猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：【研究目的】建立猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank中核苷酸序列设计猪淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性引物,经RT-PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品cDNA进行检测,构建LFA-1和CTLA-4荧光定量RT-PCR标准曲线。【结果】以1×109~1×102拷贝/μL不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系（LFA-1：RSq =0.992;CTLA-4：RSq =0.994）;样品检测显示LFA-1与CTLA-4引物的扩增曲线图和熔解曲线图的特异性。【结论】所构建的质粒标准品具有线性关系好、重复性好、敏感性高等特点,以及其引物在样品检测中的可应用性,为分析猪免疫细胞在感染病毒前后LFA-1和CTLA-4表达的变化以及评估猪体免疫功能,提供必要的技术平台。     

犬实验感染CDV的病理学研究

对实验感染犬瘟热病毒的病犬进行了系统的病理学观察，并用酶标ＳＰＡ法对病犬脏器组织中ＣＤＶ抗原进行了定位检查。结果表明，淋巴系统各器官组织是ＣＤＶ急性感染早期首先侵犯的靶器官。脏器组织的病理改变与ＣＤＶ抗原检出呈正相关。脏器组织中包涵体的检出与形态结构具有一定的特征性和示病意义，但采用免疫组化方法检查ＣＤＶ抗原，更具优越性。作者认为，ＣＤＶ９３０３９株和ＣＤＶ９３０４１株是致病力很强的泛嗜性ＣＤＶ。     

兔病毒性出血症垂直感染病例

兔病毒性出血症垂直感染病例田克恭遇秀玲吴娜隋丽华渠川玫李俊梅（军事医学科学院实验动物中心）１９９５年５月，某实验兔繁育场发生兔病毒性出血症，死亡５０余只，多数为孕兔和壮年兔。剖检死亡孕兔发现临产胎兔亦表现与死亡母兔相似的病变，经血凝和血凝抑制试验证实...     

猪皮肤源树突状细胞的分离和鉴定

摘要：【目的】分离出不需要体外诱导树突状细胞（DC）,为研究病毒与猪DC的关系奠定基础。【方法】将刮下的猪皮肤表皮培养过夜,对所分离获得的细胞通过流式细胞术、吉姆萨染色与扫描电镜进行表型与形态鉴定。【结果】试验结果表明,通过细胞计数分离到的细胞能达到5×106个细胞,流式细胞术检测细胞CD1a/SWC3a的双阳性细胞率为82.3%;流式细胞术检测CD80/86分子,阳性细胞率为90.2%;通过吉姆萨染色和扫描电镜观察,细胞表面有大量的树突状突起,符合DC的形态特征。【结论】通过表型和形态学分析,说明已经成功分离猪皮肤源DC,为器官移植和猪病毒性疾病的免疫抑制机理研究奠定基础。     

犬瘟热病毒(CDV)93039与CDV MD-77株感染Vero细胞的电镜观察

采用电镜技术对犬瘟热病毒（ＣＤＶ）９３０３９株和ＣＤＶ ＭＤ－７７株在体外培养细胞中的增殖过程和所致病变特点进行了比较研究。结果表明,２株病毒的形态发生过程与文献报道相符。ＣＤＶ９３０３９株与ＣＤＶＭＤ－７７株相比,少见长丝状核衣壳聚集及曲型的胞膜上出芽病毒粒子,涵体以电子致密小体为主,与文献报道的ＣＤＶond株较为相似 ;ＣＤＶ ＭＤ－７７株可见成堆存在的核衣壳结构,胞膜上出芽增殖明显可见,早期包涵     

猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法的建立

摘要：【研究目的】建立猪LFA-1和CTLA-4实时荧光定量PCR检测方法。【方法】根据GenBank中核苷酸序列设计猪淋巴细胞功能相关抗原-1(LFA-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)的特异性引物,经RT-PCR扩增、目的片段与载体连接转化以及重组质粒的鉴定,并对重组质粒标准品和样品cDNA进行检测,构建LFA-1和CTLA-4荧光定量RT-PCR标准曲线。【结果】以1×109~1×102拷贝/μL不同稀释水平的标准品进行荧光定量PCR扩增后,统计学分析显示标准品浓度的对数与Ct值之间存在良好的线性关系（LFA-1：RSq =0.992;CTLA-4：RSq =0.994）;样品检测显示LFA-1与CTLA-4引物的扩增曲线图和熔解曲线图的特异性。【结论】所构建的质粒标准品具有线性关系好、重复性好、敏感性高等特点,以及其引物在样品检测中的可应用性,为分析猪免疫细胞在感染病毒前后LFA-1和CTLA-4表达的变化以及评估猪体免疫功能,提供必要的技术平台。     

猪圆环病毒2型感染猪皮肤源树突状细胞炎性反应能力的变化

用PCV2 B1株经鼻腔接种40日龄SPF仔猪,于接种后3、7、14 d宰杀,收集皮肤源树突状细胞(DC).利用实时荧光定量PCR技术对感染仔猪皮肤源DC的IL-10、TNF-α、IFN-α、IL-8、趋化因子受体1(CCR1)、CCR5在mRNA转录水平的变化进行定量分析.结果表明,IFN-α在接种后3 d(3DPI)显著下调(P＜0.05),TNF-α、IL-10在7DPI时显著上调(P＜0.05);趋化因子IL-8在3、7、14 DPI时均下调,差异接近显著;MCP-1在感染后3、14DPI下调,7DPI均上调,但不显著;MIP-1β在3、7DPI明显上调,14DPI恢复正常;趋化因子受体CCR1、CCR5在3、7和14DPI均上调,且7DPI显著上调(P＜0.05).以上结果表明PCV2在感染早期可抑制DC炎性反应的能力,免疫应答失调,影响了动物机体的细胞和体液免疫功能的发挥.     

间接ELISA检测犬瘟热血清抗体方法的建立

以重组表达的犬瘟热病毒融合蛋白(fusion protein,F)作为包被抗原,建立了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接ELISA方法。所建立的间接ELISA抗原包被浓度为125ng/孔,血清最佳稀释度为1∶160。经阻断试验、重复性试验等表明该方法特异性强、重复性较好,可用于犬瘟热血清抗体的定量和定性检测。