盐生植物盐穗木悬浮细胞系的建立

[目的]组织和细胞培养能够为研究盐穗木的耐盐机制提供实验材料,建立盐穗木悬浮细胞系,从细胞水平上揭示盐生植物盐穗木的耐盐机制.[方法]以成熟胚为外植体,探讨不同培养基和激素配比对愈伤组织诱导以及悬浮细胞系培养条件的优化,并以酚藏花红染色和固体培养基培养法检测悬浮细胞的细胞活性.[结果]以葡萄糖替换蔗糖作为培养基碳源,在0.5 mg/L6-BA、1.0 mg/L KT下盐穗木诱导愈伤组织最适宜悬浮细胞的培养;而在液体基础培养基中添加1.0 mg/L 6-BA、1.0 mg/L KT,则最有利于盐穗木悬浮细胞系的稳定.所获得的盐穗木悬浮细胞具有一定的细胞活性.[结论]采用成熟胚为外植体诱导愈伤组织能够获得盐穗木悬浮细胞系,为在细胞层面上深入开展盐穗木耐盐机制奠定基础.     

老瓜头悬浮细胞培养及其生长特性的研究

以老瓜头嫩茎为材料诱导出愈伤组织,在光照和黑暗条件下进行愈伤细胞的悬浮培养,每隔2 d取样测定相关的生理生化指标.结果表明,老瓜头悬浮细胞的生长曲线呈"S"形,在黑暗条件下生长周期为18 d,弱光条件下24 d,说明黑暗有利于老瓜头细胞生长;在细胞悬浮培养过程中,不同培养条件下,细胞培养液pH值的变化趋势相似,即先下降后上升;老瓜头细胞中可溶性蛋白质的含量变化与细胞生长呈负相关,过氧化物酶活性与细胞生长活力的变化呈正相关.     

肉苁蓉细胞悬浮培养动力学研究

肉苁蓉细胞悬浮培养的生长周期约为25 d,细胞内苯乙醇糖甙（PeG）的比生成速率YP/X与肉苁蓉细胞比生长速率μ大致成线性关系,为生长偶联型. 在培养过程中,培养基中的磷酸盐和氨盐被迅速消耗,而硝酸盐的利用稍慢,基于蔗糖、氨盐和硝酸盐的细胞收率系数分别为0.48、160和6.4 g/g,基于蔗糖的PeG收率系数为0.055 g/g. 根据细胞基本元素分析及各收率系数之间的关系,计算得出了肉苁蓉细胞悬浮培养的化学计量方程式,为细胞的生物反应器扩大培养提供理论依据.      

药用植物青天葵的悬浮培养条件优化

以悬浮细胞干重增加率、酶活力为考察指标,研究不同培养基、光照条件、蔗糖浓度、培养基pH值对药用植物青天葵细胞生长的影响,对青天葵悬浮细胞培养方法进行条件优化。结果表明,1/4MS和1/2MS培养物外观形态最佳,1/2MS组培养物干重增加率最大,MDA含量最低,POD含量最高;暗培养条件有利于愈伤组织干重的增加;蔗糖浓度为1%时愈伤组织干重增加率显著高于其他处理组,pH6.0为青天葵悬浮培养的合适pH值,培养基中添加MES可明显提高干重增加率。     

茄子愈伤组织诱导及悬浮细胞培养（英文）

[目的]建立茄子愈伤组织悬浮细胞培养体系。[方法]以三月茄为试验材料,利用正交设计筛选适合茄子愈伤组织诱导、继代保存以及悬浮培养的培养基并测定悬浮培养过程中细胞生长状况。[结果]适宜茄子愈伤组织诱导的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）;适宜继代保存的培养基为MS＋6-BA（0.2 mg/L）＋NAA（0.2 mg/L）＋KT（0.1 mg/L）;适宜悬浮细胞培养的培养基为MS＋NAA（0.4mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基。茄子悬浮培养细胞生长呈S形曲线,其中前3 d为起始期,3~7 d处于对数生长期,7~8 d为静止期;8~11 d为衰退期。悬浮细胞密度随着培养时间的延长增长,在培养第7天达到最高值,约3.8×105个/ml.随后细胞数量迅速减少。起始期细胞活力最高。茄子悬浮细胞在MS＋NAA（0.4 mg/L）＋6-BA（0.2 mg/L）液体培养基上生长良好,其分裂指数最大达4.1%。[结论]茄子悬浮细胞培养体系为茄子生物技术研究提供了一条途径,可应用该体系进行遗传转化等方面的研究。     

