星豹蛛乙酰胆碱酯酶（AChE）活性测定及药剂对其活性的抑制作用

[目的]系统研究星豹蛛（Pardosa astrigera）乙酰胆碱酯酶（AChE）的性质,确定其抗药性的发生和发展及其抗性水平,建立快速、准确的AChE活性检测方法。[方法]采用正交试验设计确定星豹蛛不同部位AChE活性测定的最优条件组合,并在此基础上进一步研究豹蛛AChE的体躯分布及其对4种常用药剂的敏感度。[结果]星豹蛛头胸部、腹部和附肢AChE活性测定的最优条件组合是：酶浓度分别为12、18、29 g/L;底物浓度分别为0.6、1.0、1.0 mmol/L;反应体系pH值均为7.0;反应温度分别为30、35、35℃;反应时间均为5min。AChE主要分布在星豹蛛的头胸部,提取液中含有Triton X-100时,AChE的比活力要比无Triton X-100时大。灭多威、辛硫磷、高效氯氰菊酯、毒死蜱对星豹蛛头胸部中AChE的抑制中浓度（IC50）分别为7.76×10-5、1.76×10-4、4.12×10-4、4.94×10-4mol/L。[结论]星豹蛛体内AChE是膜结合的;4种药剂对星豹蛛头胸部中AChE的抑制具有很好的剂量效应,表明星豹蛛头胸部AChE可以作为环境中有机磷、氨基甲酸酯和拟除虫菊酯类农药污染的生物化学标记。     

绿盲蝽乙酰胆碱酯酶最佳反应体系的建立

为明确绿盲蝽[Apolygus lucorum(Meyer-Dür)]乙酰胆碱酯酶(AChE)活性测定的最佳反应条件,采用正交试验研究了酶浓度、底物浓度、反应时间、反应温度、反应体系pH值5个因素对绿盲蝽三龄若虫AChE活性测定的影响。通过极差分析和方差分析发现,各因素对AChE活性测定影响的大小顺序为:反应时间酶浓度底物浓度pH值反应温度。绿盲蝽若虫AChE活性测定的最适反应条件为:酶浓度6头/mL、底物浓度6mmol/L、反应时间5min、反应温度35℃、pH值8.0。     

茉莉花粗酶液酶解β-D-葡萄糖苷活性研究

以pNPG为底物,测定茉莉花中具有β-D-葡萄糖苷酶活性的粗酶液活性.最适反应条件为总反应体积1 mL,反应时间20 min,底物pNPG体积200 μL,浓度50 mmol·L-1,最适pH值6.0,最适反应温度50℃;并以此条件,研究茉莉花开放过程中粗酶液酶解β-D-葡葡糖苷的活性变化,结果表明该酶液随着茉莉花的开放,酶活性逐渐增高,直至萎蔫失水后,活性才降低.     

舞毒蛾羧酸酯酶最佳反应体系的确立

为了确定舞毒蛾(Lymantria dispar)羧酸酯酶(Car E)活性的最佳反应体系,运用正交试验测定了反应体系中酶浓度、底物浓度、p H值、反应温度和反应时间5个因素对Car E活性的影响。极差分析和方差分析显示,舞毒蛾Car E的最优反应体系为酶浓度0.2头·m L-1,底物浓度0.2 mmol·L-1,p H=7.5,反应温度45℃,反应时间10 min。     

环状芽孢杆菌果胶酶及木聚糖酶活性测定条件优化

为探明环状芽孢杆菌果胶酶及木聚糖酶的催化特性,更好发挥它们的催化性能,从pH值、温度、底物浓度、反应时间、离子浓度几个方面研究了环状芽孢杆菌A6中果胶酶与木聚糖酶活性测定的最适方法．结果表明,果胶酶活性测定的最适条件是：0．5％的果胶溶液用pH10．5的0．2mol／L甘氨酸-氢氧化钠缓冲液配制,测定温度45℃,酶反应时间5min;木聚糖酶活性测定的最适条件是：0．8％的木聚糖溶液用pH7．0的0．2mol／L,磷酸缓冲液配制,测定温度55℃,酶反应时间10min。     

朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶的表达纯化及其酶活测定条件优化

乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是生物体内保证神经信号正常传递的关键酶,是有机磷和氨基甲酸酯类农药的作用靶标。现研究拟采用发酵罐培养含pET-30a/ace的表达菌株E.coli BL21(DE3),大量表达纯化螨AChE,利用单因素试验和正交试验优化AChE活性的测定条件。结果表明:发酵培养的重组菌株大量表达约为68kD的朱砂叶螨AChE蛋白。底物浓度、温度、pH和酶浓度等各测定因素对朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性存在显著影响。确定朱砂叶螨乙酰胆碱酯酶活性测定的最佳反应条件为:底物浓度1mmol/L,pH值7,温度35℃,酶浓度0.5mg/mL。通过体外发酵培养纯化获得了大量的朱砂叶螨AChE重组蛋白,确定了螨AChE活性测定的最佳条件,为进一步研究其酶学性质以及AChE抑制剂的体外筛选奠定基础。     

百合鳞茎蔗糖合成酶活性检测体系的建立

为了建立富含多糖的百合鳞茎蔗糖合成酶(sucrose synthase,EC2.4.1.13,SuSy)活性检测体系,深入研究其蔗糖代谢机制,以兰州百合(Lilium davidii var.unicolor)鳞茎外层鳞片为试材,分别研究了提取缓冲液种类及pH值、反应温度、底物浓度以及缓冲液pH值对SuSy合成和分解方向活性的影响.结果表明:SuSy合成方向活性检测的最适提取缓冲液是pH值为7.8的TrisHCl,最适反应温度为50℃,底物果糖最适浓度为50 mmol· L-1,UDPG最适浓度为5 mmol·L-1,反应缓冲液Tris-HCl最适pH值为7.5;SuSy分解方向活性检测的最适提取缓冲液为pH值7.8的Hepes-NaOH,最适反应温度为40℃,底物蔗糖最适浓度为10mmol· L-1,UDP最适浓度为7 mmol·L-1,反应缓冲液Mes-NaOH最适pH值为4.5.     

尖孢镰刀菌中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

试验以对硝基-β-D-葡萄糖苷为底物,对尖孢镰刀菌中的β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件进行了研究,包括缓冲液pH值、底物浓度、反应温度和时间等条件对酶活性的影响。结果表明,当温度为50℃、pH5.0、底物浓度达到4 mmol/L、反应时间为16 m in时,酶活力达到最大。     

复合蛋白酶水解大豆制备大豆肽工艺的研究

以大豆蛋白为底物,加入复合蛋白酶进行水解,对反应温度、底物浓度、反应时间、pH值、酶用量等工艺参数进行了系统地研究,并分析了大豆肽含量及大豆蛋白水解度与各影响因子之间的关系;研究结果表明:最适温度为30℃、最适pH值为5.5、最适底物浓度为4.5 mg/ml、最适加酶量为8%(W/V)、最适反应时间为5 h,在此条件下酶解液中可溶性蛋白含量为3.05 mg/ml、水解度为73.11%。     

玉米中β-D-葡萄糖苷酶活性测定条件的研究

为了研究玉米植株中β-D-葡萄糖苷酶测定的最佳条件,建立快速准确的β-D-葡萄糖苷酶活性的检测方法。本试验以玉米品种泰玉11号为研究材料,研究了以对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)为底物,分光光度比色法测定玉米叶中β-D-葡萄糖苷酶活性的反应条件(包括缓冲液pH值、底物浓度、测定波长、反应温度和时间)。结果表明,当反应温度为40℃、反应时间为40 min、缓冲液pH值4.8、反应底物pNPG的浓度为10 mmol·L~(-1)、测定波长为402 nm时,β-D-葡萄糖苷酶的活力最大。     

乌龙岭龙眼果皮的PPO特性及活性抑制

为探明乌龙岭龙眼贮藏保鲜过程中的褐变问题,以C6H6O2为底物,采用分光光度法研究了底物浓度对龙眼果皮PPO活性的影响规律.采用正交试验方案,分析了不同抑制剂、pH值和温度对乌龙岭龙眼果皮PPO活性的影响.结果表明,龙眼果皮褐变反应的动力学符合米氏方程,米氏常数为0.054 mol.L-1,最大反应速度为1.428×102U.m in-1.适宜的抑制剂可有效延缓龙眼果皮的褐变,保持龙眼质量.在相同条件下,Na2S2O3抑制效果最好.此外,还对影响龙眼果皮PPO活性的因素进行了优化.     

