生猪乙型脑炎抗体消长规律及蚊子携带乙脑病毒调查

为探寻猪场仔猪乙型脑炎抗体消长与蚊子携带乙型脑炎病毒的之间的关系,4月份选取一批约15日龄仔猪共24头,每隔20 d采血1次,至7月共采血6次,用间接ELISA方法检测血清乙型脑炎抗体,且不同时间在跟踪猪舍共捕获约3720只蚊子,用RT-PCR方法鉴定乙型脑炎病毒核酸;结果表明,该批猪乙型脑炎抗体阳性率总体呈现先下降后升高规律,阳性率先后为83.3%、66.7%、41.6%、25%、50%、91.6%,生猪体内母源抗体水平在75日龄(6月20日)达到最低,阳性率降至25%,然后呈现明显的上升趋势,115日龄(7月30日)检测阳性率高达91.6%;37份蚊子样品,JEV核酸阳性样品16份,阳性率高达43.2%,其中7月份所采集14份蚊子样品检出7份,乙型脑类病毒(JEV)阳性检出率最高达50%,表明在乙型脑炎流行季节,受蚊子携带病毒及其叮咬影响,当仔猪JEV抗体下降最低时JEV易感,后期感染抗体升高。     

乙型脑炎重组伪狂犬病病毒TK-/gG-/NS+1的安全性及免疫性

用含有日本乙型脑炎病毒 (SA14 - 14 - 2株 )非结构蛋白 NS1基因的重组伪狂犬病病毒 TK- / g G- / NS 1 免疫BAL B/ c小鼠和断奶仔猪。结果表明 ,该重组病毒对 BAL B/ c小鼠和断奶仔猪是安全的 ,免疫的 BAL B/ c小鼠能抵抗伪狂犬病病毒 (PRV )强毒 (Ea株 )的致死性攻击 ,免疫的断奶仔猪能产生乙型脑炎病毒 (JEV)特异性抗体和 JEV特异性 CTL 活性。     

近年广西部分猪场蚊子携带猪乙型脑炎病毒初步检测调查

为进一步了解近年广西猪场蚊媒携带乙型脑炎病毒(JEV)情况,采用套式RT-PCR(RT-nPCR)检测方法,于2016年—2019年间对猪乙型脑炎(JE)确诊阳性病例的部分猪场进行蚊子携带JEV情况初步检测调查。对抽选16个有JE阳性病例的猪场捕捉的蚊子进行JEV检测,结果均为阳性。表明广西猪JE确诊阳性病例猪场的蚊子携带JEV的几率很高。     

家畜传染病学分会第十三次学术研讨会学术报告之四近年来我国流行性乙型脑炎研究进展

流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis Virus,JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病.多种动物易感,蚊是JEV的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界最重要的贮存和增殖宿主,且可引起仔猪脑炎和种猪繁殖障碍,给养猪业造成巨大经济损失.     

云南省南部地区蚊携带乙型脑炎病毒的检测和遗传进化分析

为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%,其中思茅区和宁洱县蚊阳性率最高,均为25.00%;扩增的5条完整JEV E基因序列与2009年分离的JEV老挝株亲缘关系最近,同源性为97.3%~98.7%,均属于基因I型;5条E基因序列(YN2016-1/2/3/4/5)在1 323位核苷酸位点首次出现C碱基替换,且YN2016-1在第340位氨基酸位点首次出现丙氨酸替换。结果表明:云南省南部地区蚊JEV的携带率较高,尤其是思茅区和宁洱县;蚊携带的JEV出现了核苷酸和氨基酸变异,应注意对其加强监测。     

家畜传染病学分会第十三次学术研讨会学术报告之四 近年来我国流行性乙型脑炎研究进展

流行性乙型脑炎又称日本乙型脑炎,简称乙脑,是由日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis Virus,JEV)引起的一种蚊媒性人兽共患传染病。多种动物易感,蚊是JEV的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界最重要的贮存和增殖宿主,且可引起仔猪脑炎和种猪繁殖障碍,给养猪业造成巨大经济损失。人对JEV普遍易感,但大多数为隐性感染,少数青少年及儿童感染后发生病毒性脑炎,病死率高。     

