荧光抗体技术在猪瘟净化中的应用

荧光抗体技术(FAT)是一种灵敏而又特异的诊断方法,被世界各国作为猪瘟的法定诊断方法。采用FAT对猪瘟病毒进行控制和净化,其方法简单、快速、技术可靠,检测成本相对较低。2005~2007年笔者采用FAT对规模化猪场猪瘟进行2~3次净化,可以稳定地控制猪瘟,使猪瘟的阳性率下降至3%左右,大大降低了各阶段猪群的死亡率,并明显提高了母猪的繁殖性能,取得了良好的经济效益。     

CSFV的RT-PCR检测在控制与净化猪瘟中的应用

应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测健康猪扁桃体猪瘟病毒以监控与净化猪瘟.2006年用RT-PCR对广西某存栏250头种猪场的母猪扁桃体连续进行3次猪瘟病毒检测,检出并清除带毒猪,猪群中猪瘟病毒的带毒猪明显下降.结果表明,RT-PCR检测猪扁桃体可应用于猪场猪瘟的控制与净化.     

规模化猪场猪瘟的控制与净化技术初探

目前猪瘟在广西规模化猪场流行严重,必须采取控制净化的措施,减少猪瘟带来的巨大损失。采用HCFA检测猪瘟病毒,猪场实施严格科学的净化方案,经过3次净化,淘汰带毒猪,猪瘟阳性率下降到3.52%的水平,生产成绩得到明显的改善,达到净化猪瘟的目标。     

直接荧光抗体技术在规模猪场检测净化猪瘟中的应用

猪瘟目前在生产实践中多以所谓非典型、温和性或亚急性的症状出现．以及猪瘟病毒的持续感染、胎盘垂直感染、初生仔猪耐受和妊娠母猪带毒综合症等。对规模化猪场除实行兽医生物安全措施,减少和切断病原微生物侵入猪群外,还应采取有效的方法快速查出病原体并淘汰“带毒猪”．控制净化规模猪场猪瘟病毒,彻底清除带毒种猪对控制猪瘟持续感染尤为关键。     

某规模化猪场猪瘟和伪狂犬病净化的实施及成效分析

针对当前规模化猪场猪瘟病毒及伪狂犬病病毒感染的严峻状况,选取山东省某规模化猪场核心种猪群开展猪瘟及伪狂犬病的净化工作。结合血清学、分子生物学诊断方法,在系统研究了该场两种疫病的流行病学、带毒状况及疫苗免疫状态的基础上,对种猪群进行为期约一年的猪瘟及伪狂犬病净化工作,在良好的卫生防疫措施的基础上,精选疫苗、制定合理的免疫程序,淘汰带毒猪及抗体阴性猪。结果显示:经过两次净化,种猪群的猪瘟病毒带毒率下降到3.03%,伪狂犬病病毒带毒率下降到3.23%,生产成绩得到明显改善,达到了净化之目的。     

应用RT-PCR技术净化携带猪瘟病毒猪的效果

应用反转录-聚合酶链反应RT-PCR检测猪扁桃体猪瘟病毒,以清除健康猪的猪瘟隐性带毒,对规模猪场的猪瘟危害进行控制。2007年,用RT-PCR对广西某存栏350头种猪场全群活体采集扁桃体连续进行2次猪瘟病毒检测,检出并清除带毒猪,使猪群中猪瘟病毒的带毒猪比例明显下降。结果表明,RT-PCR检测猪扁桃体可应用于猪场猪瘟的控制与净化。     

猪瘟病毒感染仔猪接种猪瘟疫苗后抗原的跟踪检测

为了解猪瘟病毒感染仔猪免疫猪瘟疫苗后带毒情况,并比较实验室几种猪瘟抗原检测方法的适用性,采用(CSFV)RT-nPCR、猪瘟兔化弱毒疫苗荧光定量RT-PCR(HCLV-FQ-PCR)和CSFV实时荧光定量RT-PCR(CSFV-FQ-PCR)3种检测方法对田间感染CSFV仔猪疫苗免疫前后带毒情况进行定期跟踪检测.结果显示:本实验室建立的CSFV-FQ-PCR灵敏度高于CSFV-RT-nPCR;猪瘟疫苗免疫48 d后,采用HCLV-FQ-PCR方法检测不到血液中的HCLV;猪瘟病毒感染猪免疫疫苗后仍存在持续带毒现象,因此对猪瘟病毒感染猪必须彻底淘汰.     

