胞水平上保存其种质资源。方法:用胰蛋白酶消化分离培养肾和睾丸组织的原代细胞,用组织块法培养耳缘组织的原代细胞,经传代扩大培养后在液氮中保存。细胞复苏后进行了活力、形态、生长特性和微生物污染的检查。结果:滩羊肾、睾丸和耳缘组织的原代细胞生长良好,细胞冻存后复苏检查的细胞活力在91.12%~97.74%,细胞形态和长势良好,生长曲线呈近"S"型曲线,最大增殖浓度为在2.12~3.19×10~5/ml,倍增时间在24.62~28.1 h,细菌、真菌、支原体和病毒检查为阴性。结论:滩羊的种质资源细胞库成功构建,使这一物种的种质资源在细胞水平上得到保存。 相似文献
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【目的】探讨绵羊前体脂肪细胞冷冻保存的最佳冻存保护剂种类和浓度。【方法】在含20%胎牛血清的DMEM/F12培养液中分别添加不同浓度的DMSO、EG、PG、G和PVP作为冻存液,对原代培养的绵羊前体脂肪细胞进行冷冻保存后,检测复苏细胞存活率、细胞增殖能力、细胞中脂肪沉积量,测量GPDH活性,并用实时荧光定量PCR检测PPARγ和LPL mRNA的表达水平,最后对复苏细胞进行染色体核型分析。【结果】各种冻存保护液中,10% DMSO和5% DMSO+5% PVP组细胞存活率最高,与对照组相比差异不显著(P>0.05),其它各试验组复苏细胞存活率均显著低于对照组(P<0.05);各试验组中10% DMSO组细胞增殖能力最强,且与对照组相比差异不显著(P>0.05);细胞复苏后培养6 d,各试验组脂肪沉积量与对照组之间没有显著差异(P>0.05),而第11天时,10 % DMSO组脂肪沉积量显著高于其它试验组(P<0.05),且与对照组相比差异不显著(P>0.05);各试验组GPDH活性和LPL、PPARγ mRNA 的表达量与对照组之间没有显著差异(P>0.05);染色体核型分析发现,复苏细胞二倍体细胞占主体,与原代细胞没有显著差异(P>0.05)。【结论】含20% FBS的DMEM/F12培养液中添加10% DMSO或10%PVP、5% DMSO+5% PVP均能有效保存绵羊前体脂肪细胞,但以10% DMSO最佳。 相似文献
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河曲马睾丸组织成纤维细胞系的建立及生物学特性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
采集河曲马睾丸组织,用热消化法制备原代细胞,通过差速消化和差速贴壁法纯化细胞,扩大培养至第3代用液氮保存,细胞复苏后进行活力、形态、生长曲线、微生物污染、核型、乳酸脱氢同工酶谱及荧光蛋白质粒转染表达等特性研究。结果显示,河曲马睾丸组织原代和传代细胞呈成纤维型,生长良好,最大增殖数量为4.32×105 mL-1,倍增时间为34.58h;细菌、真菌、病毒、支原体检测呈阴性;染色体2 N=64,二倍体为85%,占主体;乳酸脱氢酶同工酶电泳图谱有明显特征,共有4条谱带,其中LDH3浓度较高,活性较强;外源质粒在该细胞中能进行复制和表达。表明已成功建立河曲马睾丸组织成纤维细胞系,使河曲马这一重要种质资源在细胞水平上得以保存。 相似文献
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通过驯化建立无血清悬浮培养型Marc-145细胞系,分析驯化传代对细胞特性的影响,为大规模生产疫苗用的宿主细胞提供基础。采用缓降培养液中血清浓度的方法,连续传代培养50代,并用无血清培养基进行悬浮培养驯化,对传代和驯化过程中的P10、P20、P30、P40和P50代细胞的形态、倍增时间、生长曲线、染色体和对蓝耳病病毒敏感性等特性进行对比分析。研究发现,传代过程中Marc-145细胞均呈扁平多边形上皮样生长,P10代细胞倍增时间为34.15 h,P50代细胞倍增时间为36.16 h,P50代细胞倍增时间稍有延长但差异不显著。P10、P20、P30、P40和P50代的Marc-145细胞生长曲线均呈“S”形;P10代和P50代细胞染色体众数都集中在88~90条。接种病毒后,P10、P20、P30、P40和P50细胞TCID50间无显著差异,表明细胞传50代后,细胞特性没有发生明显变化。P50细胞进行无血清悬浮培养48 h后,细胞密度可达到4.14×106 mL-1。 相似文献
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目的:研究IL-4、VCAM-1、VEGF和VEGFR2四种蛋白在MDCK细胞中的表达与分布,探讨四种蛋白与MDCK细胞成瘤性的相关性。方法:采用免疫组化SP(streptavidin-perosidase)法观察四种蛋白在MDCK细胞中的表达分布特点。结果:IL-4、VCAM-1、VEGF与VEGFR2四种蛋白在MDCK细胞中均有表达。结论:IL-4定位于MDCK细胞胞浆中,在胞核及胞质中表达,呈弥漫性分布;VCAM-1、VEGF与VEGFR2三种蛋白定位于MDCK细胞胞膜上,在胞膜及胞质中表达。IL-4、VCAM-1、VEGF和VEGFR2蛋白均为细胞因子并参与细胞成瘤进程,可能与MDCK细胞成瘤性存在相关联系。 相似文献
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为探讨荷斯坦牛DRA基因的多态性及序列特征,本研究采用基因组DNA混合池扩增并直接测序的方法对荷斯坦牛DRA基因编码区进行多态性分析,同时利用生物信息学方法预测DRA基因的理化特性及其编码蛋白的高级结构。结果表明,荷斯坦牛DRA基因编码区上有4个碱基突变,包含1个错义突变和3个同义突变。DRA基因共编码253个氨基酸,编码产物是一种稳定的不可溶蛋白,具有15个潜在的磷酸化位点,二级结构为混合型,三级结构由α-螺旋、β-折叠、β-转角和无规则卷曲组成。本研究结果为荷斯坦牛的疾病相关基因筛选和抗病分子育种提供了一定的理论依据。 相似文献