人参胚愈伤组织诱导和悬浮培养的研究

[目的]建立一种从人参胚诱导愈伤组织并进行悬浮培养的方法,考察这种悬浮细胞的生长和人参皂苷积累情况。[方法]以人参胚为外植体,在添加了2,4-D3mg/L、NAA2mg/L和6-BA0.5mg/L的MS培养基上诱导愈伤组织。选取经8次继代培养的松散的愈伤组织在含有同样激素的液体培养基中进行悬浮培养。继代悬浮培养5次后测定悬浮细胞生长曲线,用高效液相色谱（HPLC）技术分析细胞中所含的人参皂苷。[结果]有活性的人参胚愈伤组织的诱导率为100%。用这种愈伤组织建立的悬浮培养体系生物量在21d内可增加1.5倍,悬浮培养物至少含有6种人参皂苷,其中Rb1、Rg和Re的含量较高,分别为细胞干重的0.44%、0.35%和0.37%。[结论]由人参胚诱导的愈伤细胞进行悬浮培养比较容易,生长良好,含有较丰富的人参皂苷。     

豆腐柴愈伤组织诱导及细胞悬浮培养

为探究适宜豆腐柴(Premna microphylla Turcz)细胞悬浮培养条件,以豆腐柴叶片为材料,进行了愈伤组织的诱导、继代培养、愈伤组织分散、悬浮培养的研究,建立了摇瓶悬浮培养体系。结果表明,豆腐柴叶片诱导得到的愈伤组织形态各异,其中诱导最适合悬浮培养的松散型胚性愈伤组织的培养基为MS+0.4 mg/L 2,4-D+0.4 mg/L NAA+3%蔗糖+0.8%琼脂。通过纤维素酶和果胶酶分散愈伤组织块可以得到较好的分散细胞系,最适合悬浮细胞生长的培养基条件为MS+0.4 mg/L 2,4-D+0.8 mg/L KT+3%蔗糖,其悬浮培养细胞鲜重增加量平均每7 d可达6.46倍,暗培养相对更适合细胞的增殖。经最佳培养条件下培养21 d的豆腐柴悬浮细胞中果胶和蛋白质平均含量达6.57%和0.12%,远低于豆腐柴天然叶片中的含量。     

海巴戟天愈伤组织诱导及细胞悬浮培养试验

以海巴戟天叶脉作为外植体,在B5 培养基上诱导出淡黄色、疏松愈伤组织,通过增殖后接种到液体培 养基中,建立细胞悬浮培养体系,并对影响细胞悬浮培养的培养基种类、接种量、pH 值、蔗糖含量等因素进行了研 究。结果表明院B5 + 1 mg/L 2,4-D + 0.1 mg/L 6-BA 能诱导出淡黄色、质地疏松的愈伤组织;较佳愈伤组织增殖培养 基为B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT;细胞在B5 + 2 mg/L NAA + 0.2 mg/L KT 培养基中悬浮培养,接种量60 g/L（细 胞鲜重）、蔗糖4%、pH 值5.8、100 r/min、27益下暗培养,海巴戟天悬浮细胞比生长速率为0.0836 d-1,总蒽醌含量 367.8 mg/L,培养周期27~30 d。     

胡杨悬浮细胞系的建立

[目的]建立快速稳定生长的胡杨(Populus euphratica Oliver)细胞悬浮系,为进一步制备胡杨原生质体及林木抗旱耐盐体细胞杂交育种研究奠定基础.[方法]以胡杨胚性愈伤组织为材料,建立胡杨悬浮细胞系,利用正交试验法优化悬浮细胞系的培养条件,在优化培养条件下测定细胞的生长特性.[结果]以胡杨胚性愈伤组织成功地建立了胡杨悬浮细胞系,正交优化试验表明:MB+0.1 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L 6-BA+50 g/L蔗糖+300mg/L CH+146 mg/L Gln为最优培养基组合,接种量为30 g(FW)/L时,干重增长速率最高,达 2.44 g/(L·d).胡杨悬浮细胞系生长曲线基本呈S形,生长周期为10 d,其中3～7 d为对数生长期.在一个生长周期内,培养液pH变化趋势是先下降,后上升并逐渐趋于平稳.[结论]在上述优化培养条件下,胡杨悬浮细胞系干重增长速率最快,细胞生长状态最佳.     