规模猪场春秋防后猪瘟病毒及抗体监测与分析

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性、烈性传染病，临床上以发病急、高热稽留、小血管壁变性、全身泛发性小点状出血及脾梗死等为主要特征。猪是猪瘟病毒的唯一宿主，传染源主要来自病猪，而病后带毒猪、潜伏期带毒猪和隐性感染猪均可成为传染源。近年来，国内仍有暴发猪瘟的报道，应引起重视。笔者将贵州省某猪场猪瘟春秋两防跟踪抽样检测抗体水平情况报告如下。     

规模猪场种猪扁桃体中猪瘟病毒的检测与猪瘟抗体监测方法的分析

猪瘟仍然是当前我国规模猪场需要重点防控的传染病,其发病呈现种群持续感染和非典型猪瘟的特点,因此,净化种群是控制猪瘟的根本性措施.通过对国内部分规模猪场种猪扁桃体活体采样进行免疫荧光检测,结果表明,种猪猪瘟病毒(CSFV)带毒率为8.9%(313/3516),总体阳性率为6.43%(351/5459),经过净化后,所有猪场种群CSFV带毒率显著降低.通过对临床血清学样品的对比分析,发现检测猪瘟抗体的阻断ELISA方法和间接血凝试验方法在判断结果上有一致性,但是检测抗体的滴度并无相关性.规模猪场需要对猪瘟采取综合防治措施来达到净化猪瘟的目标.     

曲靖市规模化猪场繁殖障碍性主要病毒病监测及控制

本次试验采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和乳胶凝集试验(LAT)检测了曲靖市8个规模化猪场采集的1077份血清6种猪主要繁殖障碍性病毒病抗体。检测结果显示:猪瘟病毒(HCV)、猪伪狂犬病病毒-gE基因(ADV-gE)、猪细小病毒(PPV)、猪日本乙型脑炎(JEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪圆环病毒II型(PCV-2)血清抗体阳性检出率分别为"0"、22.28%、32.93%、52.99%、29.96%和21.88%。结果表明:检测的8个规模化猪场未感染猪瘟野毒,猪伪狂犬病、猪细小病毒、猪日本乙型脑炎、猪圆环病毒、猪繁殖与呼吸综合征等疫病不同程度地存在野毒感染。     

猪瘟石门系强毒株SYBR Green-I染料法实时荧光定量PCR方法的建立

为了能快速、准确地诊断猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)石门系强毒,根据登录在GenBank上23株Shimen毒株的全基因组序列,利用DNASIS软件进行序列分析,设计1对特异的荧光定量引物.建立猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法.试验结果表明,本方法最低可检测到的Shimen病毒cDNA含量为100拷贝/μL,敏感度至少是普通PCR的100倍;猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、牛流行腹泻病毒Ⅰ工型( BVDV-1)和猪瘟病毒C株均无特异性扩增,证明本方法具有很强的特异性;通过批内和批间重复试验,其变异系数<0.7%,结果显示本方法具有很好的重复性.本研究建立了猪瘟石门系强毒株SYBR Green-Ⅰ染料法实时荧光定量PCR快速检测方法,为猪瘟的预防与控制提供了有效的技术手段,并为猪瘟强毒试剂盒的研发奠定了基础.     

猪瘟病毒实时荧光定量RT-PCR

根据GenBank公布的猪瘟病毒基因组5'非编码区基因序列进行同源性比较分析,选择保守序列区作为扩增区域,设计1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了一个用于猪瘟病毒快速定量检测的SY13R GreenⅠ荧光定量RT-PC R方法.试验结果表明该方法重复性好,反应批内循环阈值差异不显著.与猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒和猪圆环病毒2型等猪源病毒无交叉反应,具有高度的特异性,而且灵敏度高,最小检出量为2×10(2)病毒基因组拷贝数.利用此方法对15例临床样本进行检测,其结果与兔体交又免疫试验一致,表明此方法可作为猪瘟实验室快速诊断和疫情监测的一种快速、准确、简便的检测工具.     

牛病毒性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为了建立一种快速、特异、灵敏的检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Taq Man实时荧光定量RT-PCR的方法,根据NCBI GenBank上已公布的BVDV、猪瘟病毒(CSFV)核酸序列进行比对,利用Oligo 6.71软件设计一对引物及一条探针,建立了检测BVDV的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法。通过对该方法的特异性、重复性及其敏感性进行相关试验,结果表明该方法检测出BVDV标准毒株Oregon C_(24)V为阳性,猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和CSFV的检测均为阴性。对BVDV标准毒株最低检测量达到10~(-2.5) TCID_(50)。该方法检测同一样品重复进行8次检测,结果均一致,表明方法的重复性较好。应用该方法对6批猪瘟疫苗专用血清进行BVDV检测,阳性率为16.7%;猪瘟弱毒苗中未检出BVDV。建立的BVDV Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法为生产无BVDV污染的猪瘟苗提供了有力的保障。     

