3种半边莲提取物体外抗猪繁殖与 呼吸综合征病毒的作用研究

为研究半边莲水提取物、半边莲总黄酮、半边莲总生物碱体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用,本试验建立了Marc-145细胞模型,在研究其对Marc-145细胞最大安全质量浓度的基础上,结合细胞病变形态观察和MTT法,设立药物组、利巴韦林阳性对照组、病毒对照组和细胞对照组,对病毒进行阻断、抑制和直接杀灭3种作用方式的测定。结果显示,半边莲水提取物、半边莲总黄酮、半边莲总生物碱和利巴韦林的最大安全质量浓度分别为2.5、1.25、0.63和0.016 mg·mL~(-1)。在体外抗PRRSV作用的试验中,半边莲水提取物对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为52.1%、60.2%、52.6%,极显著低于阳性对照利巴韦林(P0.01),且各作用方式下均出现明显的细胞病变。半边莲总黄酮对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为51.1%、85.0%、93.9%,其抑制和直接灭活作用较强,极显著高于阳性对照利巴韦林(P0.01),且在这两种作用方式下细胞基本保持单层完好。半边莲总生物碱对病毒的阻断、抑制和直接灭活作用的最高抑制率分别为91.2%、57.8%、58.1%,其对PRRSV在抑制作用和直接灭活作用下的抑制率显著低于阳性对照利巴韦林(P0.05),对PRRSV阻断作用极显著强于阳性对照利巴韦林(P0.01),且在阻断作用下细胞轻微病变。综合3种作用方式,3种半边莲提取物均具有体外抗PRRSV的作用,其中,半边莲总黄酮抗PRRSV的效果最好,其次是半边莲总生物碱,半边莲水提取物抗PRRSV效果最弱。     

甘草酸与苦参碱组方体外抗PRRSV效果的研究

利用MTT法检测Marc-145细胞活力,通过药物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的阻断、增殖抑制和直接杀灭3个试验,探讨甘草酸与苦参碱不同组方抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的效果,并探讨最优组方对PRRSV的复制及TCID50的影响。结果显示,在增殖抑制和直接杀灭试验中各组方对PRRSV均有抑制作用,以苦参碱与甘草酸按质量比为1∶4,质量浓度为0.25 mg·m L-1时效果最好,在增殖抑制和直接杀灭试验的细胞病变抑制率分别是76.95%和83.25%,其治疗指数为12.696。最优组方药物能使病毒的TCID50下降,且与药物的质量浓度成正相关。     

4种茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

采用小鼠体内试验和体外试验,利用Marc–145细胞体外培养系统,通过观察细胞病变来评价茶叶水提物对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)繁殖的抑制作用。改变加入茶叶水提取物的方式(茶叶水提物先与病毒感作后接种细胞、茶叶水提物与已感染病毒的细胞作用2种方式),初步探讨茶叶水提物对PRRSV的抑制与杀灭作用。体内试验是采用小鼠尾静脉注射的方法,将茶叶水提物注射到小鼠体内,测定小鼠血清对PRRSV的作用。结果表明,茶叶水提物对PRRSV具有杀灭与抑制作用,碧螺春茶(不发酵)、生普洱茶(不发酵)、铁观音茶(半发酵)、熟普洱茶(后发酵)的水提物对PRRSV的最小抑制质量浓度分别为31.3、31.3、31.3、125μg/mL,最小杀灭质量浓度分别为7.8、7.8、15.6、125μg/mL。不发酵型茶叶水提物比发酵型茶叶水提物对PRRSV的杀灭与抑制作用明显,小鼠尾静脉注射茶叶水提物后能正常生长,注射1 h内小鼠血清对PRRSV具有一定的杀灭作用。     

