板蓝根多糖对PRRSV的体外抗病毒试验

水煮醇沉法从中药板蓝根中提取板蓝根多糖,以其为试验药物,观察在Marc-145单层细胞上对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的作用效果.结果表明,在安全浓度范围内,板蓝根多糖体外对PRRSV具有较好的阻断和抑制作用,其最小阻断浓度为2.094 μg/mL,最小抑制浓度为8.375 μg/mL.     

板蓝根多糖的提取及其对猪细小病毒的体外作用

用水煮醇沉法提取板蓝根多糖,通过观察PK-15细胞病变效应（CPE）来评价板蓝根多糖的不同加药方式体外对猪细小病毒（PPV）的阻断和抑制作用。结果表明板蓝根多糖在对细胞的安全浓度范围内,对猪细小病毒有明显的阻断作用和抑制的作用,最小的阻断浓度为2.09μg/ml,最小的抑制浓度为4.19μg/ml。     

3种中药体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的作用

为研究板蓝根、甘草和鱼腥草3种中药粗提物体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的作用,采用体外细胞培养法,在Marc-145单层细胞上,对3种中药粗提物进行直接抗PRRSV活性试验.结果表明,板蓝根和甘草粗提物阻断PRRSV的最佳质量浓度分别为3.125、0.391mg/mL,抑制PRRSV感染的最佳质量浓度分别为3.125、0.782mg/mL,直接灭活PRRSV的最佳质量浓度分别为1.563、0.782mg/mL;鱼腥草粗提物质量浓度为0.782mg/mL时,阻断和抑制PRRSV感染的效果最好,但对PRRSV没有直接灭活作用.3种中药粗提物均有不同程度的体外抗PRRSV活性作用,其中板蓝根的效果最好.     

绿原酸对猪繁殖与呼吸综合征病毒体外作用的研究

通过观察金银花的主要成分绿原酸对Marc-145细胞病变效应（CPE）来评价绿原酸不同加药方式（先加药后接种病毒,先接种病毒后加药）体外 对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用效果。结果表明,在安全浓度范围内,绿原酸对PRRSV具有显著的体外抑制作用和阻断作用,其对 PRRSV的最小抑制浓度为0.391 μg/mL,最小阻断浓度为0.0977 μg/mL。     

复方金连菊制剂对PRRSV、TGEV体外作用的研究

试验旨在研究复方金连菊中药制剂溶液对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)的体外作用。以药液浓度为3.90625mg/ml～500mg/ml为样品,观察其能否进入细胞或吸附细胞表面以阻止病毒的吸附和进入。结果表明,复方金连菊中药制剂溶液对Marc-145细胞的安全浓度为62.5mg/ml,对PK15细胞的安全浓度为31.25mg/ml,在安全浓度以下不明显引起细胞损伤,对细胞无毒性作用。复方金连菊中药制剂溶液浓度为7.8125mg/ml～500mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度为3.90625mg/ml对PRRSV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);药液浓度为15.625mg/ml～500mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用极为显著(P0.01),药液浓度3.90625～7.8125mg/ml对TGEV感染细胞的阻断作用不明显(P0.05);说明药液浓度高于15.625mg/ml分别能对抑制PRRSV与Marc-145传代细胞和TGEV与PK-15传代细胞的吸附、融合,从而阻止病毒的吸附和进入。复方金连菊中药制剂溶液浓度在3.90625mg/ml～500mg/ml范围内对PRRSV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01),药液浓度在62.5mg/ml～500mg/ml范围内对TGEV具有极显著的直接杀灭作用(P0.01)。说明复方金连菊中药制剂具有一定的阻止病毒的吸附和进入效果,但具体应用尚需进一步临床试验。     

三仁汤复方中药制剂对PRRSV体外抑制作用的研究

为了寻找有效预防和治疗猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）的中草药,以 Marc 145细胞为模型,采用细胞病变（CPE）抑制试验和MTT法测定细胞活力,评价三仁汤复方中药制剂的活性成分在体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）的作用,并通过改变药物作用方式,初步探讨复方中药制剂的抗病毒机制。结果显示,三仁汤复方中药制剂对 Marc 145细胞的最大安全质量浓度为125 g／L,在体外对PRRSV直接灭活的最小质量浓度为15．625 g／L,抑制作用的最小质量浓度为31．25 g／L,吸附阻断作用的最小质量浓度为125 g／L,其对PRRSV的灭活作用明显优于抑制作用和吸附阻断作用,吸附阻断作用最弱。表明,在安全质量浓度范围内,三仁汤中药复方制剂在体外有显著的抗PRRSV作用,可以作为预防及治疗PRRS的药物。     