热胁迫对葡萄叶片中蛋白激酶活性的影响

 以葡萄品种京秀（Vitis vinifera L. cv. Jingxiu）一年生扦插苗为试材，40℃高温处理30 min，并以25℃为对照，采用体外底物磷酸化方法对叶片中蛋白激酶的活性进行了测定。结果表明，热胁迫处理后，叶片中蛋白激酶在底物髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein，MBP)浓度为0.5 mg·ml-1时，其活性达到最大(7 678.7 cpm)，而后随底物浓度的进一步增加，其活性下降。Mg2+浓度为5 mmol·L-1时，蛋白激酶活性达到最大(8 165.8 cpm)。Ca2+对蛋白激酶活性的影响极弱，Mn2+对蛋白激酶活性的激活没有影响。ATP浓度为50 μmol·L-1时，蛋白激酶的活性最大（7 900.9 cpm），比对照高4.7倍。在以组蛋白-Ⅲ（histone-Ⅲ）为底物时，蛋白激酶的活性很微弱，且Mg2+和Ca2+对蛋白激酶有极弱的激活作用。     

凤尾菇(Pleurotus sajor-caju)漆酶Lac4基因在黑曲霉中表达研究

研究将凤尾菇漆酶基因Lac4(Gene Bank登录号AJ507327.1)cDNA克隆到表达载体pSZHG10-6-2上,通过农杆菌介导法导入黑曲霉CICC2462中,筛选得到糖化酶基因glaA位点发生同源重组的黑曲霉转化子。摇瓶发酵后取上清液作SDS-PAGE检测、酶活测定及酶学性质和酶稳定性分析,研究重组漆酶对染料脱色影响。结果表明,成功分泌表达重组漆酶r Lac4,其活性在第9天时达酶活最高峰1 211 U·L~(-1);酶学性质研究发现,其最适反应温度为60℃、pH为4.5,且在10~30℃及pH 5.0~6.0稳定性较好。最适反应条件下,重组漆酶对ABTS的Km为0.142 mmol·L~(-1),最大反应速率Vm为0.693 mmol·L~(-1)·min~(-1)·mg~(-1);通过重组漆酶研究4大类染料脱色能力,发现ABTS为介体时该漆酶对三苯基甲烷类孔雀绿脱色可达44%,杂环类中性红、偶氮类甲基橙脱色率分别13%和11%,而对蒽醌类活性亮蓝(RBBR)降解作用不明显,重组漆酶对孔雀绿的脱色效率具有较大应用价值潜力,对含三苯基甲烷染料废水处理应用前景良好。     

丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的研究

应用分光光度法研究丝瓜多酚氧化酶及过氧化物酶酶学特性的影响因素,为丝瓜酶促褐变的研究提供基础。以普通丝瓜果肉为材料,PPO以邻苯二酚为底物,POD以愈创木酚为底物,研究分析反应温度、反应时间、pH及测量波长、底物的浓度、PPO提取酶液添加量对丝瓜PPO、POD活性的影响。丝瓜褐变相关酶提取和测定方法的优化:(1)PPO最佳反应体系:测定波长408nm、反应温度是35℃、pH为6.0、酶液用量0.15mL,最适底物为邻苯二酚,底物浓度为0.056mol·L~(-1);(2)POD最佳反应体系:测定波长410nm,反应温度为40℃,最佳pH为5.5,酶液用量0.1mL,底物是愈创木酚,浓度为0.067mol·L~(-1)。     

犬干扰素-γ的稀释复性及活力测定

文章探讨了不同折叠促进剂、加样方式、温度、pH在稀释法复性条件下对重组犬IFN-γ体外折叠的复性影响。结果表明,0.5mol·L-1精氨酸、0.5mol·L-1盐酸胍、2.0mol·L-1尿素均能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,其中精氨酸的效果最好。在4℃、pH8.0、精氨酸浓度0.5mol·L-1,蛋白浓度0.15mg·mL-1及脉冲加样操作方式下,复性后重组犬IFN-γ的活性为1.35×104U·mL-1,比活为3.74×106U·mg-1。     

亚麻SSR-PCR优化体系的建立

通过研究SSR-PCR反应体系的主要成分对扩增结果的影响,建立了亚麻SSR反应的优化体系,即总体积20μL,Mg2+1.9mmol.L-1,dNTPs 0.55mmol.L-1,Taq DNA聚合酶1.5U,25ng.μL-1引物75ng,DNA模板(50ng.μL-1)100ng.利用10个亚麻材料对优化后的SSR体系进行验证,1.5%琼脂糖检测结果显示,优化后的SSR体系稳定性,重复性好,扩增效果良好.     

