猪细小病毒的分子特征、流行现状、诊断与疫苗

<正>猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)属于细小病毒科细小病毒属,除了引起母猪的繁殖障碍性疾病外,PPV也与猪渗出性皮炎和断奶仔猪多系统衰弱综合征(Post-weaning multistemic wasting syndrome,PMWS)有关。该病毒最早由Mary和Mahncl于1966年发现,     

猪蓝耳病疫苗现状及其免疫效果评价方法

正1猪蓝耳病介绍猪蓝耳病(又称猪繁殖与呼吸综合征)是危害我国养猪业的主要疫病之一,曾经给我国养猪业带来巨大损失,近年来该病的死亡率有所降低,但危害并未随之下降。目前感染猪蓝耳病的猪只主要表现为母猪产后炎症、少乳、高返情率等症状,被感染仔猪通常具有母源抗体保护,发病死亡率较低,生长猪主要表现为育肥期呼吸道症状严重[1]。此外,猪蓝耳病的免疫抑制危害不容忽视,主要表现为影响猪瘟、猪伪狂犬等疫苗的免疫效果,     

消毒的种类及其应用

消毒,是指杀灭物体中的病原微生物的方法.消毒只要求达到消除传染性的目的,而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死.消毒是贯彻"预防为主"方针的一项重要措施.消毒的目的就是消灭传染源,切断病原体的传播途径,达到预防疾病的继续蔓延.     

牛病毒性腹泻病毒间接免疫荧光检测方法的建立及应用

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)间接免疫荧光法(IFA)。通过以山羊抗牛BVDV多克隆血清为一抗,荧光素FITC标记的兔抗羊Ig G为二抗。将BVDV接种于MDBK细胞后,对方法的反应条件进行优化。结果表明IFA最优条件:80%丙酮4℃固定30 min;一抗与二抗均为1∶200稀释37℃孵育1 h。同时,该方法的特异性、灵敏性及重复性均较好,可用于猪瘟活疫苗中污染BVDV的检测。     

免疫层析快速诊断试纸条的制备及在养猪业上的应用

胶体金免疫层析技术是一种微量、特异、简便和结果容易判定的新的检测方法,非常适用于基层兽医和猪场。本文综述了免疫层析快速诊断试纸条的基本原理、制备方法、标记技术以及目前在养猪业上的应用情况。     

猪流行性腹泻病毒分离鉴定及其灭活疫苗免疫保护效果研究

为筛选能用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)疫苗研发的流行毒株,收集PEDV阳性病料,以Vero细胞进行病毒分离试验,并对分离毒株进行外源病毒检测、病毒培养特性研究、仔猪毒力试验及免疫效力试验等。9份PEDV阳性病料共分离到3株病毒,分别命名为PEDV-SC12、PEDV-JS12、PEDV-JX12。其中PEDV-SC12株存在支原体污染;PEDV-JS12株与PEDV-JX12株均能被PEDV特异性阳性血清中和;PEDV-JS12株能在Vero细胞上增殖并产生细胞病变,但适应细胞45代以后病毒培养效价仍然偏低;PEDV-JX12滴度能维持在106.0 TCID50/mL以上。PEDV-JX12株毒力试验显示,该分离株能够通过人工感染复制出腹泻病例,并能从发病动物体内检测到感染的病毒。免疫攻毒保护试验显示,以PEDV-JX12株制备的灭活疫苗免疫母猪,对所产仔猪攻毒后免疫组6.25%(1/16)发病,对照组100%(8/8)发病。说明PEDV-JX12株能够适应细胞培养,免疫接种母猪能给仔猪提供有效保护,可以用于PEDV流行毒株的疫苗研发。     

猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测方法建立

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原体。为建立一种灵敏度更高且特异性更强的分子检测技术,研究建立一种猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测技术。首先利用梯度PCR方法验证内外引物的最佳退火温度;再利用正交试验设计的方法对单管巢式PCR反应体系的内外引物浓度、Ex Taq酶用量等相关因素进行优化。结果表明,当外引物PCV2-P1/P3退火温度为64.4℃,内引物PCV2-1/2退火温度为54.4℃,通过正交试验最终筛选出的最佳反应体系(25μL)为:2×Taq PCR Mastermix 10μL,100μmol/L的内引物PCV2-1/2各1μL,10μmol/L的外引物PCV2-P1/P3各0.2μL,模板DNA 2.5μL,ddH₂O 10.1μL。上述反应体系仅对猪圆环病毒2型扩增出特异性目的条带,具有高度特异性,最低检测下限针对猪圆环病毒2型DBN-SX07株目的基因的最低DNA模板量为0.6×10^-6 ng、ZJ/c株目的基因的最低DNA模板量为0.6×10^-3 ng。研究建立的猪圆环病毒2型单管巢式PCR检测方法可以有效针对猪圆环病毒2型特异性检测。     

鸡新城疫(基因Ⅶ型)、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(aSG10株+G株)在蛋鸡上的安全性及免疫效果研究

为了研究成都天邦生物制品有限公司生产的鸡新城疫(基因Ⅶ型)、禽流感(H9亚型)二联灭活疫苗(aSG10株+G株)对蛋鸡的安全性和免疫效果,在北京市华都峪口禽业有限责任公司京红1号蛋鸡养殖场进行相关试验。结果显示:疫苗经不同免疫途径(皮下注射和肌肉注射)、不同免疫剂量(单剂量和超剂量)接种115日龄蛋鸡后,未见任何不良反应,注射部位疫苗吸收良好,产蛋率与空白对照组无明显差异。试验鸡免疫后14d,新城疫HI抗体平均滴度为10.9log2,H9亚型禽流感HI抗体平均滴度为9.1log2,免疫后6个月新城疫HI抗体水平不低于6.9log2,H9亚型禽流感HI抗体水平不低于7.4log2。分别于免疫后21d和6个月对免疫鸡进行攻毒,新城疫攻毒保护率为100%,禽流感攻毒保护率为95%。表明该二联苗对蛋鸡安全、有效,且免疫持续期长,可用于蛋鸡的免疫。     

一例猪脑膜炎的诊断

猪脑膜炎主要由猪伪狂犬病病毒、乙型脑炎病毒、猪链球菌、李氏杆菌、副猪嗜血杆菌等引起,其中以猪伪狂犬病病毒、乙型脑炎病毒最为常见。乙型脑炎主要发生于蚊虫较多的夏季。猪伪狂犬病无明显季节性,近年来我国猪群的伪狂犬病野毒感染率较高,引发仔猪神经症状的病例较多。副猪嗜血杆菌与猪链球菌的部分血清型可引起脑膜炎,副猪嗜血杆菌引发仔猪脑膜炎以血清5型为主,猪链球菌致使脑膜炎的以C群链球菌为主[1-4]。2014年2月,四川某猪场发生仔猪脑膜炎病例,病理剖检初步诊断为细菌性猪脑膜炎,通过病原菌分离鉴定与相关病毒排查,确诊为猪链球菌感染,现报道如下。     

同时检测CSFV、PRRSV的二重RT-PCR方法的建立及其在临床样品检测中的初步应用

建立了1种一步法RT-PCR用于同时检测典型猪瘟病毒(CSFV)和猪繁殖呼吸道综合征病毒(PRRSV)的多重PCR诊断方法(Multiplex PCR,mPCR)。根据Genbank上公布的CSFV、PRRSV基因组全序列及部分序列,借助DNAStar和Oligo6.0基因序列和引物设计软件,设计2对特异性引物分别用于扩增CFSV、PRRSV病毒777bp和434bp的目的片断。该mPCR由RT反应和PCR反应构成。将病毒核酸连接到PMD18-T载体,提取质粒后,以10倍进行倍比稀释,取每个稀释度的病毒核酸进行mPCR反应,对CSFV、PRRSV的最低检测量分别为8.5pg、8.3×10-2pg。以PCV2、PCV1、PPV、PRV、SIV、E.coil和双蒸水为模板进行mPCR反应,扩增结果均为阴性,表明该mPCR具有较好的特异性。对临床样品的检测表明,本研究建立的mPCR诊断方法能够对CSFV和PRRSV进行快速的诊断,同时对CSFV、PRRSV在猪群中的流行病学调查也具有十分重要的意义。