鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性

为研究鸭源鸡杆菌(G.anatis)体外黏附和侵袭细胞的能力,选择HeLa细胞为感染模型,分别以细菌黏附和侵袭HeLa细胞数量为指标,借助革兰和姬姆萨染色及电镜观察来研究2株不同来源的鸭源鸡杆菌对HeLa细胞的黏附和侵袭特性。结果显示:黏附计数表明鸭源鸡杆菌Yu-PDS-RZ-1-SLG能高水平黏附HeLa细胞,菌株感染30、60、90、120、150min后每细胞黏附的细菌数分别为0.84、4.68、8.52、9.27、8.2个,而菌株F149T对HeLa细胞有较低的黏附作用。侵袭试验表明Yu-PDS-RZ-1-SLG有低度侵袭力,侵袭的细菌数在150min时达到最大,约8.27·1 000细胞-1,随后细胞破碎,细胞逐渐脱落,而菌株F149T未检测到侵袭力。染色及电镜试验进一步证实鸭源鸡杆菌Yu-PDS-RZ-1-SLG可黏附于HeLa细胞表面并侵入细胞内部。菌株经胰蛋白酶处理后,细菌的黏附率显著降低,表明细菌的表面蛋白参与黏附。黏附和入侵特性是鸭源鸡杆菌定殖在组织表面重要的能力,该细胞模型的建立为进一步研究其致病机制提供了条件。     

鸡卡氏杆菌的分子鉴定及其16S rRNA基因序列分析(英文)

Two strains of Gallibacterium, isolated from one laying hen flock in Zhengzhou City of Henan Province, were identified by the morphological observation, genus-specific PCR, and analysis of 16S rRNA gene, which was used to generate the phylogenetic tree, with the 21 members of the 12 genera belonging to Pasteurellaceae to analyze the homology. Two strains were named Yu-ZZ-HL-I-SLG and Yu-ZZ-HL-II-GZ. The comparative result of the 16S rDNA sequence shows that the 2 isolated strains are identical in sequence; the highest identity (99.9%) was observed between the isolated strain and one of the strains of Gallibacterium anatis (AF228002), the homologies between the isolated strain and 3 strains of gallibacterium accessed in NCBI (AF228016, Gallibacterium genomosp.1, AF228017, Gallibacterium genomosp.2, AF228018, Gallibacterium genomosp.1) were above 97.1%, higher than that of the isolated strain and the other strains of the other 11 genera which were between 90.7%-93.2%. It can be seen from the phylogenetic tree that the 2 isolated strains and the other 4 strain of gallibacterium fell into the same branch, furthermore the 2 isolated strains and the strain of Gallibacterium anatis locate in an internal branch, indicating that the 2 isolated strains belong to Gallibacterium anatis.     

鸭源鸡杆菌flfA基因的克隆及功能区域分析

为了解鸭源鸡杆菌(G.anatis)菌毛蛋白Flf A的分布情况及功能,对18株G.anatis中国分离株的flfA基因进行扩增和分子克隆,应用相关软件对其核苷酸序列及氨基酸序列进行生物信息学分析。结果显示,18株G.anatis均具有flfA基因,核苷酸同源性为70.2%~99.8%,氨基酸同源性为63.1%~98.8%,有6~8个B细胞抗原表位,且这些优势的抗原表位多位于保守序列区,表明G.anatis不同菌株间可能存在交叉免疫反应。     

鸭源鸡杆菌外膜蛋白W基因扩增及序列分析

为了解不同鸭源鸡杆菌菌株外膜蛋白W基因(ompW)的差异性,对不同地域32株鸭源鸡杆菌ompW基因进行扩增、测序,并应用DNAstar/MegAlign和MEGA.5.05软件对其进行比对及遗传进化分析。结果表明:ompW基因存在于所有检测的鸭源鸡杆菌中。全长在630~711bp,编码209~236个氨基酸。与参考株UMN179的ompW核苷酸同源性为88.7%~100%,氨基酸同源性为86.7%~99.6%。不同来源的鸭源鸡杆菌的核苷酸同源率为84.1%~100%,氨基酸同源性为78.7%~99.6%。进化树分析表明,鸭源鸡杆菌ompW序列差异与分离地理位置,毒力无明显的相关性。     

