2株PEDV贵州分离株M基因的克隆及相似性分析

为了解贵州省猪流行性腹泻病毒(PEDV)分离株M基因的变异及分子进化情况,试验采用RT-PCR扩增、目的基因克隆与测序及生物信息学软件对贵州省分离的PEDV-GZAS株和PEDVGZHZ株M基因进行序列分析。结果表明:经RT-PCR扩增,得到的片段大小为695 bp;测序结果证实,贵州分离株M基因核苷酸序列大小为695 bp;贵州分离株PEDV-GZAS株与PEDV-GZHZ株之间同源性为84.2%;PEDV-GZHZ株与瑞士疫苗株(AF353511)之间的同源性为97.7%,与中国贵州(KF150217)、泰国(FJ158546)和美国(KF272920)分离株同源性最高为99.4%;贵州分离株PEDVGZAS株与瑞士疫苗株(AF353511)之间的同源性为97.5%,与中国贵州(KF150217)、泰国(FJ158546)和美国(KF272920)分离株同源性最高为99.3%;此次分离的2株分离株都与中国河南(EU287429)分离株同源性最低为83.1%。PEDV贵州分离株PEDV-GZAS株M基因与泰国(FJ158546)分离株遗传进化关系最近,与中国河北(JF508465)分离株亲缘关系较近;PEDV-GZHZ株与PEDV-GZAS株及参考毒株之间遗传进化关系较远。     

贵州某野生动物园长臂猿流感病毒、支原体及巴氏杆菌混合感染的诊治

为弄清贵州某野生动物园长臂猿死亡的原因,本试验采用流行病学调查、临床症状观察、病理剖检诊断和RT-PCR检测确诊等方法,对该野生动物园发病长臂猿进行了诊断。试验结果显示,流行病学调查、剖检病理初步诊断该野生动物园长臂猿疑似流感病毒、支原体和细菌混合感染,RT-PCR/PCR检测确诊发病长臂猿为流感病毒、支原体混合感染,细菌分离培养、生化特性鉴定和动物致病性试验确诊为多杀性巴氏杆菌感染。结果表明造成该野生动物园长臂猿发病死亡的原因为流感病毒、支原体和多杀性巴氏杆菌混合感染。根据诊断及药敏试验结果,制定出了免疫预防及治疗措施。     

冬春两季应加强猪流行性腹泻的综合防控

冬春两季常是"冬痢"的高发季节,近2年来该病呈现出仅以猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染为主,而非之前的传染性胃肠炎病毒(TGEV)或TGEV和PEDV共感染为主,临床上主要表现为严重腹泻、脱水和急剧消瘦死亡为主要特征,现已给中国、美国、日本等国家的养猪业造成了巨大的损失,欧盟目前也已责令严防PEDV的传入。尽管该病在我国主要于2012前后呈现暴发流行,现多为散发,但入冬后仍需引起重视,采取积极措施予以综合防控。     

PRV、PCV2与PPV三重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立可同时检测猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)与猪细小病毒(PPV)的三重PCR方法,根据Gen Bank登录的病毒相关基因序列,选择保守区域设计引物,经过反应条件的优化,建立了可同时检测以上3种病毒的PCR诊断方法,扩增的目的片段长度分别为192 bp(PRV)、255 bp(PCV2)和759 bp(PPV)。对PRV、PCV2和PPV的核酸检测最低浓度分别为:2.5×10-2,2.2×10-3和3.7×10-2ng,证明该方法具有良好的特异性和较高的敏感性。应用该方法对56份临床样品进行检测发现,PRV、PCV2和PPV的阳性率分别为16.1%、50.0%和19.6%,二重感染率为12.5%,三重感染阳性率为3.6%。该方法的成功建立为快速高效地检测以上3种病毒提供了有效手段。     

