猪流行性腹泻病毒Nsp5基因的原核表达及生物信息学分析

旨在对猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)Nsp5基因进行原核表达,利用生物信息学软件,预测其编码蛋白的结构和功能,为了解PEDV致病机理奠定基础。本研究克隆PEDV/LY/2014/04毒株的Nsp5基因,亚克隆进pET-28a(+)原核表达载体,PCR和酶切验证重组质粒的构建,重组质粒pET-28a(+)-Nsp5转入E.coli BL21(DE3)中,SDS-PAGE检测Nsp5的表达和His band Ni+纯化情况,Vector NTI Advance等软件对Nsp5蛋白氨基酸组成、抗原表位、二级和三级结构进行预测和分析。结果表明,成功克隆并构建了重组质粒pET-28a(+)-Nsp5,表达重组蛋白大小约22 ku,且主要以包涵体形式存在,His band Ni+纯化后获得高纯度重组蛋白。Nsp5蛋白是由196个氨基酸残基组成的多肽,其分子质量的理论值为21 820.07 u,理论等电点(pI)为8.734,略偏碱;二级结构骨架中α-螺旋(h)占55.61%,β-折叠(t)占7.65%,无规则卷曲(c)占20.92%,延伸链(e)占15.82%;Nsp5蛋白质的三级结构中,中间段以α-螺旋为主作为骨架,C端多个复杂二级结构构成该蛋白的酶活性中心;B细胞抗原表位的预测,表明有15个潜在的B细胞优势表位。本研究为猪流行性腹泻病毒Nsp5蛋白质的生物学功能相关研究提供数据支持。     

猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品。以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测。结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2 μmol·L-1,线性检测范围为2.1×1013~2.1×106拷贝·L-1,最低检测限值为8.828×106拷贝·L-1,且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好。本研究建立的敏感性高、特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具。     

18种植物挥发物对柳黑毛蚜行为的调控效应

柳黑毛蚜是危害园林植物最严重的害虫之一。选择18种植物挥发物，用Y型嗅觉仪对柳黑毛蚜进行行为测定，结果表明，柳黑毛蚜对青叶醇的选择达到极显著水平（p<0.01），对反-β-罗勒烯、芳樟醇、反-2-己烯醛、苯甲醛、顺-3-己烯乙酸酯的选择达到显著水平（p<0.05）。将这6 种挥发物等比例混合，行为测定结果显示，柳黑毛蚜对混合组分具有极显著趋向性（p<0.01）。将这6种挥发物单组分及混合组分制成引诱剂，分别与素馨黄粘板组合，制成柳黑毛蚜诱捕器，于园林生态系统中试验，结果表明，6种挥发物单组分对柳黑毛蚜均表现出引诱活性，其中素馨黄粘虫板附加青叶醇(Z)-3-Hexenol的防治效果较为显著，2、6 d后的防效分别为46.65％、31.58％，而素馨黄粘虫板附加挥发物混合组分后的防治效果最为显著，2、6 d后的防效分别为53.50％、41.09％，达到了目前的生物防治水平。     

采油工程室内实验管理系统的开发

针对采油工程实验室管理相对落后的现状,从系统设计思想、软件功能模块等方面入手,开发出了采油工程室内实验室管理系统,该系统可提高试验工作流的执行力度,确保科研项目室内试验有序展开,满足科研管理的需要。     

一种基于B/S的注入水水质数据管理系统设计

油田进入高含水开发后期,注水驱油对注入水质量提出了更高要求。结合水质检测数据录入、审核、数据管理等操作,以及用户对数据查询的功能要求,利用网络 Web、数据库、网络办公自动化等技术对水质检测数据库建设、水质检测数据的管理、查询及数据信息安全等方面进行研究,设计出一套 B/S模式的注入水水质数据管理系统。实际应用表明,该系统具有操作简单、容错性强的特点,可以在油田采油生产管理和技术研究部门中推广应用。     

不同寄主植物对柳黑毛蚜行为的引诱力初探

为探讨园林生态系统中寄主植物对柳黑毛蚜行为的影响,以5种寄主植物柳树、栾树、桃树、蔷薇、月季的粗提物结合昆虫粘板研制诱捕器进行试验,结果表明,5种植物挥发物粗提物在合适剂量下对柳黑毛蚜均表现出引诱活性。通过深入研究这些寄主植物中的挥发物组分,并筛选活性组分,探究关键化合物对柳黑毛蚜行为的调控。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒17-ZJ-HZ毒株的分离鉴定与分子流行病学分析

杭州某猪场断奶仔猪群出现高热、呼吸困难等症状,疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染,3头病猪肺脏病变样本送本实验室检测,通过RT-PCR方法检测其病原核酸。肺脏匀浆液无菌处理接种到MARC-145细胞,细胞病变观察、Western-blot、间接免疫荧光等方法验证PRRSV病毒分离情况;RT-PCR方法分五段扩增获得全长病毒基因组序列,采用MEGA等软件分析该毒株的核苷酸序列以及GP5、NSP2氨基酸序列;分离病毒接种3日龄PRRSV阴性仔猪,评价该病毒的毒力。结果表明:该场送检样品为PRRSV阳性;成功分离得到17-ZJ-HZ病毒;获得15 325 bp的 PRRSV全基因组序列。序列分析表明,该毒株与经典北美株的NSP2存在典型的29+1个氨基酸的缺失,且进化分析归于HP-PRRSV亚群。攻毒60 h后猪只出现典型的PRRSV临床症状和病理变化,以上结果表明该毒株为高致病性PRRSV(highly pathogenic PRRSV, HP-PRRSV)的北美株。