次氯酸消毒液对猪源病原体的消杀效果

为评价次氯酸消毒液(以下简称消毒液)对猪源病原体的消杀作用,以猪场常见的5种病原菌和5种病毒为研究对象,测试消毒液在不同浓度和不同作用时间下的消杀效果.悬液定量杀菌试验结果表明,消毒液原液(次氯酸含量为210 mg/L)和1:2倍稀释消毒液(次氯酸含量为105 mg/L),作用30 s即可杀灭猪链球菌2型(SS2)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪丹毒杆菌(ER)和猪大肠杆菌(ETEC);1:4倍稀释消毒液(次氯酸含量为52.5 mg/L)作用1 min能杀灭HPS、ER和ETEC,作用5 min能杀灭SS2和APP,杀灭对数值均>7.00,杀灭率均为100％.病毒灭活试验结果表明,消毒液原液作用1 min对猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪细小病毒(PPV)的平均灭活对数值均≥5.00,杀灭率均≥99.999％;1:2倍稀释消毒液作用1 min对PEDV的平均灭活对数值为4.00、杀灭率为99.990％;消毒液原液作用5 min和10 min,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的杀灭率为99.899％,对猪伪狂犬病病毒(PRV)的杀灭率为92.921％,对猪圆环病毒2型(PCV2)的杀灭率为90.00％.表明次氯酸消毒液在推荐浓度下对猪场常见病原菌有快速高效的消杀效果,对PEDV和PPV等病毒亦有良好的消杀作用.     

复方金连菊制剂对PRRSV、TGEV体外作用的研究

试验旨在研究复方金连菊中药制剂溶液对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外作用。以药液浓度为3.90625mg/ml～500mg/ml为样品,观察其能否进入细胞或吸附细胞表面以阻止病毒的吸附和进入。结果表明,复方金连菊中药制剂溶液对Marc-145细胞的安全浓度为62.5mg/ml,对PK15细胞的安全浓度为31.25mg/ml,在安全浓度以下不明显引起细胞损伤,对细胞无毒性作用。复方金连菊中药制剂溶液浓度为7.8125mg/ml～500mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度为3.90625mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);药液浓度为15.625mg/ml～500mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度3.90625～7.8125mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);说明药液浓度高于15.625mg/ml分别能对抑制PRRSV与Marc-145传代细胞和TGEV与PK-15传代细胞的吸附、融合,从而阻止病毒的吸附和进入。复方金连菊中药制剂溶液浓度在3.90625mg/ml～500mg/ml范围内对PRRSV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01),药液浓度在62.5mg/ml～500mg/ml范围内对TGEV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01)。说明复方金连菊中药制剂具有一定的阻止病毒的吸附和进入效果,但具体应用尚需进一步临床试验。     

板蓝根多糖对PRRSV的体外抗病毒试验

水煮醇沉法从中药板蓝根中提取板蓝根多糖,以其为试验药物,观察在Marc-145单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用效果.结果表明,在安全浓度范围内,板蓝根多糖体外对PRRSV具有较好的阻断和抑制作用,其最小阻断浓度为2.094 μg/mL,最小抑制浓度为8.375 μg/mL.     

板蓝根多糖的提取及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒的体外作用

用水煮醇沉法从中药板蓝根中提取板蓝根多糖,作为试验药物,观察其在Marc-145单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用效果.结果表明,在安全浓度范围内,板蓝根多糖体外对PRRSV具有较好的阻断和抑制作用,最小阻断浓度为2.094 μg/ml,最小抑制浓度为8.375 μg/ml.     

3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,采用体外细胞培养法,在Marc-145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL;鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染的效果最好,但对PRRSV没有直接灭活作用.3种中药粗提物均有不同程度的体外抗PRRSV活性作用,其中板蓝根的效果最好.     

莪术油注射液鸡胚接种抗新城疫病毒的研究

[目的]探讨莪术油对新城疫病毒的抑制和杀灭作用。[方法]用鸡胚培养法和血凝试验,测定莪术油对鸡新城疫病毒增殖的抑制作用。[结果]莪术油对鸡胚无毒性作用;莪术油与病毒同时接种鸡胚,能完全抑制鸡新城疫病毒在鸡胚中的增殖。[结论]结果为莪术油在兽医临床上的应用提供了理论依据。     

抗菌肽Dermaseptin S4体外抑制猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒的活性

探讨抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)体外对猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)的抑制作用,为研制抗PRRSV病毒药物提供理论依据.该研究以Marc-145细胞培养增殖的PRRSV为研究对象,采用不同的给药方式(同时、感染前、感染后),运用噻唑篮(MTT)比色法观察细胞病变,测定最大无毒浓度TC0和半数细胞感染量(TCID50),以吸光度值(OD490nm)、细胞存活率和DS4对PRRSV的抑制率为指标,确定DS4对PRRSV的抑制强度.结果表明:抗菌肽Dermaseptin S4体外对PRRSV的直接灭活效果最好,与药物拉米夫定对照组相当,且抑制强度与其浓度呈显著正相关,R2=0.998 3.     