抗乙型脑炎病毒E蛋白单克隆抗体5D4重链可变区基因的克隆及序列分析

流行性乙型脑炎(JE)简称乙脑,是由乙型脑炎病毒引起的一种重要蚊媒性人兽共患传染病.多种动物易感,蚊是JEV 的主要传播媒介,猪是该病毒在自然界中最重要的贮存与增殖宿主,母猪感染可引起繁殖障碍,给养猪业造成巨大的经济损失.JEV主要在亚洲流行,而最近发现在南半球也有报道,这说明流行性乙型脑炎可能在世界范围内威胁着人类健康[1].JEV属黄病毒科黄病毒属,为单股正链、有囊膜的RNA病毒.     

猪乙型脑炎的诊断与防治

乙型脑炎(Japanese Encephalitis,JE),由乙型脑炎病毒(Japanese Encephalitis Virus,JEV)引起的流行性乙型脑炎,简称乙脑,是一种人与动物共患的蚊媒病毒性疾病。日本脑炎病毒又称乙型脑炎病毒,乙脑病毒在分类上属于黄病毒科(Flayiviridae)黄病毒属(Flavivirus)成员,乙型脑炎病毒基因为单股正链RNA,病毒颗粒呈球形,有包膜,直径40～60nm,病毒粒子呈20面体对称。该病最早在1870     

春天中小规模养猪场预防猪日本乙型脑炎

猪乙型脑炎又称日本乙型脑炎,是由乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus,JEV）引起的一种人畜共患传染病。此病与蚊子的孳生有密切关系,进入春天后,天气逐渐变暖,各种蚊子（库蚊、伊蚊等）开始大量繁殖。蚊子吸食患乙型脑炎病猪的血液后,可以终生带毒,并能带毒越冬,成为次年的传染源。     

珠江上游地区蚊虫乙型脑炎病毒核酸检测及PrM和E基因序列分析

试验旨在了解珠江上游地区乙型脑炎病毒（JEV）主要传播媒介蚊虫的种类、分布及携带JEV基因型和分子特征。2013年7月在珠江上游地区师宗县采集蚊虫和库蠓标本,并对蚊虫进行分类鉴定;同时采用黄病毒属引物对采集到的蚊虫和库蠓标本进行检测,阳性标本用JEV PrM和E基因特异引物进行扩增、测序,然后采用生物信息学软件进行序列分析。在4个采集点共采集蚊虫3 705只,分别属于库蚊、按蚊、伊蚊和阿蚊4个属的7种蚊虫,牛圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,羊圈以中华按蚊、骚扰阿蚊为优势蚊种,猪圈以三带喙库蚊、中华按蚊和骚扰阿蚊为优势蚊种。采用JEV PrM和E基因特异引物对采集到蚊虫和库蠓标本分162批进行扩增、测序,采用生物信息学软件进行序列分析。结果显示,4株蚊虫携带的病毒均为基因Ⅰ型JEV,与疫苗株SA14-14-2 E蛋白存在15个氨基酸差异位点,在8个影响病毒毒力的重要位点上未发生突变。以上结果提示珠江上游地区存在多种蚊虫种类,三带喙库蚊和中华按蚊是该地区的优势蚊种,三带喙库蚊是当地JEV的主要传播媒介,在当地的媒介中存在基因Ⅰ型JEV流行,而流行株的毒力并未降低。     

Nucleotide Detection of Mosquito Japanese Encephalitis Virus and Sequence Analysis of PrM and E Genes in Upper Pearl River Region

