应用免疫酶染色法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

用免疫酶染色法检测Ｖｅｒｏ细胞培养物，陈旧石蜡切片和人工感染试验鸡组织中的ＡＶＡＶ，并比较了ＡＶＡＶ强毒和弱毒株在组织中情况，结果发现，试验鸡于感染ＡＶＡＶ弱毒株后１－５天、感染ＡＶＡＶ强毒株后１－９天出现病毒血症；跗关节、跖趾关节、趾关节，趾屈肌健、脾脏、肝脏等组织中病毒的检出最高，存在时间也最长；在感染后３－２０天于感染鸡法氏囊、感染后３－１１天于感染鸡胸腺中检出了强毒株，在这两组织中未检出Ａ     

鸡病毒性关节炎病毒适应Vero细胞的研究

５株已适应鸡胚细胞的ＡＶＡＶ在Ｖｅｒｏ细胞上传２～５代后各毒株均能产生明显的ＣＰＥ和较高的病毒滴度，而２株非鸡胚细胞适应株（分别为鸡胚毒和野外组织毒）在Ｖｅｒｏ细胞上盲传７代，仍无明显的ＣＰＥ出现。这一结果初步表明Ｖｅｒｏ细胞能用于已适应鸡胚细胞的毒株的增殖。而不能用于病毒的分离。吸附时间与冻融次数明显影响病毒的适应进程，以吸附１小时、冻融２次以上为佳。ＡＶＡＶＪＮ－１株能在Ｖｅｒｏ细胞上产生蚀斑，大小为２．７～４．４ｍｍ，出斑时间为接种后４～５天，Ｖｅｒｏ细胞用于中和试验，测得Ｓ（１１３３）株免疫鸡血清的小和效价为１：８０。     

鸡病毒性关节炎弱毒疫苗的研制Ⅰ．弱毒株的筛选及其对雏鸡的安全性

将鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）鸡胚毒Ｊ─１株适应于鸡胚细胞和Ｖｅｒｏ细胞，经连续传代，通过４０．５℃、３７℃、３２℃的交替升降培养温度培养，筛选出１株毒力较弱的克隆株，该克隆株蚀斑大小为２．７～３．１ｍｍ。以１０５．７２５ＴＣＩＤ５０注射于１日龄敏感雏鸡的足掌皮下和以１０４．７２５～１０６．７２５ＴＣＩＤ５０注射于１日龄敏感雏鸡胸部肌肉内，对雏鸡无致病性。该克隆株在敏感雏鸡内连传３代，无毒力返强现象。这一结果表明，本试验筛选出的ＡＶＡＶ弱毒株对雏鸡具有良好的安全性和遗传稳定性。     

鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）Ａ６６株接种于鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了（ＤＨＶ）Ａ６６毒株能够在ＣＥＦ上增殖。试验还表明,犊牛血清对ＤＨＶ增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度测定结果绘制出了病毒在ＣＥＦ上的生长曲线。从生长曲线可以看出,接种后８～１６ｈ病毒开始增殖,３６～６０ｈ细胞培养物中病毒滴度达最高水平。这与（ＤＨＶ）Ａ６６死鸡胚的时间基本一致鸭肝炎病毒A_(66)弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养@张小飞$安徽…     

应用聚合酶链反应鉴别诊断马立克氏病病毒及免疫效果监测

应用３对引物建立了３套聚合酶链反应检测体系。用该技术分别检测马立克氏病毒１型，３型毒株，并能鉴别１型致癌性强毒株和非致癌性弱毒株；可从强毒感染 病鸡病变脏器和弱毒免疫的ＳＰＦ雏鸡不同时期采集的弱髓中检测到ＭＤＶ１型病毒的ＤＮＡ；可鉴别强毒发病鸡羽髓和弱毒免疫鸡羽髓。以羽髓为检测材料，应用上述ＰＣＲ技术可以ＭＤＶ１型弱毒疫苗免疫鸡群进行免疫效果监测。     

