河南某鸡场地方品种鸡禽白血病病毒感染状态检测

为了解河南某鸡场地方品种鸡禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus,ALV)感染状态,采集该鸡场绿壳蛋鸡、青脚麻鸡和固始鸡的泄殖腔棉拭子、蛋清和血清,利用ELISA方法检测泄殖腔棉拭子、蛋清和血清样品中的ALV-p27抗原及血清样品中ALV-A/B和ALV-J抗体的水平,同时采集其血液接种DF-1细胞进行外源性ALV的分离鉴定。结果表明,绿壳蛋鸡泄殖腔棉拭子、蛋清和血清中的ALV-p27抗原阳性率分别为23.55%、11.96%和26.63%,血清中ALV-A/B和ALV-J抗体的阳性率分别为30.43%和16.85%,外源性ALV的分离阳性率为13.04%;青脚麻鸡泄殖腔棉拭子、蛋清和血清中抗原阳性率分别为10.99%、5.43%和22.83%,血清中ALV-A/B和ALV-J抗体的阳性率分别为18.48%和6.52%,外源性ALV的分离阳性率为8.00%;固始鸡泄殖腔棉拭子、蛋清和血清中抗原阳性率分别为21.07%、12.32%和25.00%,血清中ALVA/B和ALV-J抗体的阳性率分别为28.26%和17.39%,外源性ALV的分离阳性率为12.50%。表明3个地方品种鸡都不同程度地感染外源性ALV,且可能存在ALV-A/B和ALV-J 2种或3种亚群同时感染。     

河南省规模鸡场禽白血病感染情况调查

为了解河南省禽白血病感染情况,对来自39个鸡场的血清样品和蛋清样品分别进行禽白血病A/B亚群抗体、禽白血病J亚群抗体检测和禽白血病抗原检测,并按场点类别对结果进行分析。结果显示,禽白血病A/B亚群抗体平均个体阳性率和场群阳性率分别为17.49%和41.03%,种鸡场个体阳性率显著低于商品代鸡场;禽白血病J亚群抗体平均个体阳性率和场群阳性率分别为10.40%和23.08%,种鸡场个体阳性率显著高于商品代鸡场;禽白血病P27抗原平均个体阳性率和场群阳性率分别为7.45%和23.08%,种鸡场和商品代鸡场个体阳性率无显著差异,结果表明,河南省规模鸡场禽白血病感染情况较为严重,禽白血病净化工作亟需推进。     

日照麻鸡禽白血病的流行病学调查

为掌握日照麻鸡禽白血病流行状况,更好地开展禽白血病净化工作,在全市19个鸡场抽检血清710份,泄殖腔拭子710份,通过ELISA试验进行检测.结果显示,禽白血病J抗体、A/B抗体和P27抗原样品总体阳性率分别为8.0％、3.7％和11.0％.表明日照麻鸡这一地方优良品种禽白血病感染较为普遍,开展净化工作迫在眉睫.     

湖北部分肉种鸡群J亚群禽白血病血清学调查及PCR检测

采用间接ELISA和ALV-J特异性PCR方法,对湖北省荆州市的两个肉种鸡场共94只淘汰肉种鸡进行J亚群禽白血病血清学调查和ALV-J前病毒核酸检测.两个鸡场共检测出13份ALV-J抗体阳性血清和11份核酸阳性样品,抗体阳性率分别为13.2%和14.6%,核酸阳性率分别为11.3%和12.2%.血清学调查和PCR检测结果表明,湖北鸡群已存在J亚群禽白血病.     

地方鸡禽白血病病毒感染调查及主要流行亚群分析

为了解湖北省地方鸡禽白血病病毒的感染状态及主要流行亚群,从麻城绿壳蛋鸡、江汉鸡、景阳鸡3个地方品种核心群采集了7 477份样品,进行蛋清p27抗原检测、公鸡病毒分离鉴定及分离株gp85基因序列分析。结果显示:3个地方鸡种蛋清p27抗原阳性率分别为1.32%、6.54%和2.82%,公鸡病毒分离率为6.11%、30.14%和8.64%,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染比较严重,不同品种的感染率不同,公鸡的排毒率高于母鸡。利用PCR方法将分离的15株禽白血病病毒分为两大亚群,分离株gp85基因遗传进化分析结果显示,3个地方鸡品种主要流行J、K亚群禽白血病病毒,均存在J、K亚群禽白血病病毒的共感染,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染情况较为复杂。     

