兔支气管败血波氏杆菌OMP-ELISA抗体检测方法的建立

为简便快速检测支气管败血波氏杆菌(Bb)，建立了一种特异、敏感的间接ELISA方法。通过应用超声波裂解和超速离心法提取了支气管败血波氏杆菌Ⅰ相菌外膜蛋白(OMPs)，并用该蛋白包被酶标板，经特异性、敏感性和重复性试验优化后建立间接ELISA方法。结果表明，试验确定抗原的包被浓度为14.44μg/ml，可检测血清最高稀释度达1：400；该方法有很高的特异性和敏感性，与微量凝集试验相比，敏感性提高约33倍；该方法重复性良好。     

兔大肠杆菌结膜炎的诊治

山东省某养殖场饲养的长毛兔于 2 0 0 0年 4、5月份 ,发生大肠杆菌引起的结膜炎病 ,主要表现为化脓性眼部炎症 ,皮肤形成脓疱 ,重者眼睛失明 ,直到死亡 ,发病率在 5%左右。经实验室诊断后 ,采取了相应的措施 ,本病得到控制。1　发病与病状今年 4月初 ,该养殖场有兔发生结膜炎 ,初时患眼流泪 ,眼睑肿胀 ,结膜红肿、毛细血管充血 ,继而患眼出现浆液性、脓性的分泌物 ,分泌物流经处局部出现被毛脱落 ,皮肤破溃 ,表皮发红 ,有的兔在脸部形成脓疱 ,后期患眼失明 ,精神沉郁 ,少食 ,最后死亡。2　细菌学检查2 .1　细菌的分离培养把未经治疗的兔的患…     

兔支气管败血波氏杆菌不同感染途径研究

用兔支气管败血波氏杆菌分离株BJL0504菌株(I相菌)经滴鼻、肺内、气管、静脉、皮下对30～40日龄兔攻毒,并进行临床观察和微生物学检查,比较不同攻毒方法的优势。结果显示,经静脉注射的家兔发病率和死亡率高,症状较典型;经肺内注射也可以引起部分发病和死亡;滴鼻和气管注射感染均可以复制到典型的临床症状,但是解剖病变都不明显。由此可见,支气管败血波氏杆菌经静脉攻毒可以较好的复制病例,这对支气管败血波氏杆菌的致病机理的研究、疫苗的研制和评价提供了理论基础。     

中药成分复方对免外周血淋巴细胞增殖、IFN-Y和IL-10的mRNA表达以及兔出血症疫苗免疫效果的影响

[目的]研究两个中药成分复方(cCHMIs)的免疫增强作用和机理.[方法]选择黄芪多糖、淫羊藿多糖、蜂胶黄酮和人参皂苷4种中药成分组成两个复方,用MTT法和荧光定量RT-PCR法测定它们对兔外周血淋巴细胞增殖和IFN-y.IL-10 mRNA的表达影响;并将两个复方作为佐剂,配合兔出血症疫苗免疫幼兔,以铝胶苗和无佐剂苗为对照,分别于免疫后7、14、21、35、49 d用MTT法和血凝抑制法测定外周血淋巴细胞增殖和血清抗体的动态变化,于免疫后63 d测定免疫器官指数和攻毒保护率.[结果]两个复方在体外均可以显著促进淋巴细胞增殖,提高淋巴细胞IFN-Y、IL-10mRNA的表达;作为佐剂,两个复方可以显著提高免疫兔的血清抗体效价,促进体内淋巴细胞增殖,显著促进圆小囊、肠淋巴结等免疫器官的发育,有较高的攻毒保护效果.[结论]两个复方中药成分具有较强的免疫增强作用,可被开发成新型的免疫增强剂.     

卵磷脂水解抑制试验测定家兔血清中的抗α毒素水平

以卵磷脂水解试验为基础 ,根据α毒素在被抗毒素完全中和后将出现水解抑制这一原理 ,建立了测定家兔血清抗α毒素水平的卵磷脂水解抑制试验方法。结果显示 ,卵磷脂水解抑制试验可用于测定不同血清样品的抗α毒素水平 ,抗血清完全中和单位剂量α毒素时 ,水解抑制试验结果明显。所能测定出的最小血清抗体量相当于中和 1/ 6 4MLD毒素的量 ,最适毒素中和时间为 30min ,其敏感性和精确性优于小鼠毒素中和试验 ,且操作简单 ,取材经济 ,易于推广应用     

A型魏氏梭菌毒素毒力测定替代试验

通过Kaerber方法测定α毒素对小鼠的半数致死量后 ,定量出 10LD50 毒力标准的毒素所能引起卵磷脂水解反应的稀释度为 6 ,每一水解稀释度相当于LD50 /6 4的毒力标准 ,从而建立起A型魏氏梭菌毒素毒力测定动物试验的替代试验。α毒素毒力与卵磷脂水解反应的浑浊度在该试验条件下具有稳定的相关性 ,不同批次的卵磷脂及毒素中所含菌体的数量对试验结果的判定无影响。该替代试验比原方法操作更简单 ,取材也经济 ,并能对毒素毒力进行定量计算     

兔源多杀性巴氏杆菌C51-17株ompA基因表达与免疫原性鉴定

[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C51-17株ompA基因表达与蛋白免疫原性鉴定.[方法]根据GenBank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompA基因,开放阅读框包含l 062 bp碱基,插入到pGEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体pGEX-dompA,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白ompA.[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白ompA分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性.[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础.     

一例波杂山羊葡萄球菌病与大肠杆菌病混合感染的初步诊断

安徽省固镇某羊场3～4月间发生了一起疫情,部分未成年波杂山羊尤其羔羊出现连续发病和死亡。通过采取病死羊病料做病原分离鉴定,结合发病情况、临床症状、剖检病变和药物治疗结果,将该次疫情初步诊断为波杂山羊葡萄球菌病和大肠杆菌病混合感染。     

A型产气荚膜梭菌α毒素的提纯试验

应用硫酸铵盐析、SephadexG 2 5和SephadexG 1 0 0层析的方法提纯A型产气荚膜梭菌α毒素 ,并利用卵磷脂水解试验监测α毒素的析出峰。结果表明 ,以 50 % (W/V)硫酸铵盐析A型产气荚膜梭菌α毒素 ,经SephadexG 2 5过柱后能很好地层析脱盐 ,并初步提纯 ,再经SephadexG 1 0 0层析后则能得到相对较纯的α毒素。该方法快速、简便     

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A)型三联灭活疫苗研制

对 5批兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病三联灭活疫苗进行了动物试验 ,结果表明该疫苗安全有效。近期效检对兔病毒性出血症的保护率为 1 0 0 % ,对兔多杀性巴氏杆菌病保护率为 92 % ,对产气荚膜梭菌病 (A)型保护率为 88%。在免疫期试验中 ,免疫 6个月后 ,对兔病毒性出血症保护率为 1 0 0 % ,对多杀性巴氏杆菌病的保护率为 79% ,对产气荚膜梭菌病 (A)型的保护率为 88%。在保存期试验中 ,4～ 8℃保存 1年仍有效。