新城疫病毒在不同的细胞上增殖特性的研究

研究新城疫病毒（Ｎｅｗｓｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ Ｖｉｒｕｓ,ＮＤＶ）可,弱毒株在不同的传代细胞的生物学特性。Ｆ４８Ｅ８强毒株在ＢＨＫ、Ｖｅｒｏ和ＣＥＦ中都能增殖并产生细胞病变,而Ｖ４生弱毒株不能在ＢＨＫ和Ｖｅｒｏ中增殖,当ＭＥＭ含１０ｕｇ／ｍＬ胰蛋白酶时,ＮＤＶ弱毒株在Ｖｅｒｏ中能较好地复制,将Ｖ４株在Ｖｅｒｏ中传代培养后,Ｖｅｒｏ中传代的Ｖ４毒株的ＨＡ较低,但毒力增强,ＢＨＫ中传代的Ｖ４毒     

内蒙古地区鸡传染性法氏囊病病毒生物学特性的研究

从内蒙古地区分离到３株ＩＢＤＶ（分别命名为Ｊ、Ｗ、Ｈ株）并对其进行细胞培养特性、理化特性、形态特性、动物回归试验和血清学鉴定，研究结果表明：适应鸡胚的Ｊ、Ｗ、Ｈ株可迅速适应ＣＥＦ，继而适应于Ｖｅｒｏ和ＲＫ＿（－１３）细胞，在ＲＫ＿（－１３）细胞上的感染滴度最高；３个毒株能抵抗氯仿、耐热（６０℃１小时）、耐酸（ｐＨ２）、对碱（ｐＨ１２）敏感；负染样品在电镜下看到正六边形，直径约５５～６５ｎｍ，有实心和空心的病毒颗粒；回归鸡后表现典型的临诊症状和特征性病理变化，发病率为８０～１００％，病死率为２６．６～４６．６％；法氏囊超薄切片在电镜下观察到法氏囊淋巴细胞浆内呈晶格状排列或包涵体形式存在的病毒颗粒。微量交叉中和试验结果表明：Ｊ、Ｗ、Ｈ株为血清Ⅰ型ＩＢＤＶ的３个不同亚型毒株。     

用单克隆抗体检测禽脑脊髓炎病毒抗原

建立了抗禽脊髓炎病毒（ＡＥＶ）的单克隆抗体（ＭＡｂ）ＶＲ９－１。接种ＡＥ鸡胚适应毒Ｖａｎ Ｒｏｃｋｃｌ株、２种疫苗株和２种野毒株的雏鸡脑冰冻切片、鸡胚成纤维细胞和鸡胚脑细胞，用间接免疫荧光和免疫过氧化物酶染色检查，结果，均可与ＭＡｂ ＶＲ９－１起反应。该ＭＡｂ也可用于石蜡包埋切片的抗生物素蛋白－生物素－过氧化物酶染色。试验结果表明，该ＭＡｂ可认别ＡＥＶ毒株的一个共同抗原决定簇，可用于ＡＥＶ检测和定     

传染性法氏囊病超强毒致弱株的一些特性

某些传染性法氏囊病强毒株（ＨＶ－ＩＢＤＶ）通过鸡胚连续传代适应于鸡胚，鸡胚适应的ＨＶ－ＩＢＤＶ成功地在鸡胚成纤维（ＣＥＦ）细胞上生长，表现致细胞病变作用，鸡胚－细胞适应株对实验感染雏鸡的致病性大大降低，无一只死亡，法氏囊病变与标准株的相似，交叉病毒中和试验表明，细胞培养适应与标准株的抗原性有差异，免疫学试验表明，适应株免疫鸡后，对ＨＶ－ＩＢＤＶ强毒感染有很好保护作用，特别是免疫接种后３天攻强毒，适     

鸭肝炎病毒A66弱毒株在鸡胚成纤维细胞上的培养：张小飞

将鸡胚致弱的鸭肝炎病毒（ＤＨＶ）Ａ６６侏接种于鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）进行细胞培养,通过对细胞培养物进行病毒滴度测定、鸡胚中和试验和电镜检查,证明了ＤＨＶＡ６６毒株能够在ＣＥＦ上增殖。试验还表明,犊牛血清对ＤＨＶ增殖具有明显的抑制作用。此外,还根据细胞培养物病毒滴度毒滴度测定结果绘制出了病毒在ＣＥＦ上的生长曲线。     