南阳市禽白血病的血清调查及防控

2010年5月,南阳市周边的养鸡场不断发生疑似禽白血病现象,给养殖户造成重大损失,为准确掌握禽白血病的发生、发展情况,于2010年5月15日至6月15日,在南阳市的卧龙和宛城养鸡较集中的两区开展了禽白血病的血清学调查工作.本次调查共采集16个种鸡场和36个商品鸡场鸡血清样品953份.用禽白血病抗原诊断试剂盒(北京爱德士元亨生物科技有限公司生产),ELISA的方法进行抗原监测,结果表明:所检测的16个种鸡场325份样品中,检测禽白血病毒P27蛋白呈阳性126份,阳性率为38.7%,其中肉种鸡的阳性率较蛋种鸡高,36个商品场的628份样品中,阳性样品为185份,阳性率为29.5%.本文结合调查,对白血病的发生和防治叙述如下,仅供参考.     

黔东南小香鸡种群禽白血病、禽网状内皮组织增生症和鸡白痢感染情况检测与分析

为了解黔东南小香鸡种群禽白血病（AL）、禽网状内皮组织增生症（RE）和鸡白痢（PD）的感染状况,便于有效预防、净化疫病,更好地保护黔东南小香鸡的种质资源,从鸡群采集524份血清样品,采用ELISA检测禽白血病病毒p27抗原（ALV-p27）、禽网状内皮组织增生症病毒（REV）及鸡白痢感染抗体水平,采用PCR核酸检测进行禽白血病病毒A、B、J亚群（ALV-A、B、J）鉴定。结果表明：样品中ALV-p27抗原的阳性率为85.88%、ALV-J亚群的阳性率42.67%,REV抗体的阳性率为25.57%,鸡白痢抗体的阳性率为3.82%。根据检测结果,建议尽早对种群采取净化措施,以避免AL进一步发生及流行。     

清远麻祖代鸡群禽白血病感染研究

采用禽白血病抗原检测试剂盒对8、12、20和26周龄的同一清远麻祖代鸡群泄殖腔拭子样品各500份进行ELISA检测,结果显示:抽检鸡群在不同周龄的禽白血病阳性率分别为5.2％、9.4％、12.6％和8.6％,清远麻祖代鸡白血病的排毒高峰在20周龄,是进行禽白血病抗原检测的最佳时期.     

晋北散养边鸡群ALV-p27携带率及ALV-A/B与ALV-J亚群的ELISA检测

为了解晋北地区农户散养边鸡群ALV感染情况,从鸡群中采集蛋清和血清样品共92份,应用ELISA方法检测ALV-p27抗原及蛋清和血清样品中ALV-A/B与ALV-J抗体阳性率。ELISA结果显示,92份蛋清和血清样品的ALV-p27抗原检出率为9.78%,ALV-A/B与ALV-J抗体阳性率分别为20.00%和6.25%。检测结果表明,晋北散养蛋鸡群同时感染外源性ALV-A/B与ALV-J亚群,且主要以A/B亚群为主,不存在ALV-A/B与ALV-J 2种或3种亚群的共感染。     

信阳地区土鸡群A-B亚群禽白血病血清学调查

为掌握信阳地区土鸡A-B亚群禽白血病流行情况,于2016年3月—2017年7月,采用ELISA方法对采自信阳地区77个土鸡场的1 351份血清样品进行检测。结果显示,A-B亚群禽白血病阳性鸡场26个,鸡场阳性率为33.8%,阳性样品75份,个体阳性率为5.6%;不同月份阳性率有差异,1月鸡场阳性率最高,为66.7%,10月未检出阳性样品,4月个体阳性率最高,为33.3%;不同规模养殖场阳性率差异不大,规模鸡场阳性率为38.5%、个体阳性率为5.5%,散养户鸡场阳性率为28.9%、个体阳性率为5.6%。可见,禽白血病在信阳地区已经普遍存在,今后要加强对该病的净化及根除工作,有效控制其蔓延。     

