莫能菌素人工抗原合成及其多克隆抗体的制备

通过莫能菌素羟基与琥珀酸酐反应,合成半抗原莫能菌素-琥珀酰半酯,采用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联制备人工抗原,以此人工抗原免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体.试验结果表明,莫能菌素结合抗原免疫家兔制备的抗体对莫能菌素具有很高的特异性、亲合性和选择性.用此抗体建立的莫能菌素间接竞争酶联免疫吸附检测方法的标准工作曲线I50值为37.9 ng/ml,最低检测限(I10)为2.09 ng/ml.     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

己烯雌酚多克隆抗体的制备研究

合成了具有己烯雌酚基本分子结构特性并带有一个羧基活性基团的半抗原CP-DES,用混合酸酐法将其与BSA偶联后免疫6只BALB/c雌性小鼠,获得了特异性的己烯雌酚多克隆抗体。以所得抗体建立间接竞争性酶联免疫吸附分析法(cELISA)用于己烯雌酚的检测,最低检测限为0.04 ng.mL-1。交叉反应表明,己烯雌酚的特异性抗体与其结构类似物无明显交叉反应。     

双抗夹心酶联免疫分析法检测食品中鸡蛋过敏原

[目的]建立食品中鸡蛋过敏原的酶联免疫检测方法。[方法]以卵白蛋白为检测对象,分别制备抗卵白蛋白的多克隆和单克隆抗体。将单克隆抗体作为包被抗体,辣根过氧化物酶标记多克隆抗体为二抗构建卵白蛋白的双抗夹心ELISA方法。[结果]该方法的IC50为260 ng/ml,检出限为10 ng/ml,样品的添加回收率为84.2%～89.8%,相对标准偏差小于10%。[结论]该试验建立的分析方法稳定可靠,能满足食品中鸡蛋过敏原准确、快速的检测需要。     

2,4-D残留检测的ELISA方法的建立和初步应用

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG,建立了间接抑制酶联免疫吸附法,测定了地下水、蔬菜和原粮等样品中的2,4-D含量。结果表明,间接抑制ELISA检测样品中的2,4-D含量变异系数小于15%,样品回收率误差在15%以内;工作曲线表明,在50～2000ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系,检测底限为50ng/ml,低于我国规定残留限量(200ng/ml)。因此,本研究建立的间接抑制ELISA法检测地下水、蔬菜和原粮中的2,4-D含量是可行的。     

2,4-D残留检测的ELISA方法的建立和初步应用

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG,建立了间接抑制酶联免疫吸附法,测定了地下水、蔬菜和原粮等样品中的2,4-D含量.结果表明,间接抑制ELISA检测样品中的2,4-D含量变异系数小于15%,样品回收率误差在15%以内;工作曲线表明,在50～2000ng/ml浓度范围内呈良好的线性关系,检测底限为50ng/ml,低于我国规定残留限量(200ng/m1).因此,本研究建立的间接抑制ELISA法检测地下水、蔬菜和原粮中的2,4-D含量是可行的.     

动物组织中氯霉素残留快速检测方法研究

采用酶联免疫分析法(ELISA法)对动物组织中氯霉素的残留检测进行了研究。氯霉素浓度在0.05-4ng/mL范围内呈线性关系,线性方程为y=-0.321x 0.8193,R2=0.9985。IC50为1.0ng/mL,样品添加回收率为67%-98%,变异系数小于5.5%,最低检测限为0.05 ng/mL。乙酸乙酯提取法回收率为73%-98%,乙腈水提取法回收率为67%-94%。     

一种呋喃西林酶联免疫检测方法的建立

[目的]建立一种饲料中呋喃西林酶联免疫检测方法。[方法]利用制备的人工抗原和高特异性单克隆抗体,采用间接竞争酶联免疫技术建立呋喃西林检测方法。[结果]在优化条件下,检测抗原浓度为10μg/mL,抗体稀释度为1∶5 000。呋喃西林在0.1～10.0 ng/mL具有较好的线性关系(R~2=0.998 7),IC_(50)为1.43 ng/mL。与呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林代谢物氨基脲的交叉反应率低于0.5%。饲料样品中添加呋喃西林的平均回收率为87.5%～96.0%,变异系数为6.1%～9.7%。[结论]该方法快速、准确、灵敏,可用于饲料中呋喃西林的分析检测。     

驼源莠去津多克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫吸附分析方法的建立

为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试验。结果表明：通过优化反应体系,确定最优NaCl浓度为0.2 mol/L,最优甲醇浓度为5%,最佳缓冲液pH值为7.4,在最优条件下,间接竞争酶联免疫分析法的IC50为12.13 ng/mL;同时利用其他3种三氮苯类除草剂及常见环境代谢物进行了多克隆抗体的特异性试验,其对特丁津、西玛津和对去异丙基莠去津的交叉反应率较高,其他化合物交叉反应率较低;取河流水进行了实际样品的添加回收试验,试验结果与LC-MS比对,添加回收率在90.1%～114.2%之间,说明驼源多克隆抗体的莠去津间接竞争酶联免疫吸附分析方法可用于检测环境实际样品。     