黄芪和板蓝根对猪细小病毒的体外抑制作用

【目的】探讨黄芪和板蓝根对猪细小病毒(PPV)的体外抑制作用。【方法】选用中草药黄芪、板蓝根作为抗病毒药物,利用细胞病变(CPE)抑制试验,测定黄芪与板蓝根单独使用及等体积合用,在PK-15单层细胞上对猪细小病毒的抑制作用。【结果】板蓝根单独使用时,体外试验对PPV有明显的抑制作用,对PPV的最小直接杀灭质量浓度为0.63 mg/mL,最小阻断质量浓度为0.31 mg/mL;黄芪单独使用时对PPV无明显的抑制作用;板蓝根与黄芪等体积合用时,对PPV的抑制作用显著增强,最小直接杀灭质量浓度提高为0.31 mg/mL,最小阻断质量浓度提高为0.038 mg/mL。【结论】黄芪与板蓝根联合使用抗病毒能力增强,且毒性较弱。     

氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯酶联免疫检测方法的建立

利用自制抗体建立并优化了氯氰菊酯和三氟氯氰菊酯的间接竞争ELISA(IC-ELISA)检测方法.结果显示,抗体对免疫原的I50为0.048 μg/ml;IC-ELISA分析检测中,有机溶剂丙酮浓度应小于5%;抗体对氯氰菊酯、三氟氯氰菊酯的I50分别为1.155 3 μg/ml 和 1.709 5 μg/ml,I10分别为 0.011 7 μg/ml 和 0.048 5 μg/ml.     

左旋咪唑对正常和受抑制兔体外淋巴细胞转化的影响

研究了不同浓度的左旋咪唑 (LMS)对正常和受抑制兔体外淋巴细胞转化的影响。在正常细胞培养液中加入 0 .1μg/ml、0 .5 μg/ml的LMS对细胞转化有明显的促增殖作用 (P <0 .0 5 ) ,加入 5 μg/ml、10 μg/ml的LMS对正常淋巴细胞转化无明显促增殖作用 (P >0 .0 5 ) ,而加入高浓度 (10 4 μg/ml、2 0 8μg/ml、4 16 μg/ml)LMS则明显抑制淋巴细胞的转化 (P <0 .0 5 ) ;对肾上腺素或环磷酰胺处理的细胞 ,加入低浓度 (0 .1μg/ml、0 .5μg/ml)LMS可明显逆转细胞的抑制状态 ,使其恢复至细胞转化的正常水平 ,中等浓度 (5 μg/ml、10 μg/ml)LMS对受抑制的细胞无逆转作用 ,而高浓度LMS则使抑制效果更为明显。     

长春花碱对鼠单卵裂球染色体标本制备的影响

为了研究长春花碱对鼠单卵裂球染色体标本制备的影响。以长春花碱为纺锤体中期阻断剂,以CZB为基础培养液,研究不同的阻断培养浓度和时间对小鼠4、8-细胞期胚胎单卵裂球中期分裂相数的影响。0.5μg/ml浓度、阻断培养10 h组的4-细胞卵裂球中期分裂相检出率最高,而只有0.5μg/ml浓度6、h组,0.1μg/ml浓度8、h组,0.3μg/ml浓度、8 h组,0.7μg/ml浓度、8 h组,0.1μg/ml浓度、10 h组和0.3μg/ml浓度1、0 h组与最高值组差异不显著;0.5μg/ml浓度、阻断培养10 h组的8-细胞卵裂球中期分裂相检出率最高,而只有0.1μg/ml浓度1、0 h组和0.7μg/ml浓度1、0 h组与最高值组差异不显著;0.1μg/ml浓度8、h阻断培养的4-细胞单卵裂球的中期分裂相的检出率与0.1μg/ml浓度1、0 h阻断培养的8-细胞单卵裂球的差异不显著,其染色体标本的制备质量评分分别为2.7和1.90为确定适宜小鼠早期胚胎单卵裂球的长春花碱处理浓度和阻断培养时间提供了科学依据。     

芦荟多糖抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用试验

在安全浓度的基础上,将芦荟多糖稀释成不同浓度,作用于猪繁殖与呼吸综合征病毒,当病毒对照CPE达到70%～80%后,在酶联免疫检测仪上测定A490nm值,A490nm值越大,表明细胞生长越旺盛,抗感染效果越好。在先加芦荟多糖后接种病毒时,多糖对PRRSV感染有阻断作用,且作用显著;在加芦荟多糖之前先接种病毒,则芦荟多糖对PRRSV的抑制作用不明显;高浓度芦荟多糖对PRRSV具有直接杀灭作用。     

猪繁殖与呼吸综合症免疫学研究

猪繁殖与呼吸综合症是由猪繁殖与呼吸综合症病毒引起的高度传染性病毒病。笔者就呼吸综合症病毒的理化特性、生物学特征、基因组构成、病毒复制、免疫学特征以及疫苗等作一简述     

彩色免疫金银染色法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究

试验首次建立了固相载体上的彩色免疫金银染色法(CIGSS)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并获得成功。用提纯的PRRSV高免兔制备高免血清,按常规方法提取兔抗PRRSVIgG,建立了检测PRRSV抗原的彩色免疫金银染色法。经方阵试验确定最佳兔抗PRRSV IgG工作浓度为1∶400,金标羊抗兔IgG的工作浓度为1∶1 000,银染色的时间为15 min,彩染的时间为2 min。用该法对提纯的PRRSV病毒抗原的最低检出量为1.469μg/ml,其敏感性为DIGFA的5倍。以CIGSS法检测了52份疑似PRRSV感染的猪样本,阳性率为53.84%,而检测猪细小病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪巴氏杆菌以及正常的Marc-145细胞培养物,均为阴性反应。表明该法具有快速、准确、操作简便、敏感性高、易于判断、特异性强、重复性好等优点,可用于大量PRRSV抗原样本的检测。     