活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法探讨

[目的]探讨活毒疫苗中禽白血病病毒污染的检测方法.[方法]随机抽取安徽省鸡群使用的国内外活毒疫苗,使用对禽白血病病毒（ALV）群特异性p27抗原ELISA检测试剂盒进行检测,同时根据禽白血病痛毒各亚群保守的pol基因设计引物,进行PCR检测.[结果]7个国内公司鸡传染性法氏囊B87株检测结果均为阳性,某国外公司鸡痘、鸡传染性喉气管炎检测结果呈阳性,某国内公司为阳性.鸡新城疫lasota株共检测疫苗35份,检出率达28.57％.ELISA检测结果与PCR结果相一致.[结论]使用p27抗原ELISA检测试剂盒和PCR法均可作为活毒疫苗中ALV污染检测的有效方法,说明活毒疫苗中ALV污染是ALV传播的重要因素.     

安徽省地方品种鸡J-亚群禽白血病感染状况的血清学研究

[目的]了解安徽省优良地方品种鸡群中禽白血病病毒J-亚群(ALV-J)的感染状况。[方法]对安徽省8个鸡场、7个不同地方品种鸡开展了ALV-J感染的血清学调查。[结果]安徽省被检测鸡场均存在ALV-J感染,被检测鸡群个体阳性率高达49.9%,甚至部分鸡场鸡群个体阳性率高达86.2%。AHDF5品种鸡个体阳性率高达86.2%,其次为AHDF2、AHDF6、AHDF3、AHDF7、AHDF4和AHDF1品种鸡。4个周龄段的鸡群均有ALV-J抗体阳性鸡,但存在一定程度的差异.12周龄以下鸡群ALV-J阳性感染率相对较低,为7.1%;随着周龄的增大,ALV-J阳性率总体上呈现上升趋势,最高达50%。[结论]安徽省地方品种鸡中ALV-J的感染非常严重,应及早对ALV-J进行净化和采取综合防控措施。     

多杀性巴氏杆菌与禽白血病病毒亚群混合感染诊断及相关基因分析

【目的】明确引起贵州某规模化（20万羽）养殖场三黄鸡群发病的病因及科学用药,最大限度减轻经济损失,同时为规模化养殖场防控禽白血病和净化鸡群提供参考依据。【方法】无菌采集送检病鸡的心脏、肝脏和脾脏等组织进行细菌分离培养、生化试验、荚膜分型、毒力基因和耐药基因等分子生物学检测,同时对采集病料进行禽白血病病毒（ALV） PCR检测及gp85基因克隆测序分析。【结果】成功分离获得1株多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,Pm）,命名为Pm-GZXF2021; Pm-GZXF2021为荚膜A型Pm,具有黏附素（ptfA、hsf-1、hsf-2、pfhA、fimA和tadD）、超氧化物歧化酶（sodA）、外膜蛋白（ompA、ompH、plpB和oma87）和铁摄取（exbB、exbD、tonB、Fur、hgbB和hgbA）相关的毒力基因,同时携带有喹诺酮类的gyrB耐药基因和内酰胺类的tem耐药基因;药敏试验结果表明,Pm-GZXF2021对米诺环素、丁胺卡那、哌拉西林、庆大霉素、多西环素、氧氟沙星、新霉素、头孢拉定、麦迪霉素及头孢哌酮等药物敏感,而对头孢他啶、苯唑西林、羧苄西林及头孢曲松等药物已产生耐药性;健康昆明小鼠在接种Pm-GZXF2021纯培养菌液（1.7×108 CFU/mL）后12 h内全部死亡,剖检可见昆明小鼠小肠均出现胶冻样浸润,肝脏肿大且伴有白色坏死灶。从病鸡的组织样品检测出ALV,命名为ALV-GZXF2021;由基于gp85基因核苷酸序列相似性构建的ALV系统发育进化树可知,ALV-GZXF2021与5株ALV-K参考毒株处于同一分支,与A、B、D、E、J亚群处于不同分支,即ALV-GZXF2021属于K亚群。【结论】贵州某规模化养殖场三黄鸡群发病是由Pm与K亚群外源性ALV混合感染所致。因此,养殖场应采取相应的防控措施,一般包括加强饲养管理,做好生物安全措施及疫苗接种等,尤其是建立无禽白血病的种鸡群。     