己烷雌酚抗原合成和多克隆抗体制备

为了对己烷雌酚进行检测,采用混合酸酐法,合成具有己烷雌酚基本分子结构特性的半抗原。以己烷雌酚-牛血清白蛋白为抗原免疫家兔,获得了特异性的己烷雌酚多克隆抗体。结果表明:己烷雌酚半抗原与牛血清白蛋白偶联的摩尔比为12.93∶1。今后可将所得抗体用于间接竞争性酶联免疫吸附分析法用于己烷雌酚的检测。     

沙丁胺醇免疫原的合成与鉴定

将沙丁胺醇(SAL)经过琥珀酸单酯化后,采用混合酸酐法与载体蛋白偶联,用紫外扫描(UV)和变性凝胶电泳(SDS-PAGE)方法检验偶联效果,推算分子结合比;制备全抗原后免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性。UV和SDS-PAGE分析结果表明,成功制备了BSA-HS-SAL,SAL-HS与BSA的分子结合比为11∶1;ELISA结果表明,获得了高效价、敏感的SAL多克隆抗体,为SAL残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

兔抗IVM多克隆抗体的制备

将伊维菌素(IVM)进行化学修饰,引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的伊维菌素半琥珀酸酯(IVM-HS):然后采用NHS法和混合酸酐法将半抗原与聚-L-赖氨酸(PLL)和卵清蛋白(OVA)相偶联,制备人工免疫原(PLL-IVM-HS)和包被原(OVA-IVM-HS);经凝胶电泳鉴定,用人工免疫原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体(pAb),间接EUSA测定其效价.结果人工免疫原偶联成功,分子结合比为25.3:1,获得了高价、敏感、特异性的IVM pAb,为IVM残留免疫学检测法的建立奠定了基础.     

大型溞ChE和NAGase间接竞争和非竞争ELISA方法的比较

[目的]探索间接非竞争ELISA和间接竞争ELISA法测定大型溞ChE和NAGase的试验条件及方法灵敏度。[方法]分别采用间接竞争和间接非竞争ELISA方法测定大型溞ChE和NAGase。[结果]对于ChE,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为1.466μg/m L和1∶10 000,灵敏度为7.426 7 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为5.277μg/m L和1∶8 000,灵敏度为0.163 4 ng/m L。对于NAGase,间接非竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为8.961μg/m L和1∶6 000,灵敏度为4.199 9 ng/m L;间接竞争ELISA的最适抗原浓度和抗体稀释倍数分别为6.450μg/m L和1∶4 000,灵敏度为0.250 8 ng/m L。[结论]无论是ChE还是NAGase,间接竞争ELISA在最适抗体浓度下的检测灵敏度均高于间接非竞争ELISA,加之其操作简便,间接竞争ELISA在生物和环境样品ChE和NAGase含量检测中值得推广应用。     

多环芳烃-菲单克隆抗体制备及鉴定

为快速、准确检测环境中的菲(Phe),研究制备了抗菲单克隆抗体,并分析了抗菲单克隆抗体的免疫学特性。采用活泼酯法将2-菲丁酸与载体蛋白(BSA、OVA)共价连接制备免疫抗原(Phe-BSA)和检测抗原(Phe-OVA)。通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳、紫外扫描图谱分析及计算偶联比验证偶联结果。采用足垫法免疫Balb/C小鼠,利用细胞融合技术、阳性杂交瘤筛选及克隆制备出抗菲单克隆抗体。结果表明:完全抗原制备成功,获得1株能稳定分泌抗Phe抗体的杂交瘤细胞株1G7,纯化后抗体效价为1∶6.4×105,亲和力常数为3.29×108L/mol。该单克隆抗体亚型为Ig G1,对Phe的IC50值为17.82 ng/m L,与5种多环芳烃具有交叉反应,可用于对环境中多种PAHs的广谱检测。     

