寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。     

早稻-荸荠种植模式

荸荠,俗称马蹄,属莎草科一年生草本植物。它生长于浅泥中,茎秆丛生,圆柱状,直立。其食用部分为地下球茎,可鲜食,亦可加工成罐头或淀粉。近年来,益阳市赫山区千家洲乡根据当地农民有种植荸荠的习惯,大力推广早稻-荸荠种植模式,促进农民增产增收。2003年全乡种植荸荠267公顷,年产     

云南省南部地区蚊携带乙型脑炎病毒的检测和遗传进化分析

为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%,其中思茅区和宁洱县蚊阳性率最高,均为25.00%;扩增的5条完整JEV E基因序列与2009年分离的JEV老挝株亲缘关系最近,同源性为97.3%~98.7%,均属于基因I型;5条E基因序列(YN2016-1/2/3/4/5)在1 323位核苷酸位点首次出现C碱基替换,且YN2016-1在第340位氨基酸位点首次出现丙氨酸替换。结果表明:云南省南部地区蚊JEV的携带率较高,尤其是思茅区和宁洱县;蚊携带的JEV出现了核苷酸和氨基酸变异,应注意对其加强监测。     

东北地区3株猪细小病毒7型毒株基因组测定及遗传进化分析

从东北地区采集的150份猪肺脏样品中,检测出3株猪细小病毒毒株。根据PPV7标准株NCBI登录号KU563733设计3对引物,对3个病毒株的基因片段进行扩增测序,将测序结果依次进行拼接,获得3个病毒株的NS1和CP基因序列,然后进行序列的同源性比对及进化树分析。结果显示:3个毒株的NS1基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为94.4%～95.2%、94.1%～95.1%和93.5%～94.3%;CP基因序列与经典PPV7毒株的同源性分别为89.6%～91.8%、89.8%～92.0%和89.6%～91.7%。通过进化树比对分析,确认3株PPV毒株为PPV7亚型。通过对其他病毒进行检测,发现PPV7与PCV2、PPV2的混合感染率较高。该分析结果为我国东北地区猪病防控提供了依据。     

PRRSV YN-LQ株的全基因序列测定及遗传进化分析

从云南省某发病猪场分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将该毒株命名为YN-LQ株。为了研究该毒株的遗传变异及分子生物学特征,根据PRRSV标准毒株NCBI登录号KC422728设计10对引物,对YN-LQ株全基因进行扩增及测序,将测序结果依次拼接获得YN-LQ株的全基因序列,并进行序列的比对分析。结果显示:PRRSV YN-LQ株基因组全长为15 320bp;将YN-LQ株与经典PRRSV病毒株Nsp2、GP5及全基因进行比对分析,发现YN-LQ株与JXA1的同源性最高。Nsp2基因序列同源性为99.0%,其氨基酸序列有15个位点发生了改变;GP5基因序列同源性为97.7%,其氨基酸序列有9个位点发生了改变;全基因的同源性为98.7%。证实该毒株为JXA1变异株,为深入研究该病毒株的遗传与变异及其与生物学特性的关系奠定了基础。     

气肿疽梭菌检测方法概述

气肿疽(Clostridium chauvoei infection)病原体为气肿疽梭菌,是一种发生于反刍动物的急性、热性、败血性传染病。常见的典型症状为发病动物肌肉丰满部位发生炎性、气性肿胀,触压有捻发音,该病的流行有一定的地方性、季节性,多发生在潮湿的山谷、牧场,且在天气炎热的多雨季节。近几年常有暴发牛气肿疽的报道,给养殖业的发展带来了巨大的冲击和经济损失,同时也逐渐地威胁到畜牧生产和人类的安全。国内关于该病的研究多数为病例报道,对于该病的详细研究和综述却是少之又少,论文参考国内外相关文献,从方法、原理、优缺点等多个方面阐述气肿疽的检测方法,以期为该病的诊断提供参考。     

植物源麻醉剂在鱼类麻醉镇静中的作用研究进展

<正>水产养殖操作经常将鱼类暴露于各种应激源,会对鱼类的生存、生长和动物福利产生负面影响。麻醉可诱导意识缺失,亦可减轻与养殖操作相关的应激和疼痛[1-2]。鱼类麻醉可分为物理麻醉和药物麻醉,物理麻醉以低温、电击较为常见,与药物麻醉相比,物理麻醉操作繁琐且对操作人员要求较高,因此,目前生产和科研上,仍以药物麻醉为主。鱼用药物麻醉剂可分为天然类和化学合成类,化学合成类麻醉剂主要以间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐、美托咪酯、利多卡因、苯佐卡因等为主,     

气肿疽pcDNA3.1-CctA质粒在小鼠体内免疫应答的研究

为了检测pcDNA3. 1-CctA质粒的免疫效果,试验将pcDNA3. 1-CctA质粒转染至Vero细胞,48 h后提取细胞蛋白进行Western-blot检测,正确表达气肿疽梭菌细胞毒素A(CctA)基因后用质粒免疫动物,检测特异性抗体免疫球蛋白G2a(IgG2a)、免疫球蛋白G1(IgG1)、白细胞介素-4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的表达水平。结果表明:pcDNA3. 1-CctA质粒成功在Vero细胞中表达CctA蛋白;pcDNA3. 1-CctA质粒可有效刺激小鼠的体液免疫及细胞免疫应答,能在一定程度上提高机体的细胞免疫水平。     

一例犬胫骨骨折的诊断及髓内针联合外固定支架的治疗

正骨折是骨组织的整体性、连续性由于外力和病理性因素破坏[1],使软组织受到不同程度的伤害[2],如神经血管、肌肉断裂挫伤、皮肤破裂等,但一般以血肿为主[3]。骨折的固定有两种方法,第一种是外固定,第二种是内固定。内固定治疗骨折所需要的手术器材有髓内针、骨螺钉、金属丝和接骨板等,外固定需要硬化绷带、夹板绷带、改良托马斯绷带等,在正常情况下都应使用内固定对骨折进行开放复位治疗。笔者采用联合固定的方法治疗骨折,以使患犬达到快速恢复的目的,为临床     

猪细小病毒7型SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立及临床样品的检测

采用PCR方法扩增猪细小病毒7型(PPV7)衣壳蛋白基因保守区域493 bp,将其克隆到pMD18-T载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒,以其为模板建立用于检测PPV7的SYBR GreenⅠ实时PCR检测方法,并验证其灵敏性、特异性和重复性。结果表明,本试验建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法在2.85×10^1~2.85×10^8拷贝/μL呈良好的线性关系,相关系数为0.995,斜率为4.158,灵敏度可达到2.85×10^1拷贝/μL。该方法对于猪繁殖障碍性传染病常见病原如PRRSV、PCV2和PRV未出现特异性扩增,表明特异性好。所有标准曲线在溶解温度为83.103℃时出现单一的特异峰。使用本方法检测了2017年山东地区7家养猪场216份临床样品,总阳性率为12.5%。