基于学科交叉融合的校本课程建设与实践--以“发酵中兽药炮制学”为例

为更好地适应人才培养需求,支撑畜牧业健康发展,在“发酵中兽药炮制学”课程前期建设的基础上,经过教学团队精心组织、调研和建设,完成了基于学科交叉的国内农业院校首家开设课程“发酵中兽药炮制学”特色校本课程的建设。建设期内,修订完善了2020版教学大纲和教案;完成了河南省高等学校精品在线开放课程“发酵中兽药炮制学”的建设,其中上传视频34个、PPT课件34个、随堂测验34套、单元测验9套;编写了国内第一本《发酵中兽药炮制学》应用型本科教材,并被立项为农业农村部“十三五”规划教材。“发酵中兽药炮制学”课程体系的建设对畜牧兽医专业人才培养及该课程在农业院校的推广具有重要作用。     

鸭源鸡杆菌gtxA突变株构建及其生物特性分析

为了了解毒素GtxA对鸭源鸡杆菌(Gallibacterium anatis,G.anatis)生物学特性及致病性的影响,利用自然转化和正向筛选法构建了1株G.anatis gtxA缺失突变株,初步探究突变株的生物学特性。与亲本菌株比较,突变株溶血活性消失,菌落形态及生长速率并未出现显著改变,其对小鼠的致病力下降。外毒素GtxA参与G.anatis致病过程并扮演一定角色;G.anatis gtxA基因突变株的构建及其生物学特性探究为更好的了解其致病机理和研发出更为高效安全疫苗建立了理论基础。     

外膜蛋白W与鸭源鸡杆菌抗渗透应激相关

为了解外膜蛋白W（outer membrane protein W,OmpW）在鸭源鸡杆菌抗渗透应激中的作用,分析了鸭源鸡杆菌RZ及其ompW基因缺失株ΔompW在渗透应激环境中的生存能力和生长性能差异;并通过SDS-PAGE及Western blot分析了两者外膜蛋白在不同盐度下的表达差异,并用实时定量PCR分析了OmpW mRNA的表达。结果显示：相对于鸭源鸡杆菌RZ,ΔompW在高渗透环境中（3% NaCl）的生存率较低（95.17% vs 83.50%,P<0.05）,且其生长性能受渗透应激影响更大;在高盐BHI中培养时,鸭源鸡杆菌RZ OmpW的表达被上调,且OmpW mRNA的表达被上调至正常盐度（0.5%）时的1.19倍（P>0.05）。本研究表明OmpW与鸭源鸡杆菌抗渗透应激有关。     

鸡卡氏杆菌的分子鉴定及其16S rRNA基因序列分析

2003年Christensen等将过去归为输卵管炎放线杆菌、禽溶血性巴氏杆菌及鸭巴氏杆菌的细菌归为巴氏杆菌科中的一个新属——卡氏杆菌属。卡氏杆菌主要引起产蛋母鸡发病,可以导致输卵管炎、卵巢炎、腹膜炎、败血症、心包炎、肝炎、肠炎和呼吸道疾病等。     

1株PRRSV类NADC30毒株的分离鉴定及序列分析

为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)流行株的变异情况,将PRRSV阳性病料处理后接种Marc-145细胞,成功分离到1株PRRSV毒株,将其命名为HENZXC-4,并对其全基因组序列进行测定和分析。结果表明,HENZXC-4为未发生重组的类NADC30毒株,其NSP2蛋白存在131个氨基酸不连续缺失,且其GP5蛋白存在1个氨基酸插入。