枸橼酸氢钾钠颗粒与八正散对小鼠三聚氰胺中毒模型的治疗效果

【目的】观察八正散(bazheng powder,BZP)和枸橼酸氢钾钠颗粒(potassium sodium hydrogen citrate,PSHC)单独或联合用药对三聚氰胺中毒小鼠模型的治疗效果,为三聚氰胺中毒的临床治疗提供参考。【方法】以1 500 mg/kg三聚氰胺连续15 或30 d对小鼠灌胃0.4 mL/（只·d）,构建小鼠三聚氰胺中毒模型,然后将其分成生理盐水对照组和药物治疗组,用质量浓度为1.12,0.56,0.28 g/mL的BZP和含量为1.44,0.72,0.36 g/kg的PSHC单独或联合治疗,每天1次,灌胃量0.4 mL/（只· d）,7 和15 d后测定血清肌酐(CRE)、尿素氮( BUN)和尿酸(UA)浓度,治疗15 d后处死小鼠,取肾脏称质量,计算肾脏系数。【结果】治疗7 d后,治疗组血清指标CRE、BUN、UA值均比对照组低;与治疗7 d相比,治疗15 d 时,CRE、BUN、UA值进一步降低,且仍低于对照组。 除0.56 g/mL BZP+0.72 g/kg PSHC和1.44 g/kg PSHC组外,其他各治疗组小鼠总肾脏系数均显著低于对照组（P<0.05）。【结论】BZP和PSHC单独或联合用药对小鼠三聚氰胺（1 500 mg/kg）中毒有治疗效果。治疗7 d 时,0.56 g/mL BZP+0.72 g/kg PSHC组和0.28 g/mL BZP+1.44 g/kg PSHC组的联合治疗效果较好;治疗15 d 时,以0.28 g/mL BZP组的单独治疗效果及0.28 g/mL BZP+1.44 g/kg PSHC和0.28 g/mL BZP+0.36 g/kg PSHC组的联合治疗效果较好。     

抗麦草畏多克隆抗体的制备及其间接竞争ELISA检测方法的建立

为建立麦草畏的免疫分析方法,采用碳化二亚胺法将麦草畏(DIC)与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联,分别合成免疫原与包被原;用合成的免疫原免疫新西兰大白兔获得抗麦草畏多克隆抗体,该抗体效价为1∶1.28×105,且该抗体与麦草畏的结构类似物2,3,5-三氯苯甲酸、2,3,6-三氯苯甲酸、2-氨基-3,5-二氯苯甲酸的交叉反应率均小于0.1%。以包被原1∶8 000和多抗溶液1∶80 000的稀释倍数为工作浓度,建立麦草畏间接竞争ELISA(ciELISA)检测方法,此方法检测麦草畏的线性范围为1～100ng.mL-1,线性回归方程为y=8.684 4ln x+15.001,R2=0.994 4,最低检测限为IC20=1.779ng.mL-1;玉米粉和面粉空白样品的麦草畏添加回收实验表明,麦草畏添加值为5～30μg.kg-1时,玉米粉中的麦草畏回收率为53.08%～92.37%,面粉的回收率则分别为66.5%～94.63%。     

草甘膦残留的酶联免疫分析方法的建立

通过碳化二亚胺法将草甘膦(Glyphosate,GLY)分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清白蛋白(BSA)偶联制备免疫原和包被原。基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)检测表明,草甘膦与牛血清白蛋白和卵清蛋白的偶联比分别为11∶1和9∶1。合成的免疫原作用新西兰大白兔制备出草甘膦多克隆抗体,ELISA检测抗体溶液效价为1∶1×107,该抗体不与草甘膦的结构类似物增甘膦和双甘膦起交叉反应。以此抗体建立了草甘膦间接竞争ELISA检测方法(ciELISA),其线性范围为0.78～100μg/mL,线性回归方程为y=15.851 0 lnx+7.780 5,R2=0.993 8。草甘膦的检测限为IC10=1.15μg/mL,IC50=14.35μg/mL。在添加回收试验中,草甘膦添加值5和10μg/g时,玉米粉中的草甘膦回收率为104.12%和81.37%,小麦粉中的回收率则分别为118.94%和为109.39%。结果表明,采用所制备的多克隆抗体而建立的草甘膦ciELISA方法可有效地应用于玉米粉和小麦粉中草甘膦的残留检测。     

氯霉素人工免疫原的合成与鉴定

将氯霉素(CAP)进行化学修饰引入羧基活性基团,合成具有半抗原结构特征的氯霉素半琥珀酸酯(CAP-HS);采用混合酸酐(MA)法将CAP-HS与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫原BSA-CAP-HS和包被原OVA-CAP-HS,用红外(IR)、紫外(UV)、凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;用BSA-CAP-HS免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性,交叉反应试验鉴定其特异性。结果表明,CAP-HS与BSA合成成功,其分子结合比为15.6∶1,获得了高价、敏感、特异的CAP pAb,为CAP残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。     

己烯雌酚酶联免疫检测方法的建立

建立灵敏度高和特异性强的己烯雌酚残留检测分析方法。用人工合成的己烯雌酚免疫原多次免疫家兔,获取高效价抗体。纯化抗体经生物素标记,可同辣根过氧化物酶(HRP)标记的亲和素特异结合。采用纯化的抗体包被96孔板,形成固相抗体。加入不同浓度的己烯雌酚标准品后,再加入生物素标记抗体,以酶标记亲和素作为探针,经酶底物显色反应可获得良好的ELISA标准曲线。该方法检测灵敏度为0.125 ng/mL,可定量检测范围为0.25~15.60 ng/mL。该方法操作简便,具有较强灵敏度和特异性,可满足实践中一般样品的残留检测。