新城疫单抗ELISA试剂盒监测免疫鸡群中新城疫强毒

应用新城疫（ND）单抗ELISA试剂盒对2个免疫鸡群中ND强毒感染情况及个体感染强毒后排毒动态跟踪监测，并平等测定其HI抗体效价。共采集泄殖腔棉拭子和血液对应样品2317份。结果表明：HI效价2－14之间的个体均可检出强毒，其中HI效价在6以下和11以上的个体强毒检出率都较高。HI效价在6以上的个体仍角感染强毒，强毒感染导致HI抗体水平上升，且感染前低者上升速度较快，幅度亦较大；并且发现排毒个体的高水平抗体是强毒感染所致。个体感染强毒后排毒过程可长达3周，而且感染前抗体水平低者排毒时间相对较长。强毒一旦侵入鸡群便可在群内巡回传播，长期维持下来。     

免疫鸡群中新城疫强毒感染流行趋势

新城疫 ( ND)仍是目前我国分布最广、危害最严重的禽病之一 [1] 。 ND的临诊表现差异很大 ,从不明显感染到高度致死不等 ,其严重程度主要取决于感染病毒的毒力和鸡群的免疫状态[2 ] 。虽然国内几乎所有商业鸡群均需多次使用 ND疫苗 ,但免疫鸡群仍屡屡发生 ND。因此 ,控制和减少免疫鸡群中 ND强毒感染与传播成为我国鸡病防制工作中亟待解决的问题 [3 ]。本试验运用 ND单抗酶联免疫试剂盒作为 ND流行病学调查手段 ,对华东地区部分免疫鸡群中 ND强毒感染进行监测 ,结合测定个体 HI抗体 ,探讨免疫鸡群中 ND强毒感染流行原因和趋势 ,为制…     

免疫鸡群感染新城疫强毒后排毒及其HI抗体消长

给两组二次新城疫(ND)疫苗免疫的鸡群分别于40日龄、60日龄经胸肌注射强毒株F48E8(剂量为0．25mL),观察排毒和其HI抗体效价。结果表明：鸡在感染强毒后第2天开始排毒,在第3～6天和第11～14天出现两次排毒高峰,整个排毒过程可达3周,其中抗体水平较低者排毒时间相对较长,频率较高;强毒感染初期,个体HI抗体先下降1～3个滴度,然后上升,且感染前低者上升速度较快,幅度亦较大。     

用单抗夹心ELISA自免疫鸡群检测新城疫强毒

本研究用单抗夹心ELISA检测人工感染新城疫病毒(NDY)Muktoswar、B_1、F、LaSota疫苗毒株和F_4~8E_8强毒株鸡的两周内各脏器病毒的动态分布。发现4种疫苗接种鸡的口腔和泄殖腔棉拭样品均查不到病毒抗原。而强毒感染鸡的相同样品均显示阳性,用本法检测从疑有NDV强毒感染的免疫鸡中采集的泄殖腔棉拭样品1312份,共检出阳性样品581份:对206份阳性样品进行平行病毒分离,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有NDV;选择从不同地区阳性样品得到的8个NDV分离物作进一步生物学鉴定,结果均为强毒。本法为ND的确诊、免疫鸡群强毒感染的监测和流行病学研究提供了新的有力手段,将在ND的控制中发挥重要作用。     

新城疫单抗ELISA试剂盒检测鸽新城疫病毒

用新城疫（ND）单抗酶联免疫（ELISA）试剂盒检测23例疑似ND的鸽泄殖腔棉拭样品，7份阳性样品用SPF鸡胚均会离到病毒，该病毒凝集鸡红细胞，并就抗新城疫病毒（NDV）阳性血清所抑制，其中4株病毒的MDT在48－68.6h之间，ICPI为1.55-1.85。试验结果表明所分离的病毒为NDV，亦表明ND单抗ELISA试剂盒能够检出鸽NDV，并可作为鸽群中NDV流行病学调查的有效手段。     