中国部分地区高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子流行病学研究

 【目的】对来自2006年猪病流行爆发地的组织样品进行多种病毒的检测,确定引起本次流行的致病病原及PRRSV的分子流行病学特征。【方法】利用（RT-）PCR对采集的样品进行PRRSV北美型和欧洲型、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（PHEV）、日本乙型脑炎病毒（JEV）以及瘟病毒的检测,对PRRSV阳性的进行ORF5的序列测定并分析。【结果】检测到16份PRRSV北美型阳性样品,PCV2阳性样品2份,其它病毒均未检到。PRRSV ORF5序列分析表明笔者分离到的PRRSV株可分为2个群。【结论】（1）PRRSV与2006年肆虐中国养猪业的猪病流行有直接关系;（2）2006年PRRSV流行株主要是以JX0612株为代表,但不同遗传特征的PRRSV也在流行。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒FJ04A株的分离及其结构蛋白基因特性分析

从临床表现为繁殖障碍的猪群中分离到一株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)FJ04A株,用RT-PCR方法进行鉴定,扩增出该分离毒的结构蛋白基因并进行了序列测定.预测其推导的结构蛋白相对分子质量、等电点、抗原位点和糖基化位点等.序列比较结果表明:该分离毒ORFs2-7与美洲型代表株VR2332核苷酸同源性为98.1%-99.5%,氨基酸同源性为96.5%-99.2%;而与欧洲代表株LV的核苷酸同源性为57.3%-63.4%,氨基酸同源性为54.7%-77.6%.表明该分离毒为PRRSV美洲型毒株.     

CSFV和PRRSV二联RT-PCR检测方法的建立

参照GenBank中猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)基因保守序列,设计2对特异引物,通过对最佳反应条件的优化,建立了CSFV和PRRSV的二联RT-PCR检测方法,该方法可同时扩增得到2条与试验设计相符的443 bp(CSFV)和246 bp(PRRSV)特异性条带。应用该二联RT-PCR方法检测猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)结果均为阴性,证明该方法有良好的特异性。将已知阳性病毒PCR模板最高稀释倍数作为PCR的敏感度,结果表明该二联RT-PCR体系扩增的敏感度为10-3,可对CSFV和PRRSV单个或混合感染的临床样品进行快速鉴别诊断。     

莪术油注射液的制备及体外抗PRRSV作用试验

为筛选抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的中药,制备了莪术油注射液,并以其为试验药物,同时以利巴韦林注射液作为对照药物,观察在体外细胞上对PRRSV的作用效果。结果表明,自最大安全浓度(质量浓度)作倍比稀释后,二者对PRRSV均具有一定的抑制、杀灭和阻断作用。其中,莪术油注射液对PRRSV的杀灭作用较为突出,利巴韦林注射液杀灭和抑制作用均较为显著。     

广西PRRSV、PCV、CSF的混合感染及PRRSV分子病原学研究

为了弄清2007年发生于广西一些县市猪场的高致病性猪繁殖与呼吸综合征和其他疾病的混合感染情况,从广西7个县市发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征的猪场采集病料,进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV)及猪瘟病毒(CSF)检测,并对检测的PRRSV进行分子病原学分析。结果显示,经PCR检测,86份样品中有60份为PRRSV阳性,36份为PCV阳性,2份为CSF阳性,说明发生于广西猪群的PRRSV与PCV共感染情况比较严重。通过PRRSVORF5基因序列比较分析发现,来自广西7个县市不同猪场的PRRSV高度同源,核苷酸序列同源性为98.5%~99.8%,推导编码的氨基酸序列同源性为98.0%~100.0%;与VR2332和LV株的核苷酸序列同源性分别为88.7%~89.7%和62.2%~63.1%,氨基酸序列同源性分别为88.6%~89.6%和60.5%~61.3%,表明7个县市不同毒株的ORF5基因区域变异不大,均属美洲型。     

1株PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异情况,将PRRSV阳性病料处理后接种Marc-145细胞,成功分离到1株PRRSV毒株,将其命名为HENZXC-4,并对其全基因组序列进行测定和分析。结果表明,HENZXC-4为未发生重组的类NADC30毒株,其NSP2蛋白存在131个氨基酸不连续缺失,且其GP5蛋白存在1个氨基酸插入。     

RT-PCR检测猪粪便中猪繁殖与呼吸综合征病毒方法的建立

通过逆转录-聚合酶链扩增(RT-PCR)反应,建立从猪粪便中检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)RNA的方法,以此方法检测了2个猪场8份样本,结果显示6份猪繁殖与呼吸综合征病毒阳性。