抗鸡病毒性关节炎高免卵黄抗体的制备,检测及应用研究

用鸡病毒性关节炎病毒（ＡＶＡＶ）弱毒株连续免疫产蛋母鸡３次，制备出高免卵黄抗体，其琼效价为１：１２８－１：２５６。卵黄不需任何处理可直接用于试验，用间接ＥＬＩＳＡ检测血清和卵黄抗体，免疫后１０ｄ两者的ＡＶＡＶ抗体无明显相关性，免疫后２０－５０ｄ两者抗体效价呈显著相关性，相关系数为０．８６３。免疫防治试验表明，肌注高免卵黄抗体的５日龄肉鸡，可抵抗ＡＶＡＶ强毒的攻击；发生ＡＶＡ的病鸡立即用卵黄抗体治疗     

CDV93039株在Vero细胞上增殖的研究

ＣＤＶ９３０３９株感染Ｖｅｒｏ细胞后主要表现细胞变性、坏死，空泡化、合胞体形成和包涵体的出现。感染后４天可见胞浆包涵体，８天可见核内包涵体，核内包涵体的产生可能与病毒的毒力有关。与文献报道的ＣＤＶ其他毒株相比，ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的感染速率属中间型。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上增殖后的毒力较高，除不同毒株间可能存在差异外，培养温度的高低亦是原因之一。ＣＤＶ９３０３９株在Ｖｅｒｏ细胞上的最佳增殖条件是在３３℃培养８～１２天。     

从疑似IBD病鸡的法氏囊组织中分离到1株ARV

从暴发类似传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的江苏省某鸡场采集病鸡法氏囊组织制成组织悬液，接种鸡胚卵黄囊，部分鸡胚３～５ｄ死亡，部分鸡胚不死亡但有病变。用感染胚卵黄囊和绒尿膜混合物，接种鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），盲传３代后，发现以合胞体为特征的细胞病变（ＣＰＥ）。感染细胞做超薄切片电镜观察，可见细胞浆内病毒粒子呈整齐的晶格状排列。用免疫沉淀法提取病毒抽提核酸，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，可见规律排列的１０条带，呈３－３－１－３排列。与禽呼肠孤病毒（ＡＲＶ）参考毒株Ｓ１１３３株的核酸谱带的数目和位置相同。血清学试验与ＡＲＶ呈阳性反应，与传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）呈阴性反应。证明分离病毒为ＡＲＶ     

马传染性贫血病毒弱毒株LTR的克隆及序列分析

从马传染性贫血病毒（ＥＩＡＶ）弱毒株感染的驴胎皮肤（ＦＤＤ）细胞中提取前病毒ＤＮＡ，以其为模板，通过ＰＣＲ扩增出ＥＩＡＶ弱毒株的ＬＴＲ，并将其克隆到载体质粒ｐＵＣ１９中。经酶切分析，ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交筛选、鉴定，获得含有ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ片段的重组质粒ｐＬＴＲ。对该质粒的序列分析发现，在中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ的Ｕ３区含有４个与细胞转录因子结合的位点，其中有３个ＰＵ．１位点和１个ＡＰ－１位点，Ｕ３区还存在１个ＴＡＴＡＴＡＡ启动子序列；Ｒ区长为８１ｂｐ，含有１个帽位点ＧＧ和１个Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列ＡＡＴＡＡＡ；在帽位点下游是１个病毒Ｔａｔ蛋白结合位点，即ＴＡＲ位点；Ｕ５区长为３９ｂｐ。中国ＥＩＡＶ弱毒株ＬＴＲ序列与国外发表的其他毒株序列相比，在ＬＴＲ的一些调控部位有变异发生，中国ＥＩＡＶ弱毒株与美国ＥＩＡＶ原型株（Ｗｙｏｍｉｎｇ株）ＬＴＲ区核苷酸序列有１８．７２％的差异。     