芪板青颗粒体外抗PRRSV效果研究

为了检验芪板青颗粒体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒效果,降低养猪场因感染猪繁殖与呼吸综合征病毒带来的损失,本试验通过调整芪板青颗粒溶液与猪繁殖与呼吸综合征病毒液加到Marc-145细胞中的不同顺序,分别检验芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒的抑制、杀灭和阻断作用。结果显示：芪板青颗粒对猪繁殖与呼吸综合征病毒有一定的抑制、杀灭和阻断作用,在芪板青溶液浓度为24.4～3 125.0 mg/L时,有显著的抑制和杀灭猪繁殖与呼吸综合征病毒作用,在浓度195.3～3 125.0 mg/L时,有显著的阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒作用。结果表明：芪板青颗粒可用于体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒,本试验为芪板青颗粒的应用提供了依据,为猪繁殖与呼吸综合征的防治提供了帮助。     

酸性硫酸钙对临床常见致病微生物的杀灭能力

【目的】研究消毒剂酸性硫酸钙（ACS）对微生物的杀灭效果,为用消毒剂防控人畜疫病提供基础数据和理论依据。【方法】将ACS与中和剂（3%卵磷脂、5%吐温-80的磷酸盐缓冲液）共孵育一段时间后,再分别加入大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）共培养一段时间,将与细菌的混合物涂布于营养琼脂平板,置于37℃生化培养箱培养18—24 h;将与病毒的混合物接种于细胞板,在37℃细胞培养箱内培养一定时间,评价中和剂的中和效果。其对照设置和评判标准如下：消毒剂+菌悬液或病毒悬液（第1组）,（消毒剂+菌悬液或病毒悬液）+中和剂（第2组）,（中和剂+消毒剂）+菌悬液或病毒悬液（第3组）,（无菌硬水+菌悬液或病毒悬液）+中和剂（第4组）,（无菌硬水+菌悬液或病毒悬液）+PBS（第5组）,无菌硬水+PBS（第6组）;细菌杀灭试验中和剂效果评价标准：第1组有极少量细菌生长或无菌生长,第2组有菌生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组细菌数接近且与阳性对照组细菌数接近,第6组无菌生长,3次重复试验均符合上述条件,结果一致,判定所选中和剂及浓度合适;病毒灭活试验中和剂效果评价标准：第1组有极少量病毒生长或无病毒生长,第2组有病毒生长且明显少于第3、4、5组但多于第1组,第3、4、5组病毒生长与原接种量相近,第6组细胞正常生长,3次重复试验结果一致,判定所选中和剂及浓度合适。利用悬液定量杀菌法和测定病毒滴度的方法评价ACS对上述细菌和病毒的消灭效果,将ACS 稀释200、300、400、500、600、700倍分别与上述细菌或病毒作用不同时间后加入中和剂进行中和,然后将细菌混合物涂布于营养琼脂平板,通过计算菌落数评价ACS杀灭细菌的效果,测定病毒混合物中病毒滴度评价ACS对病毒的杀灭效果。【结果】所选用的中和剂能够有效地中和ACS 200倍稀释液对细菌和病毒的残留作用,且该中和剂对细菌、病毒和细胞无毒性。当ACS与细菌作用0 h后立即被中和,最大稀释300倍对大肠杆菌的灭菌率为100%,最大稀释600倍对金黄色葡萄球菌的灭菌率为100%,最大稀释700倍时对沙门氏菌的灭菌率为100%。当ACS 稀释至700倍时,分别与上述细菌作用1d或6d后被中和,灭菌率均为100%;此外,ACS稀释200倍时,与PRRSV作用60 min后被中和,未检测出病毒滴度。【结论】ACS稀释700倍与大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌作用1 d或1 d以上均能产生较好的杀灭效果;ACS稀释200倍与PRRSV作用60 min能完全杀灭病毒。这可为养殖场选用消毒剂防控疫病提供参考。     

水溶黏着剂色板的田间诱虫试验

[目的]了解水溶性黏着剂色板的田间诱虫效果。[方法]利用以羧甲基纤维素钠和甘油为主要原料配制的水溶性胶黏着剂制作了黄、蓝、绿3种粘板,以不加糖醋蒜液诱虫剂的粘板为对照,在蔬菜保护地进行田间诱虫试验。[结果]水溶性胶黏着剂色板对蔬菜保护地蚜总科害虫(Aphidoidea)、葱蓟马(Thrips tabaci Lindeman)、韭蛆成虫(Bradysia odoriphaga Yanget Zhang)等有很好的诱杀作用,添加葱蒜提取物后对葱蓟马的诱杀效果更好。但水溶性黏着剂由于粘附力量略小,其诱杀害虫效果不如机油黏着剂。在该试验条件下蓝板与黄板对葱蓟马的诱杀效果差异不显著(P>0.05)。[结论]水溶性黏着剂在蔬菜保护地微小害虫防治中很有应用价值。     

