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1.
根据GenBank中BVDV-1、BVDV-2、CSFV及新出现瘟病毒的基因序列,设计2对特异引物,建立了能鉴别诊断BVDV与CSFV的Nested-PCR检测方法;确定其方法的特异性、敏感性、稳定性。建立的Nested-PCR能从BVDV标准毒株、猪源BVDV毒株中扩增198bp特异性片段,对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒检测结果为阴性。结果表明,该方法具有较好特异性;其敏感性可检测到0.195fg RNA模板量;经重复性试验表明该方法具有良好稳定性。初步应用检测表明,猪BVDV阳性率较高,达36.0%;牛血清及其制品、猪瘟活疫苗BVDV污染严重。本试验建立的Nested-PCR具有敏感、特异和稳定等特点,可用于临床诊断和流行病学调查。 相似文献
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1株猪源牛病毒性腹泻病毒的分离与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:1
从BVDV阳性仔猪病料中分离病毒,为开展猪源BVDV病原学研究奠定基础。将处理后BVDV阳性仔猪组织样品接种MDBK细胞,分离到1株猪源BVDV,命名为SD0803株。通过细胞培养、直接免疫荧光、5′-UTR与Npro PCR扩增、电镜观察、TCID50测定及对其分子进化特征加以分析。结果表明,该毒株在MDBK细胞上盲传至13代未出现细胞病变。在直接免疫荧光试验中呈阳性荧光信号。PCR扩增分别获得5′-UTR与Npro预期大小DNA片段。电镜观察,病毒粒子略呈圆形,有囊膜,直径约50nm。病毒滴度为10-6.5 TCID50.0.2 mL-1。SD0803 5′-UTR、Npro序列进化分析显示,该分离株属于BVDV-1,与已知BVDV-1各亚型之间同源性较低,单独成一分支。结果表明,成功分离鉴定1株猪源BVDV SD0803,该毒株为非致病变型BVDV-1,极有可能为BVDV-1新的亚型。 相似文献
3.
查明猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)致病性大幅增高的机制,进而研制用于防治流行PRRSV变异株的高效疫苗无疑是兽医工作者的当务之急.在弱毒株APRRS的全长感染性克隆pAPRRS以及我室构建的高致病性HP PRRSV感染性克隆pJX143的基础上,构建了nsp2替换的强弱毒PRRSV嵌合感染性克隆.将构建的嵌合克隆转染MA104,4d后观察到典型的CPE.通过RT-PCR和免疫荧光证明获得了一系列强弱毒株之间的嵌合病毒.这些嵌合病毒的构建成功和相应反向遗传操作平台的建立及应用,为研发预防HP PRRSV的高效嵌合疫苗奠定了基础.该类嵌合感染性cDNA克隆也为解析目前流行的HP PRRSV毒力因子和高致病力机制奠定了基础. 相似文献
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猪博卡病毒PCR检测方法的建立及其应用 总被引:2,自引:0,他引:2
猪博卡病毒是最新发现的一种DNA病毒,于2009年首次在瑞典患仔猪断奶后多系统衰竭综合征的猪体内被鉴定。为了及时地评估其在我国的流行情况,本研究根据GenBank上递交的唯一一条猪博卡病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,并首次建立了猪博卡病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好,对2009年我国部分省市猪场的191份临床样品进行检测,结果75份为猪博卡病毒阳性,这表明我国猪群中猪博卡病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以作为猪博卡病毒在临床上的一种诊断技术。 相似文献
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三种猪繁殖与呼吸综合征疫苗免疫效果评价 总被引:2,自引:0,他引:2
为研究不同猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)疫苗的的免疫特性,分别采用PRRSV变异株(JXA1-R)弱毒疫苗、经典PRRSV(VR 2332)弱毒疫苗、变异株(JXA1)灭活疫苗,免疫接种PRRSV抗原和抗体阴性的健康断奶仔猪,免疫接种后70d用PRRSV变异株强毒攻毒,ELISA检测血清中PRRSV特异的抗体水平及IFN-γ、IL 2、IL 4、IL 8、IL 10的水平,并进行临床症状和肺部病理组织学观察和评分。结果表明,VR 2332、JXA1-R弱毒疫苗对免疫猪攻毒保护效果差异不显著,均为63.6%(7/11),JXA1灭活疫苗免疫攻毒保护效果较差,为36.4%(4/11)。试验还发现病毒感染猪血清中细胞因子IFN-γ和IL-10的比值可以作为评价疫苗免疫效果的一个指标。 相似文献
6.
研究猪感染猪细小病毒4型(porcineparvovirustype4,PPV4)后的症状、血清中病毒DNA拷贝数的变化以及病毒在猪体内的分布,并研究病毒对猪器官组织的嗜性。对试验猪接种PPV4阳性血清,观察PPV4感染猪后的临床症状以及脏器病理变化,利用已建立的PPV4Taqman荧光定量PCR检测方法,定量检测人工感染试验猪血清和各脏器中PPV4DNA拷贝数。PPV4感染猪呈现病毒血症,在8d后血清中病毒含量最高,之后逐渐降低。试验猪感染PPV4后前期主要是呼吸道症状,之后好转,无其他症状。试验猪主要的病理变化在于肺脏淤血以及全身淋巴结肿大。PPV4可以侵害试验猪多个器官,前期在肺脏以及扁桃体中PPV4DNA含量较高,后期在肠道以及泌尿道含量较高。血清富集PPV4病毒电镜观察可见疑似PPV4病毒粒子。试验证明,PPV4具有快速感染性,PPV4对猪并无致死性,主要影响生产性能,对肺脏以及肠道器官组织的嗜性最强。 相似文献
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猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV2)是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型:PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法(涉及到引物、PCR体系及程序)进行优化,并应用优化的鉴3qPCR方法对1184份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30.5%(36/118),PCV2b占37.3%(44/118),共感染占32.2%(38/118),与常规PCR检测结果符合率为100%,此外,对30份,瞄床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。 相似文献
8.
单股正链RNA病毒数量众多,对人、动物和植物造成很大的危害。病毒基因组3'末端都具有一段非编码区,基因组3'非编码区在病毒的复制过程中发挥着重要的作用。本文简单介绍了单股正链RNA病毒基因组3'非编码区结构的预测、测定和功能的研究方法,并重点概括了不同单股正链RNA病毒3'非编码区一级序列、茎-环结构、假结体、TLS等结构在病毒基因组的复制、转录和翻译中的调控作用以及目前存在的问题。 相似文献
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通过建立多种不同的与管理活动相接近的模型是更好了解对PRRSV免疫保护机制的关键。更好的在呼吸与生殖两方面了解抗PRRSV的免疫应答将会带来更敏感、更有影响力以及更有区别性的诊断。 相似文献
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动物基因工程疫苗研究进展及我国应采取的对策 总被引:1,自引:0,他引:1
动物基因工程疫苗研究进展及我国应采取的对策袁世山,徐宜为(哈尔滨兽医研究所)动物传染病是制约畜牧业发展的最大障碍之一。如何有效地预防控制乃至消灭动物传染病是兽病工作者的重大课题。目前使用的常规疫苗有两类,即灭活苗和减毒或无毒活苗常规疫苗的研制及应用无... 相似文献