水曲柳松散型愈伤组织诱导及悬浮培养体系的优化

以水曲柳组培苗的叶片和叶柄为研究材料诱导愈伤组织,通过生长量、接种量、pH值,培养基中碳、氮、磷等因素优化悬浮细胞培养体系。结果表明:以WPM为基本培养基,添加6 mg/L TDZ+5 mg/L 6-BA时,对水曲柳叶柄的愈伤组织诱导率最高,达到90.91%;在只添加6 mg/L TDZ时,叶片的愈伤组织诱导率最高为87.5%。在WPM+0.3 mg/L TDZ+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L IBA的培养基中,可以诱导出松散型的愈伤组织,悬浮培养时细胞的生长周期为18 d。在3%的蔗糖浓度下,细胞增长量最高,一个生长周期内鲜质量增加了400%。氮磷浓度超过正常水平不利于细胞的生长。最终获得了能够长期继代培养水曲柳单细胞和小细胞团的悬浮培养体系。     

盐浓度、碳源和磷酸盐浓度对东北刺人参不定根悬浮培养的影响

[目的]探讨东北刺人参不定根悬浮培养的最适条件,为大量培养提供依据。[方法]以东北刺人参不定根为材料,研究在悬浮培养中盐、碳源以及氮源对其增殖生长的影响。[结果]当盐浓度为正常MS时,不定根增殖系数最高,浓度高抑制了生长,不定根在蔗糖和白糖长势较好,最适合的磷源浓度为正常MS培养基中固有的浓度。[结论]在正常的MS培养基中添加蔗糖或白糖以及正常MS培养基中的磷酸盐最适合东北刺人参不定根的增殖生长。     

一株降解木聚糖真菌的筛选及其发酵条件优化

[目的]从自然界中筛选出具有木聚糖酶活力的菌株,为今后降解农作物秸秆提供材料。[方法]以木聚糖为唯一碳源,从土壤中筛选能够降解木聚糖的菌株,并对其进行鉴定和发酵条件优化。[结果]从土壤中筛选出一株能够降解木聚糖的菌株,综合菌落、菌体形态特征和18S rRNA序列分析,初步鉴定该菌株为土曲霉(Aspergillus terreus thom.)GY-1。单因素试验研究表明,菌株GY-1最佳碳源为蔗糖,Mg2+能提高其木聚糖酶活力,最佳氮源为硝酸铵,最适温度为30℃,最适pH为6.0,该菌在培养52 h时木聚糖酶活力最高,为880.11 U/ml。L16(45)正交试验结果表明,GY-1的接种量以及培养基中蔗糖、Mg2+和硝酸铵的添加量对其木聚糖酶活力均有显著影响,GY-1菌株的最优发酵条件为:50 ml基础发酵培养基中,接种量2%,蔗糖1 g,硝酸铵0.03 g,Mg2+0.004 mol。[结论]该研究首次报道了土曲霉具有木聚糖酶活力,为研究土曲霉降解木聚糖提供了一定的试验依据。     

铁皮石斛种子液体悬浮培养的研究

[目的]研究铁皮石斛种子的液体悬浮培养方法。[方法]以MS为基础培养基,设计了不同浓度的基础培养基、激素、天然附加物、pH、蔗糖等5个影响因子的15种培养液配方,筛选出铁皮石斛最适的液体培养条件。[结果]适中的无机盐浓度,NAA、较低的pH值、较高的蔗糖浓度以及适量的土豆汁都有利于铁皮石斛种子的萌发;试验优选出的相对适合种子萌发的培养基为1/2MS+0.5 mg/LNAA+80 g/L土豆汁+45 g/L蔗糖。[结论]筛选出了相对较合适的培养基配方,为铁皮石斛栽培种植提供了理论依据。     

文冠果细胞悬浮培养技术研究

[目的]建立文冠果体细胞胚胎发生和快速成苗的悬浮培养体系,为文冠果的产业化和规模化发展提供参考。[方法]以文冠果新旧种子为材料,诱导体胚发生,进行文冠果细胞悬浮培养。[结果]适合胚性愈伤诱导的最佳培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L＋3％蔗糖;适合胚性愈伤组织不定芽诱导培养的最佳诱导培养基为MS＋6一BA1．0mg／L．4-NAA1．0mg／L＋3％蔗糖,且萌芽率最高;适合单细胞团再生植株培养的最佳培养基为MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．2mg／L＋3％蔗糖。[结论]NAA和2,4-D混合使用有利于胚性愈伤组织的形成;一定浓度的NAA对文冠果愈伤组织萌芽培养有较大的促进作用。     