新城疫病毒HI抗体效价与流行株感染排毒之间的相关性

为了分析免疫鸡群中新城疫强毒感染流行的原因,明确抗体效价与流行株感染排毒率之间的关系,本研究以LaSota为抗原制备新城疫灭活疫苗,并以0.02mL和0.4mL的量分别免疫3周龄的SPF鸡10只。免疫后7、14、21d分别测定免疫鸡血清中的抗体HI效价。免疫后21d以基因Ⅶd亚型新城疫流行株JS5/05进行攻毒,攻毒后每天观察试验鸡的临床症状,并于攻毒后3、5、7d采集试验鸡的喉气管与泄殖腔棉拭样品进行病毒分离,结果显示,免疫3周后0.02mL和0.4mL疫苗免疫组鸡的血清HI抗体平均效价分别为5.4log2和8.2log2;0.02mL免疫组在攻毒后的排毒率达到100%,且排毒时间较长,而0.4mL免疫组在攻毒后的排毒率明显降低,且排毒时间较短。上述结果表明新城疫抗体效价与流行株感染排毒率之间存在明显的负相关。     

免疫鸡群新城疫强毒感染及其与HI抗体的相关性研究

为调查新城疫强毒(vNDV)在免疫鸡群中的感染情况及其与抗ND抗体效价的相关性,用自行建立的检测vNDV的荧光定量RT-PCR(RRT-PCR)对采自川、渝两地36个免疫鸡群的360份肛门棉拭子进行检测,同时采血测定其血凝抑制抗体效价.结果共检出5个vNDV 阳性鸡群,每个阳性鸡群检出1例阳性样本,经病毒分离鉴定证实为NDV;36个受检鸡群HI抗体平均效价在4.5～10.1,标准偏差(SD)在0.70～3.19,变异系数在9.5%～44.3%.当SD大于2.0时,vNDV感染鸡群阳性率为50%,6(5/10),当CV大于32%6时,vNDV感染鸡群阳性率为62.5%(5/8);vNDV感染个体HI抗体效价分别为210、29,28,26,23;阳性样本RT-PCR产物经测序分析证实为vNDV F基因序列,发育进化分析显示,2株vNDV属基因Ⅶ型,3株属基因Ⅸ型.研究结果表明,RRT-PCR适合vNDV感染及传播的监测和分子流行病学调查;免疫鸡群是否感染vNDV可能与个体HI抗体水平高低无关,而与群体HI抗体离散度有关,SD和CV值有助于判定鸡群感染vNDV的风险.     

基因Ⅶ型新城疫强毒对樱桃谷鸭的致病性试验

用108ELD50基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)强毒对20只樱桃谷鸭和SPF鸡进行攻毒,同时分别设10只同日龄樱桃谷肉鸭和SPF鸡为空白对照,进行同居感染。试验鸭攻毒后1、4、7和14d取喉头、泄殖腔棉拭和肝、脾、肾等内脏组织进行病毒分离,同时采血进行ND抗体检测。SPF鸡攻毒后5d内100%死亡,对照组9d内100%死亡。试验鸭攻毒组和对照组在14d观察期内无明显临床症状,攻毒后第7天开始部分试验鸭喉头、泄殖腔棉拭和内脏分离到NDV,第14天试验鸭血清NDHI抗体阳性。结果表明NDV强毒感染鸭群后并不引起明显的发病、死亡,但是病毒可以在其体内复制,并通过喉头和泄殖腔排毒,具有重要的流行病学意义。     

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒(NDV),命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSot a后14 d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10 d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9 d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLYO1攻毒组第5 d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSot a活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100%免疫保护,但不能完全抑制基因Ⅶ NDV分离株在体内的复制和排毒。     

基于新城疫病毒V蛋白鉴别鸡群感染与免疫的间接ELISA方法的建立

本研究以新城疫病毒(NDV)V蛋白羧基端结构域(Vc)的重组蛋白为包被抗原,建立了用于检测NDV V蛋白抗体的间接ELISA方法,并采用该方法检测了鸡群免疫或接毒后血清中的V蛋白抗体水平。结果显示:两组不同NDV灭活疫苗组在免疫后的3周内检测结果均为阴性;两组灭活疫苗免疫3周后再人工感染NDV强毒的鸡群,攻毒后第7、14和21 d,NDV阳性率分别为60%、80%、70%和50%、80%、70%;两组不同的NDV弱毒疫苗免疫组鸡群,仅在免疫后第21 d阳性率分别为20%和10%。以上结果表明,NDV疫苗免疫组与强毒感染组的V蛋白抗体阳性率存在明显差异,本方法可在群体水平上区分新城疫疫苗免疫与强毒感染鸡群,为NDV血清学诊断和流行病学调查提供了一种新的检测手段。     