This experiment was conducted to understand mosquito species, distribution of the main vector of Japanese encephalitis virus (JEV), JEV genotype and molecular characteristics in upper Pearl River region. We collected mosquito and Culicoides specimen in Shizong county, upper Pearl River region in July 2013, and these specimens were classified and identified. Meanwhile, JEV nucleotide were detected using PrM and E genes specific primers in 162 pools of mosquito and Culicoides specimen, and the positive specimens were sequencd and analyzed by bioinformatics software. Total 3 705 mosquitoes were collected from 4 collection spots, and the mosquitoes belong to 7 species in 4 generas: Culex, Anopheles, Aedes and Armigeres. In cattle pens, Anopheles Sinensis and Armigeres subalbatus were the dominant mosquito species. In sheep pens, Anopheles Sinensis and Armigeres subalbatus were the dominant mosquito species. And in pig pens, Culex tritaeniorhynchus, Anopheles Sinensis and Armigeres subalbatus were the dominant mosquito species. 4 of 162 pools mosquito and Culicoides were positive detecting by using PrM and E genes specific primers. Sequence analysis of JEV PrM and E genes results showed that 4 strains virus from Culex tritaeniorhynchus samples belonged to genotype Ⅰ JEV, and existing 15 amino acid difference sites between vaccine strain SA14-14-2 in the E gene protein, and 8 important sites which affected virus virulence did not mutant. These results suggested that there were many mosquito species in upper Pearl River region, and Culex tritaeniorhynchus, Anopheles Sinensis were dominant mosquito species in this region, and Culex tritaeniorhynchus was the main media of JEV in local region, genotypeⅠ JEV was popular in local media, and virulence of the pandemic strain did not reduce.     

Recent progress in West Nile virus diagnosis and vaccination

ABSTRACT: West Nile virus (WNV) is a positive-stranded RNA virus belonging to the Flaviviridae family, a large family with 3 main genera (flavivirus, hepacivirus and pestivirus). Among these viruses, there are several globally relevant human pathogens including the mosquito-borne dengue virus (DENV), yellow fever virus (YFV), Japanese encephalitis virus (JEV) and West Nile virus (WNV), as well as tick-borne viruses such as tick-borne encephalitis virus (TBEV). Since the mid-1990s, outbreaks of WN fever and encephalitis have occurred throughout the world and WNV is now endemic in Africa, Asia, Australia, the Middle East, Europe and the Unites States. This review describes the molecular virology, epidemiology, pathogenesis, and highlights recent progress regarding diagnosis and vaccination against WNV infections.     

日本乙誓脑炎病毒NS1基因及其疫苗的研究进展

日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患传染病。乙型脑炎病毒的三种糖基化蛋白PrM、E和NS1是其主要免疫保护性抗原,其中PrM和E蛋白是日本乙型脑炎病毒的结构蛋白,其结构和相关疫苗研究的报道较多。NS1蛋白是日本乙型脑炎病毒的非结构蛋白,其主要参与病毒复制的早期阶段,推测可能参与病毒组装和释放。可诱导补体依赖性溶细胞反应,不能产生中和抗体,能诱发机体在非中和性抗体存在的情况下产生保护性免疫。在接种乙脑病毒的细胞的细胞内、细胞表面及上清液中均含有大量的NS1蛋白。对小鼠接种NS1蛋白或NS1蛋白特异性抗体,均能让小鼠产生对乙脑病毒感染的保护性免疫作用。本文主要就乙型脑炎病毒非结构基因NS1及其免疫疫苗的研究进展进行综述,为其更进一步深入研究IEV NS1基因及其相关疫苗奠定基础。     

乙脑病毒非结构蛋白NS1的原核表达及重组蛋白间接ELISA方法的初步建立

克隆表达乙脑病毒非结构蛋白NS1,并以其作为包被抗原,建立间接ELISA诊断方法。用此方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)及猪圆环病毒(PCV)阳性血清各3份,以及33份健康非免疫仔猪血清和205份乙型脑炎灭活疫苗免疫的猪血清,评价NS1-ELISA方法的特异性。取54份乙脑病毒感染的猪血清进行NS1-ELISA检测,评价该方法的敏感性。NS1-ELISA检测的特异性为95%,敏感性达90.7%。与商品化试剂盒比较,其符合率达到96.0%。在重复性试验中,NS1-ELISA检测方法重复性较好。本试验为进一步研究不同感染时期NS1抗体水平的差异奠定基础。     