珠芽魔芋不同外植体诱导愈伤组织研究初报

[目的]研究珠芽魔芋的快速繁殖技术以扩大珠芽魔芋的种植规模。[方法]以珠芽魔芋的珠芽、球茎、叶片、叶脉和叶柄为外植体,以MS为基本培养基,添加不同浓度的6-BA和NAA,研究不同的外植体及接种方式和不同的激素对诱导愈伤组织的影响。[结果]5种外植体中以带叶叶脉的诱导率最高(92%)。外植体接种方式对愈伤组织的形成有一定影响,水平接种有利于快速获得大量愈伤组织,背接方式获得的愈伤诱导率远远高于竖插和正接方式的。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L的培养基能快速诱导出质量较高的愈伤组织。[结论]珠芽魔芋带有叶片的叶脉是诱导愈伤组织的最佳外植体,且以叶背水平与培养基接触效果比较理想,具有分化时间短、速度快的特点。     

不同培养基对三七花粉愈伤组织皂甙含量的影响

[目的]探讨不同培养基上三七花粉愈伤组织培养过程中总皂甙含量的变化情况。[方法]以MS培养基为基本培养基,添加不同的激素(IAA、NAA、KT、6-BA、GA2、,4-D、HL)和营养物质(蔗糖、琼脂)配制成5种不同的培养基,研究不同培养基对三七花粉愈伤组织中皂甙含量的影响。[结果]不同培养基培养的三七花粉愈伤组织中总皂甙的含量不同,5种培养基中总皂甙含量最高的为3.45%,最低的为0.02%,两者相差172.5倍。[结论]培养基中添加2,4-D有可能会促进三七花粉愈伤组织中皂甙的合成,增加总皂甙含量。     

自然发酵酸菜中乳酸菌的分离鉴定及其生理特性研究

[目的]探讨自然发酵酸菜中乳酸菌的生理特性。[方法]从自然发酵的酸菜中分离出19株菌株,从中筛选出了4株产酸能力较强的菌株对其进行鉴定并对其生理特性进行研究。[结果]4株产酸能力较强的乳酸菌经鉴定分别为Lactobacillus plantnmm、Lactobaci Uusbrevis、Lactobacillus conllinocides和Lactobacillus curuatus。培养基初始pH值对菌株的影响较大,适于菌株生长的pH值在6—8。其中pH值对菌株C和D的影响最大,pH值低于4的条件下基本不能生长。菌株A产酸较快,以5％接种量接种,发酵24h后pH值即可达到3．7左右,其耐酸性较好,DH值4左右仍有较高的OD值,但受培养基中盐浓度影响最明显,在盐浓度0～4％时OD值迅速下降。菌株D的耐盐性最好,盐浓度在8％左右仍能生长。[结论J该研究为泡菜的品质研究和产业化发展奠定了基础。     

不同培养基和泡水时间处理对油茶花粉萌发率的影响

[目的]研究不同处理方式对油茶（Camellia oleifera）花粉萌发率的影响。[方法]油茶品种为望漠油茶和岑溪软枝油茶。共设不同泡水时间和培养基处理。其中,泡水时间分别为0、10、20、30 m in,培养基分别为5%蔗糖＋100 mg/L硼酸＋3%琼脂、10%蔗糖＋100mg/L硼酸＋3%琼脂和20%蔗糖＋100 mg/L硼酸＋3%琼脂。[结果]在不泡水的情况下,望漠油茶花粉萌发最佳培养基是5%蔗糖＋100 mg/L硼酸＋3%琼脂,其花粉的萌发率为80.4%;岑溪软枝油茶花粉萌发的最佳培养基是10%蔗糖＋100 mg/L硼酸＋3%琼脂,其花粉的萌发率为88.5%。在采用相同培养基时,对油茶花粉泡水10~30 m in,花粉的平均萌发率仅为6.3%,最高萌发率为17.9%。[结论]该研究说明泡水对油茶花粉的生命力有极大损害。因此,在油茶人工辅助授粉中不宜采用水粉喷雾法。     

茶新菇液体发酵培养基优化研究

[目的]为了获得培养茶新菇的最优碳源、氮源、无机盐配比和最适培养条件。[方法]通过对茶新菇菌的液体深层发酵培养基组分中的碳源、氮源、无机盐的种类进行选择性试验分析,寻找茶新菇液体发酵培养基的最佳组合。[结果]单因子试验证明最优碳源为蔗糖、最优氮源为蛋白胨、最优无机盐为KH2PO4;其中碳源浓度对菌丝体产量的影响最大,其次是氮源,最小是无机盐,组分配方的最佳组合是:蔗糖3%、蛋白胨1%、KH2PO40.10%,最适培养条件为25℃、转速150 r/min、接种量5%、摇床振荡培养4 d。[结论]在最优组分配比和最适培养条件下,茶薪菇菌丝体生物量最高,该研究为其高效生产提供了定量的理论数据。