贵州PRV GZDZ2016株gE基因的克隆及变异特征分析

为了了解贵州分离株PRV GZDZ2016株gE基因的遗传变异情况,试验采用克隆与测序方法对PRV GZDZ2016株进行了研究,并利用生物信息学软件分析gE蛋白的抗原性和疏水性。结果表明:PRV GZDZ2016株与GenBank上PRV变异毒株的核苷酸和氨基酸同源性分别为99.7%～99.9%和99.1%～99.8%;gE蛋白抗原表位与疏水性分析表明,由于gE基因48位和496位各有一个天冬氨酸(D)的插入,同时236位由亮氨酸(L)变为脯氨酸(P),导致相应的抗原表位和疏水性区域发生了相应改变。     

8℃相变蓄冷技术

指出了自“十二五”规划以来,可持续发展和能源结构转型成为我国政府工作的重中之重,合理利用能源为人类社会创造更加美好的现代生活已经成为社会的共识。蓄冷技术能够按需实现能量的存储和释放,从宏观上起到“移峰填谷”平衡电网的作用;我国电力系统实行分时计价政策,从微观上可以利用峰谷电价差为用户节省制冷系统的运行费用。8℃相变蓄冷技术兼备了传统水蓄冷和冰蓄冷的优点,具有蓄冷密度大、系统简单的突出优点,是当前蓄冷技术研究和应用的前沿方向,市场前景十分广阔。     

牛病毒性腹泻病毒E0-E2基因融合腺病毒的构建及小鼠免疫效果评价

【目的】 研究牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）E0和E2串联基因重组腺病毒作为基因工程疫苗的应用潜力。【方法】 采用PCR扩增、E0-E2基因融合并构建重组穿梭质粒pDC316-E0-E2,将其与AdMax腺病毒系统的骨架质粒共转染HEK293T细胞包装成重组腺病毒,通过Western blotting进行验证,并通过Reed-Muench法测定病毒滴度,通过肌内、皮下免疫接种小鼠后用ELISA方法及流式细胞检测进行免疫效果试验。【结果】 成功扩增到E0、E2基因目的片段,大小分别为681和1 122 bp,得到了完整的腺病毒Ad5-E0-E2;测定其滴度为1.1×10¹⁰ PFU/mL;Western blotting检测结果显示,Ad5-E0-E2外源基因在HEK293T细胞中表达,得到了与预期相符的目的条带（65 ku）;ELISA检测结果表明,通过肌内和皮下注射Ad5-E0-E2均能产生较高的抗体水平;流式细胞检测显示首免、二免后肌内和皮下注射Ad5-E0-E2组CD4^＋、CD4^＋/CD8^＋比值均极显著高于PBS对照组（P<0.01）。【结论】 本试验成功构建重组腺病毒Ad5-E0-E2,且具有较好的反应原性和免疫原性,能诱导机体产生针对BVDV的特异性抗体。     

多重PCR反应的影响因素及其优化

多重PCR是近年来兴起的一项技术,它高效、快捷、高度特异、敏感,已经成为诸多实验室的常规诊断技术.由于多重PCR实验设计比单一PCR更为复杂,使得不同研究获得的优化程序不具有通用性,因而大大降低了多重PCR的适用性,限制了多重PCR的运用范围.文章就多重PCR的影响因素及其优化条件进行了综述,以期为研究和应用多重PCR...     

不同饲粮类型添加非淀粉多糖酶对断奶仔猪生产性能的影响

近年来,酶制剂在家禽饲料中的应用已非常普遍,但在猪饲料中的应用效果尚存在争议,这与许多因素有关,包括饲粮类型和猪的日龄。有关非淀粉多糖酶在猪麦类–豆粕型饲粮中应用的文献较多,效果较稳定;而非淀粉多糖酶在玉米–豆粕型断奶仔猪饲     

牛羊赤羽病

赤羽病是由吸血昆虫进行传播的一种虫媒性病毒病 ,常导致牛羊繁殖障碍及新生胎儿发生关节弯曲和积水性无脑症 ,因而对牛羊危害较大。该病毒于 1 959年在日本群马县赤羽村首次被分离到。我国 1 998年首次分离并鉴定了该病毒 ,目前已证实我国至少有 1 3个省市地区有本病的流行。本文从病原、流行病学、致病机理、诊断与防治等方面对该病进行了综述 ,以期为该病的防制和研究提供可参考资料。