不同浓度海藻肥对白三叶生长的影响

为白三叶的种植和草坪草栽培管理提供依据,采用单因素试验研究不同浓度(0 mL/L、1.25mL/L、2.5mL/L、5mL/L和7.5mL/L)海藻肥对白三叶(Trifolium repens)出苗率及生长的影响。结果表明:不同浓度海藻肥处理白三叶种子均提前发芽,但并未提高其发芽率;白三叶的株高、分枝数、叶长、茎长、地上生物量及总生物量均随海藻肥浓度增加呈先增后减趋势,而根冠比则相反;白三叶生长的最适海藻肥浓度为5mL/L,其地上生物量和总生物量最大,分别为1.71g/m2和1.21g/m2。     

鲤春病毒血症病毒糖蛋白基因在毕赤酵母中的分泌表达

根据Gen Bank中鲤春病毒血症病毒(SVCV)糖蛋白全基因序列设计特异性引物,以SVCV欧洲株病毒核酸为模板,通过RT-PCR方法获得欧洲株SVCV-G基因,克隆至p PICZαA,构建p PICZαASVCV1540表达质粒。以限制性内切酶Sac I线性化p PICZαASVCV1540后通过化学法转化毕赤酵母感受态细胞X33和GS115,添加1%甲醇进行诱导表达,SDS-PAGE电泳分析表达产物显示其分子质量为70 ku。Western Blot分析显示该蛋白可以被SVCV山羊多抗识别,表明目的蛋白具有反应原性。     

甲型H1N1流感病毒核酸检测能力验证样品制备及其应用效果评价

为考核实验室检测甲型H1N1流感病毒的能力,设计和实施了“CNAS T0459甲型H1N1流感病毒核酸检测能力验证计划”.利用甲型H1N1流感病毒(2009)和经典H1N1猪流感病毒核酸标准物质制备6组能力验证阳性样品,经实验室检测分析,所制备的样品均匀性和稳定性均达到中国合格评定国家认可委员会对能力验证样品的要求.将6组阳性样品和1组阴性样品编号后下发54家参试实验室,共有50家实验室报送了有效数据,其中完全达到能力验证要求的实验室共34家,满意率达68％,其余16家为不满意实验室,包括8家实验室检测经典H1N1猪流感病毒满意,但甲型H1N1流感病毒(2009)特异性检测不满意.本次能力验证为整体提升我国甲型H1N1流感病毒的检测水平和评估各级实验室检测能力具有重要意义.     

进口种猪的检疫

2009年4月19日凌晨,陕西省某养殖公司从美国进口的1000头种猪直达西安空港,在陕西出入境检验检疫局严格监管下,运抵隔离场,依据《中华人民共和国从美利坚合众国输入猪的检疫卫生条件》要求,实施了45天的隔离检疫,在此期间,完成了A型H1N1猪流感、猪密螺旋体痢疾、猪布氏杆菌病、猪伪狂犬病、猪传染性胃肠炎、结核病、猪传染性胸膜肺炎、猪蓝耳病等疫病实验室检疫,检出：猪伪狂犬病抗体阳性猪2头、猪传染性胃肠炎抗体阳性猪9头、猪传染性胸膜肺炎抗体阳性猪11头、猪蓝耳病抗体阳性猪13头,按有关法律规定,对阳性猪进行扑杀无害处理,疫病检出率5％,合格率达到95％,检疫合格种猪已安全放行。     

非洲马瘟病毒VP7基因拼接、表达及重组ELISA方法的建立与初步应用

采用人工拼接的方式拼接了非洲马瘟病毒（AHSV）含有绝大多数线性抗原表位的VP7编码基因片段,克隆于pET-30a构建重组质粒pET-30a-VP7,将pET-30a—VP7转化BL21（DE3）,经1．0mmol／LIPTG诱导,外源基因以包涵体的形式获得高效表达。通过Dot-EuSA以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性。以纯化后表达产物作为诊断抗原包被酶标板建立了检测AHSV抗体的间接ELISA方法。结果表明,抗原的最佳包被浓度为0．25μg／mL,血清的最佳稀释度为1：40,待检血清阳性临界值初步定为0．25。用此方法和商品化ELISA试剂盒检测了184份血清样品,结果完全符合。     

牛肠道病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立快速、准确地检测牛肠道病毒(BEV)及对北京周边地区牛群中BEV感染情况进行检测,本研究通过设计合成扩增BEV 5＇UTR序列的引物及探针建立了检测BEV的通用型TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测方法并对反应条件进行了优化.该方法对BEV的最小检测量为0.1 TCID50/0.1mL,敏感性比病毒分离法高10倍.而且该方法对其他牛相关病毒均无交叉反应.用3批试剂对3个稀释度的BEV培养物进行批内和批间重复性试验,其变异系数均小于1.1％,表明该方法具有良好的重复性.采用该方法对北京周边地区牛群采集的852份临床样品进行检测,并与病毒分离方法比较,两种方法检测结果完全一致.因此,本研究所建立的BEVTaqMan RT-PCR检测方法具有快速、准确、特异性强、敏感性高、重复性好的优点,为国内BEV的检测提供了有力的技术支持.本研究首次通过病毒核酸检测证明了我国部分地区的牛群中存在BEV感染.     

遂宁地区桤木造林保存现状的调查及分析

本文认为过去推行的"桤木上山"其保存状况差异明显。由于坡上部土层浅薄以及交替出现的季节性干旱,而桤木又不耐旱,所以栽植的桤木保存率较低,生长量较小;而坡的中、下部因土层逐渐加厚和水源涵养较好,它的保存率和生长量较高。建议桤木主要用于坡的中、下部和"四旁"或疏林地补植造林,同时坡上部桤木造林要大窝整地,深栽客土。     

猪流行性腹泻病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

为建立一种适用于现场快速检测的猪流行性腹泻病毒(PEDV)LAMP技术,基于羟基萘酚蓝(HNB)的可视化显色特点,根据PEDV M基因编码区序列,设计合成1套引物,通过反应物浓度和反应条件优化,建立了可闭管检测的PEDV RT-LAMP检测方法。特异性和灵敏度试验结果显示,建立的RT-LAMP检测技术快速、灵敏、特异,可于1 h内检出0.2 mL 0.1 TCID₅₀/mL的病毒RNA,与实时荧光RT-PCR检测方法灵敏度一致,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型以及猪链球菌2型核酸不发生交叉反应。利用该方法对187份送检的粪拭子及病死猪组织样品进行应用检测,检出阳性样品9份,与荧光定量RT-PCR方法检测结果一致。试验结果表明,所建立的方法快速、特异,重复性满足要求,适用于送检样品的PEDV快速检测。     

进口种猪的检疫

2009年4月19日凌晨,陕西省某养殖公司从美国进口的1000头种猪直达西安空港,在陕西出入境检验检疫局严格监管下,运抵隔离场,依据《中华人民共和国从美利坚合众国输入猪的检疫卫生条件》要求,实施了45天的隔离检疫,在此期间,完成了A型H1N1猪流感、猪密螺旋体痢疾、猪布氏杆菌病、猪伪狂犬病、猪传染性胃肠炎、结核病、猪传染性胸膜肺炎、猪蓝耳病等疫病实验室检疫,检出:猪伪狂犬病抗体阳性猪2头、猪传染性胃肠炎抗体阳性猪9头、猪传染性胸膜肺炎抗体阳性猪11头、猪蓝耳病抗体阳性猪13头,按有关法律规定,对阳性猪进行扑杀无害处理,疫病检出率5%,合格率达到95%,检疫合格种猪已安全放行。