猪日本脑炎DNA疫苗的构建与鉴定

为开发猪日本脑炎新型疫苗,采用PCR方法扩增日本脑炎病毒WHe株prME和NS1基因,并将其分别克隆至DNA疫苗载体pVAX1,分别用酶切和测序分析进行鉴定。结果表明prME和NS1基因大小分别为2.1kb和1.1kb,酶切和测序结果表明,猪日本脑炎DNA疫苗pVAX1-prME和pVAX1-NS1构建成功,为进一步免疫试验奠定了基础。     

稳定表达乙型脑炎病毒NS1蛋白细胞系的建立

为建立稳定表达乙型脑炎病毒(JEV) NS1蛋白的真核细胞系,本研究将编码JEV NS1蛋白的人工合成基因克隆到真核表达载体pCAGG-TK-neo中,构建了重组质粒pCAGG-opti-NS1.重组质粒经脂质体转染RK-13细胞,以含G418的选择性培养基选择培养,经细胞克隆纯化,以间接免疫荧光试验(IEA)筛选表达目的基因的细胞.结果表明,转染的RK-13细胞经G418加压及IFA筛选后,获得表达JEV NS1蛋白的阳性RK-13细胞系.经RT-PCR、western blot和IFA鉴定,该细胞系在传代至第15代后仍然可以稳定表达NS1蛋白.本实验获得了能够稳定表达JEV NS1蛋白的细胞系,为进一步开展JEV相关的研究奠定了基础.     

乙型脑炎病毒NS1蛋白的可溶性表达与抗原性分析

为获得可溶性表达的乙型脑炎病毒(JEV)NS1蛋白,将编码JEV SA14-14-2株NS1蛋白基因克隆至原核表达载体pMAL-c5X中,构建重组融合表达质粒pc5X-NS1;用重组质粒转化宿主菌ER2523后,经IPTG诱导得到可溶性的融合蛋白MBP-NS1;优化诱导表达条件,于28℃、0.3 mmol/L IPTG诱导4 h;最后融合蛋白经直链淀粉树脂柱纯化。结果表明:重组融合蛋白MBP-NS1具有良好的抗原性和特异性。     

日本脑炎病毒NS1基因在大肠杆菌中的高效表达

提取日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2的基因组RNA,用RT-PCR扩增其NS1基因cDNA,将其克隆到原核表达载体pET-30b(+)中,转化大肠杆菌BL-21(DE3),经IPTG诱导,NS1基因获得高效表达.SDS-PAGE分析显示,表达的融合蛋白表观相对分子质量约为46 000,重组NS1蛋白占菌体总蛋白的30.8%.Western blotting分析表明,重组蛋白具有良好的免疫原性.     

检测猪乙型脑炎病毒抗体间接ELISA方法的建立与应用

以乙型脑炎病毒(JEV)弱毒疫苗株作为诊断抗原,对ELISA反应条件进行优化,初步建立了检测猪乙型脑炎病毒血清抗体的间接ELISA方法。应用该法检测从江苏、安徽、山东、浙江4省部分地区收集到的1089份血样,对华东地区猪乙型脑炎血清流行病学进行初步调查。结果JEV抗体阳性率为68.2%,其中,种猪JEV抗体阳性率为82.1%,商品猪JEV抗体阳性率为62.6%。从中随机抽取135份血样与国产商品化试剂盒进行比较,间接ELISA方法的特异性和敏感性分别为92%和96.4%,2种方法的符合率为95.6%;与NS1蛋白包被建立的ELISA比较,两者的符合率为97.7%;同时,本法的阳性检出率显著高于临床普遍使用的乳胶凝集试验结果。由此表明,本试验建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性和特异性,适于大规模猪乙型脑炎血清流行病学调查。