木瓜蛋白酶水解鸡骨泥制备短肽工艺优化

为了探究酶解鸡骨泥制备抗氧化肽的最佳工艺,研究了以木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥时各因素对短肽得率的影响,以及制备的抗氧化肽对羟自由基、超氧阴离子自由基和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基的清除能力。试验探究了酶解过程中不同底物质量分数、加酶量、反应温度和反应时间对短肽得率的影响。采用响应曲面优化得到了以短肽得率为目标的木瓜蛋白酶酶解鸡骨泥的最优工艺,反应条件为:底物质量分数11.44%,加酶量211.11 mg·g~(-1),反应温度57℃,反应时间3 h,在该条件下酶解液短肽得率预期为59.20%,实测为58.87%±0.51%。采用优化工艺制备的抗氧化肽,在达到32 g·L~(-1)时与维生素C清除羟自由基、超氧阴离子自由基和DPPH自由基的能力相近,说明鸡骨泥肽具有一定的抗氧化活性。     

鸡肉钙激活酶与其它畜禽肉中钙激活酶 对钙离子浓度敏感性的比较

 【目的】研究鸡肉中钙激活酶的种类和性质,并与其它畜禽肉以及鱼肉中钙激活酶对钙离子浓度敏感性进行比较。【方法】提取宰后0 d鸡胸肉中的钙激活酶,通过硫酸铵沉淀和透析的方法对鸡肉钙激活酶进行纯化,采用活性电泳的方法检测钙激活酶种类和活性。通过设置0、0.01、0.03、0.05、0.10、0.50和5.00 mmol·L-1的钙离子浓度,比较鸡肉、鱼肉、鸭肉、兔肉、猪肉、牛肉在宰后0 d肉样中不同种类的钙激活酶对钙离子的敏感性。【结果】禽肉鸡肉、鸭肉中μ-钙激活酶的电泳迁移率小于哺乳类兔肉、猪肉、牛肉,当Ca2+浓度从0.01 mmol·L-1升到0.03 mmol·L-1时,兔肉、猪肉和牛肉μ-钙激活酶活性增加,但鸡肉和鸭肉钙激活酶活性没有改变（P>0.05）,说明禽类μ-钙激活酶对钙离子的敏感程度高于哺乳类;在禽类鸡肉、鸭肉中存在另外一种钙激活酶,其对钙离子的敏感性介于哺乳动物中的m-钙激活酶和μ-钙激活酶之间,并且它在禽肉中的活性分别占67.4%和88.4%。【结论】鸡肉中的钙激活酶对钙离子浓度敏感性高于哺乳类。     

黄瓜果实脂氧合酶活性测定方法的建立

采用紫外分光光度法,以亚油酸钠为反应底物,研究了黄瓜果实脂氧合酶(LOX)的酶活性测定方法。结果表明,黄瓜果实脂氧合酶最适pH为7.0,最适温度为40℃,最适底物浓度为3.3×10-4mol.L-1。该酶有着很好的热稳定性,90℃保温1h后仍具有很高的活性,70℃保温1h可能对该酶的活性有激活作用。     

人工湿地处理生活污水用于观赏鱼养殖的研究

为在水产养殖中安全利用生活污水,试验通过研究污水池中生活污水引入人工湿地净化处理前后水质变化情况得知:出水氨氮含量从4.50 mg.L-1,降至0.48 mg.L-1,氨氮平均去除率约89.3%;pH从8.83,降至8.16;溶氧从6.42 mg.L-1降为3.33 mg.L-1,亚硝酸盐含量有所上升,但是进行养殖后反而下降;水色、气味等感官性状明显改善。进行观赏鱼养殖安全试验和繁殖试验也表明经人工湿地处理后的生活污水,适当调控后能安全地用于养殖观赏鱼,具有节水减排、美化环境的环保效果,可提高养殖经济效益。