猪瘟的确诊与净化重在抗原

据《中国畜牧报》2002年11月10日刊载中国兽医药品监察所丘惠深研究员的文章如下: 笔者根据多年对猪瘟的实验室研究及田间调查,于今年1月20日在《中国畜牧报》上发表了“斩断猪瘟重在种猪”的观点,即带毒种猪是造成养猪场猪瘟持续感染的主要原因。带毒母猪可引起垂直传播和水平传播,公猪带毒会以精液传播,特别是那些人工授精的猪场危害更大。要控制和消灭猪瘟就要实行以净化种公、母猪及后备种猪为主的一     

猪瘟病毒抗体检测方法的研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种猪的高度传染性和致死性病毒病,具有传染性强、流行广泛、发病率和死亡率高等特点,对养猪业危害极大.目前,疫苗免疫仍然是防控猪瘟的重要手段,而抗体检测是免疫效果的主要评价依据.现将猪瘟病毒抗体的主要检测方法:病毒中和试验、正向间接血凝试验、酶联免疫吸附试验、胶体金免疫层析法等进行综述,以期为猪瘟疫...     

2010年安徽省繁昌县猪瘟抗体水平监测报告

猪瘟又称猪霍乱,是由黄病毒科猪瘟病毒属的猪瘟病毒引起的一种急性、发热、接触性传染病,具有高度传染性和致死性.控制该病最有效的方式之一是建立合理的免疫程序,免疫效果直接影响该病的发生和发展,因此,对免疫猪进行抗体水平监测,有利于监控该病疫情.该次调查中,采用正向间接血凝方法对来源于安徽省繁昌县13个猪场的猪瘟抗体水平进行了检测.检测结果表明,该市猪群经免疫后,抗体水平较高,免疫情况较好,其免疫合格率达78.49%.     

猪瘟分子生物学检测技术的研究进展

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病,给养猪业造成了严重的经济损失,严重制约着我国养猪产业的发展。文章主要针对猪瘟病毒的反转录-聚合酶链式反应技术、反转录巢式PCR技术、多重反转录-聚合酶链式反应技术、反转录实时荧光定量PCR技术及环介导等温核酸扩增技术等5种分子生物学检测技术的国内外最新研究进展进行综述,以期提高对猪瘟病毒早期感染和隐性带毒猪的检出率,淘汰野毒感染猪群,为猪瘟的净化和防控提供重要诊断参考依据。     

SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布

为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。     

猪瘟病毒和牛病毒性腹泻病毒双重荧光RT-PCR检测方法的建立

为同时检测猪源临床样本中的猪瘟病毒(CSFV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV),基于这两种病毒的5'UTR序列设计特异引物和TaqMan探针,建立了一种检测CSFV和BVDV的双重荧光RT-PCR检测方法,并对该方法的特异性、最低检出限和重复性等进行了评价。结果显示,该方法只对CSFV和BVDV呈现特异性扩增,对猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型不发生交叉反应,对阳性标准对照CSFV-5'UTR-RNA、BVDV-1-5'UTR-RNA和BVDV-2-5'UTR-RNA,最低可分别检出27、36和32拷贝/μL。该方法的组内和组间试验Ct值变异系数介于0.11%～1.20%,具有良好的重现性。对152份猪组织样本用该方法进行CSFV和BVDV核酸检测,结果检出CSFV阳性样本16份,BVDV阳性样本3份,CSFV和BVDV双阳性样本1份,与国标和OIE《陆生动物诊断试验和疫苗》相应的荧光RT-PCR方法阳性符合率为100%。结果表明,本研究建立的双重荧光RT-PCR方法可用于临床样本中的CSFV和BVDV检测,从而为猪瘟防制和净化提供了一种有效的技术手段。     

吉安市种猪场猪瘟、伪狂犬病净化试验分析

<正>猪瘟和猪伪狂犬病是猪的两大重要的病毒性传染病,对养猪业所造成的危害很大,各养猪国均十分重视猪瘟和猪伪狂犬病的预防和控制。通过采取免疫措施,两病得到了有效控制,但仍然存在种猪带毒、免疫麻痹、隐性感染等问题。为有效控制两病,促进吉安市养猪业的健康发展,2011年以来,我们在配合省里开展种猪场猪瘟和伪狂犬病(以下简称两病)净化工作的同时,对全市试验原种猪场、一、二级种猪场开展了种猪群两病的控制和净化分