江苏省禽J亚型和AB亚型白血病共感染的血清学调查

[目的]进一步了解江苏省鸡群白血病的感染情况。[方法]从2011年3月到2012年5月在江苏省部分地区的鸡场随机采样600份,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测J亚型白血病(ALV-J)和AB亚型白血病(ALV-AB)的抗体阳性率。[结果]江苏省的大多数鸡场均存在白血病的感染,其中ALV-J和ALV-AB为阳性的鸡场均有10个,ALV-J最高阳性率达35.56%,ALV-AB最高阳性率为15.56%,共感染的阳性率最高达6.90%。ALV-J、ALV-AB感染的年龄段存在一定差异,感染率最高的年龄段是12～24周龄;黄羽肉鸡和麻鸡ALV-J、ALV-AB感染率都较高,蛋鸡也存在ALV-J感染的情况,表明近年来J亚型白血病的宿主范围正在进一步扩大。[结论]该研究为进一步开展鸡白血病的净化工作提供了一定的依据。     

贵州鸡淋巴性白血病A亚型血清学调查及PCR诊断

鸡白血病是由禽白血病病毒引起的多种肿瘤性疾病的总称,以造血组织恶性增生为特征的一种病型很复杂的慢性传染病.通过对贵州省鸡淋巴性白血病血清学调查,采用ELISA方法对采集分离的273份血清样本进行了血清学抗体检测,检测结果阳性率为14.65%;运用PCR方法对莱鸡场血管瘤型病例进行生物学诊断,检测结果证实了血管瘤型病例是由ALV-A亚群病毒引起的禽A亚型淋巴性白血病.     

一株J亚型禽白血病病毒的分离鉴定及其gp85基因的序列分析

为确定安徽巢湖某地方品种养鸡场的疑似禽白血病(avian leukosis,AL)的病原,以DF-1细胞从肿瘤组织中分离病毒,采用RT-PCR方法进行鉴定,并对其感染细胞上清进行透射电镜观察。同时对送检病鸡的心、肝、脾及腺胃等进行组织病理学观察,最后将扩增出的gp85基因与GenBank收录的其他ALV序列进行比对分析。结果表明:PCR扩增产物大小约为928 bp,经测序证实为ALV gp85基因,将该分离株命名为AHCH-2018株。透射电镜观察到具有囊膜的大小约100 nm的病毒粒子。组织病理学结果显示,病鸡的心、肝、脾及腺胃中有大量成灶淋巴细胞增殖。遗传进化分析结果表明,分离株的gp85基因与多株ALV J参考毒株核苷酸序列的同源性为94.1%~99.5%,且与GD1401J株的核苷酸同源性最高,达99.5%,与A、B、C、D、E亚群同源性为46.5%~49.7%。该分离株与J亚群原型毒株处于同一大分支。本研究为了解安徽土鸡种群中禽白血病的分子流行病学特点提供了一定的数据参考。     

草鸡J亚群禽白血病病毒的PCR检测

通过对GenBank发表的ALV的基因序列的分析,针对J型ALV保守区设计并合成1对特异性引物。通过对反应条件的优化,确定了检测ALV的PCR检测方法,对来源于江苏地区不同草鸡养殖基地的10份病料组织样本提取DNA进行PCR扩增。结果对疑似J亚群ALV病料和正常鸡肝脏组织的病原核酸检出率分别为90%和0,同时将扩增的目的基因进行克隆测序,并与GenBank中的参考毒株进行比较,结果表明目的基因片段序列长300 bp左右,与参考毒株核苷酸序列同源性为97%以上。试验表明,江苏地区草鸡群中确实存在J亚群鸡白血病病毒感染的情况。     

血管瘤型禽白血病的实验室诊断

采用血清学方法和分子生物学技术对某蛋鸡场感染鸡进行实验室诊断,采用禽白血病A或B亚群抗体检测试剂盒对该鸡场的血清样本进行检测,抗体阳性率达到70%(7/10);针对ALV群特异性抗原P27基因进行PCR扩增,血液、肝脏病料样本中核酸的检出率分别为66.7%(4/6)、75%(3/4);取ALV 囊膜糖蛋白gp85 基因的扩增产物进行酶切分析,扩增的目的片断中存在BglⅡ和 SspⅠ酶切位点,BamHⅠ不能切割PCR 产物.试验结果证实本次疫病是由ALV-A 亚群病毒引起的血管瘤型白血病.