韩国SK99％矿物油对B型烟粉虱种群的控制作用

[目的]评价韩国SK99%矿物油对B型烟粉虱自然种群的控制作用。[方法]在大棚条件下研究组建了由作用因子组配的烟粉虱自然种群生命表,应用种群趋势指数(I)、排除作用控制指数(EIPC)等指标评价了各作用因子对烟粉虱种群的控制作用。[结果]对照区烟粉虱的I值达到99.945 5;吡虫啉区烟粉虱的I值为7.565 8;矿物油区烟粉虱的I值仅为0.409 0。在矿物油使用区,"矿物油驱避成虫产卵"的EIPC最大,为17.543 9,其次分别是"矿物油对烟粉虱若虫的杀灭"、"矿物油对成虫的杀灭"和"矿物油对卵的杀灭",其EIPC分别为6.618 1、1.814 2和1.160 1。[结论]使用矿物油可达到控制烟粉虱种群增长的目标,其主要作用机理是驱避烟粉虱成虫产卵。     

硫酸盐对三氮唑核苷酸抑制番茄病毒病效果的影响

以人工接种TMV的盆栽番茄苗为受试寄主,测定添加硫酸盐对三氮唑核苷酸抑制番茄病毒病效果的影响.结果表明,5种硫酸盐对三氮唑核苷酸抑制TMV均有增效作用,其中以同时添加硫酸铜和硫酸锌[m(三氮唑核苷酸)∶m(硫酸铜)∶m(硫酸锌)=1∶10∶15]的增效作用最为显著,其毒力指数为176.根据三氮唑核苷酸和添加硫酸盐的混合物抑制番茄病毒病的测定结果,用"时间-剂量-抑制率"模型比较分析了添加硫酸盐对三氮唑核苷酸抑制病毒病的时间效应和剂量效应,结果表明,硫酸盐对三氮唑核苷酸抑制番茄病毒病的增效作用主要表现在有效时段的中、后期.     

河南地区NADC30-like PRRSV毒株的增殖特性与遗传进化分析

为研究河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,采集河南省滑县地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场中的病料,经研磨、稀释、离心处理后将悬液上清接种于原代猪肺泡巨噬细胞,进行病毒分离培养,结果显示,PAM出现典型细胞病变效应,将得到的分离株命名为HNhx。应用PRRSV N蛋白的特异抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验,结果表明,接种HNhx分离株的PAM出现特异性荧光,证明该分离株为PRRSV。应用RT-PCR技术对Nsp2区进行扩增分析,根据扩增目的产物大小推测HNhx分离株为NADC30-like毒株。遗传分析发现,与其他参考毒株相比,HNhx毒株的ORF3、ORF4和ORF5基因与NADC30毒株的同源性最高。基于ORF3、ORF4和ORF5序列构建进化树,系统进化分析的结果表明,HNhx归于NADC30-like亚群。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒17-ZJ-HZ毒株的分离鉴定与分子流行病学分析

杭州某猪场断奶仔猪群出现高热、呼吸困难等症状,疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染,3头病猪肺脏病变样本送本实验室检测,通过RT-PCR方法检测其病原核酸。肺脏匀浆液无菌处理接种到MARC-145细胞,细胞病变观察、Western-blot、间接免疫荧光等方法验证PRRSV病毒分离情况;RT-PCR方法分五段扩增获得全长病毒基因组序列,采用MEGA等软件分析该毒株的核苷酸序列以及GP5、NSP2氨基酸序列;分离病毒接种3日龄PRRSV阴性仔猪,评价该病毒的毒力。结果表明:该场送检样品为PRRSV阳性;成功分离得到17-ZJ-HZ病毒;获得15 325 bp的 PRRSV全基因组序列。序列分析表明,该毒株与经典北美株的NSP2存在典型的29+1个氨基酸的缺失,且进化分析归于HP-PRRSV亚群。攻毒60 h后猪只出现典型的PRRSV临床症状和病理变化,以上结果表明该毒株为高致病性PRRSV(highly pathogenic PRRSV, HP-PRRSV)的北美株。