鸡传染性法氏囊病病毒适应于Vero细胞的初步研究

将国内６个省市（广东、巾东、河北、辽宁、、新疆和北京）的７株鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的法氏囊组织处理后，直接在Ｖｅｒｏ细胞上盲传３～４代，均能不同程度的产生特征性细胞病变效应（ＣＰＥ），并通过选用具有广谱性的抗法氏囊病病毒的单克隆抗体（ＩＢＩ）Ｖ－ＭｃＡｂ）采用间接免疫荧光（ＩＦＡ）和碱性磷酸酶—抗碱性磷酸酶桥联酶显色技术（ＡＰＡＡＰ）的方法对７株分离毒的Ｖｅｒｏ第８代细胞进行鉴定，又用逆转—聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对７株分离毒的第１４代Ｖｅｒｏ细胞毒进行进一步证实，结果表明这７株ＩＢＤ囊毒均适应于Ｖｅｒｏ细胞上，这是国内首次报道将组织毒直接适应于Ｖｅｒｏ传代细胞上。     

鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究

从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。     

鸡传染性法氏囊病超强毒LX株的分离鉴定

从一免疫失败鸡场中分离到１株鸡传染性法氏囊病野毒株,命名为ＬＸ株。经血清学、鸡胚接种、病毒形态、外源病毒（ＣＡＡ、ＮＤＶ和ＩＢＶ）排除试验等证实该分离物为纯净的ＩＢＤＶ。人工感染试验表明,该ＬＸ株接种８龄ＳＰＦ鸡后第２天鸡只精神 沉郁,拉白色或绿色粪便,发病率为１００％,第３￣４天出现死亡高峰,而后很少引起死亡,死亡率达９２．３％,剖检可见全身性出血素质,法氏囊呈“紫葡萄样”外观,脾脏肿大,胸腺萎     

鸡霍乱口服弱毒疫苗的研究

用经过选择的离多杀巴氏杆菌自然弱毒株Ｒ１－２３菌株制成的鸡霍乱固体培养口服弱疫苗，其安全剂量接近于２００个免疫剂量，该口服疫苗两次饮水免疫的最适总剂量为每羽５０亿个活菌，最佳间隔时间为４８小时，免疫鸡第二次饮苗第３天即可产生较好的免疫保护率（７／８），免疫鸡对异型强毒株Ｐ１０５９（８：Ａ）Ｐ２７２３（９：Ａ）和同型强毒株Ｃ４８－１（５：Ａ）滴鼻攻击的近期保护率平均为５／１６，６／１０，和９／１０，     

EDS—76病毒本地分离株实验感染鸡的研究

ＥＤＳ－７６病毒株（ＥＤＳＶ－ＩＶＲＩ／ＡＤ－８６）经口服感染产蛋鸡，虽然不引起明显的临床症状和眼观病变，但能引起子宫的严重损伤，出现蛋情品质低劣的破壳蛋和软壳蛋。感染鸡的脾脏，子宫和阴道组织内可观察到病毒的特异性免疫荧光。感染后６天，病毒经汇殖腔排出，感染后９～１０天可产生ＨＪ抗体，效价达２＾３～２＾６。     

免疫鸡MDV感染后羽毛根HVT的分离及HVT免疫对MDV抗原检测的影响

５只ＨＶＴ免疫鸡,实验感染ＭＤＶ后的第１～１０周期间,分别采用初次细胞分离培养物上清中的自由病毒粒子鉴定,ｄｏｔ－ｂｌｏｔＤＮＡ杂交和常规ＡＧＰ试验等方法,对并发感染鸡羽毛根进行了病毒及病毒抗原的动态检测与比较。结果显示,在上述羽毛根中可同时存在ＨＶＴ粒子和ＭＤＶＤＮＡ。ＨＶＴ可分离时间为ＭＤＶ攻毒后１～７周;ＭＤＶＤＮＡ最早检出时间为ＭＤＶ攻毒后的第１８～２２天,并达到其持续性（２２～７０ｄ）的检出率最高峰（１００％）;而ＡＧＰ法对此期间鸡只羽毛根ＭＤＶ抗原的最早检出时间在第２２天,且检出率很低。因此,羽毛病毒抗原ＡＧＰ检测法,对免疫鸡只或鸡群ＭＤＶ感染的诊断仍然是特异的,但较单纯感染的检测,其检出率更低,因而更难以反映出免疫鸡群中ＭＤＶ感染的真实状况。