新城疫基因工程疫苗的研究与应用进展

新城疫是当今世界上最严重的家禽传染病之一，特别是对养鸡业可造成重大经济损失，被世界动物卫生组织（OIE）列为必须报告的传染病。新城疫的主要防控手段仍是免疫接种，虽然传统的灭活疫苗和弱毒疫苗在疫病的控制中发挥了巨大作用，但存在着毒力返强、散毒和免疫期短等问题，不利于疫病的控制和消灭。论文论述了国内外应用现代分子生物技术对新城疫亚单位疫苗、重组活载体疫苗、DNA疫苗、新城疫病毒载体疫苗的研究和应用情况，展示了基因工程疫苗良好的应用前景。     

新城疫病毒通用型实时RT-PCR检测方法的建立与应用

采用TaqMan方法,经引物和探针的设计、筛选及反应条件优化,研究了检测活禽和禽产品中新城疫病毒的通用型实时RT-PCR(RRT-PCR)方法。结果显示,对12株分别为速发型、中发型、缓发型和疫苗株新城疫病毒的尿囊液倍比稀释液的检测极限在10-5~10-7之间;建立的方法与常见禽类病毒无交叉反应,特异性良好;在检测人工感染肉鸡的脏器组织、咽喉、泄殖腔拭子中病毒的灵敏度同鸡胚分离试验基本一致;弱毒疫苗免疫鸡群在免疫后14 d,应用本方法不能从咽喉、泄殖腔拭子中检测到病毒;临床样品检测表明,该方法不仅可以检出中强毒力新城疫毒株,也可检出缓发型野毒株和疫苗毒株。     

从自然发病鸡中分离出一株新城疫病毒

应用电镜技术、血清学检查、生物学试验等方法,从未注射过疫苗的某自然发病鸡群分离出一株新城疫病毒。该分离株对１０日龄鸡胚的平均致死时间为１１６小时,静脉接种致病指数为０．０６,其毒力介于新城疫病毒的ＬａＳｏｔａ株与Ｖ４株之间。免疫原性试验结果表明,该分离株具有免疫后无不良反应、免疫后６天开始产生抗体、产生的抗体效价高、对新城疫强毒的攻击能１００％保护等特点,是一株良好的新城疫候选疫苗株     

非典型鸡新城疫的病因研究初报（一）

应用血清学、生物学方法、从我省产蛋量下降、HI抗体在1：128以上的疑似非典型鸡新城疫（CND）病鸡群中分离到1株病毒，经鉴定和致病力测定，明确是1株ND强毒，毒力与F48E9相近，然后采用该株野毒感染不同抗体水平的3批蛋鸡及肉鸡，结果3批蛋鸡均是低抗体滴度组（1：10－1：40）发生了CND症状，感染后6－7天开始产蛋停止，经15－17天后才恢复产蛋，高抗体滴定组（1：80以上）无明显变化，无抗体对照组出现典型鸡新城疫变化，全部死亡；病毒感染后第6、10天监测HI抗体，结果低滴度组第6天达1：80－1：160，第10天达1：160－1：1280。试验结果表明，我们分离到的NDV，既可引起典型的ND，也可引起非典型的ND；高HI抗体蛋鸡产生非典型鸡新城疫的病因之一，是由于存在低抗体鸡群而发生了CND，其高HI抗体有竞争是由于强毒感染后产生的抗体。     

2008年江苏地区基因Ⅶd亚型新城疫病毒遗传变异分析

为了研究基因Ⅶ d亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增.根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,表明分离株中不存在囊膜糖蛋白基因发生重组的NDV;同时,HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势.基因Ⅶd亚型变异株的出现应引起相关领域从业者们的高度重视.     

禽流感病毒和新城疫病毒二联RT-PCR检测方法的建立

参照国内外已发表的禽流感病毒(AIV)和新城疫病毒(NDV)的基因序列及其相关的RT-PCR检测方法,根据禽流感病毒M蛋白基因和新城疫病毒NP基因各设计一套特异性通用引物,扩增目的带分别为600bp和340 bp。通过对相关病毒检测,建立了AIV和NDV通用型二联RT-PCR检测方法。该方法具有快速、敏感、特异等优点,可为AIV和NDV的检测、流行病学调查及疫苗使用等奠定基础。     

鸡新城疫病毒分离株与La Sota株灭活疫苗效力比较试验

用NDV分离株及La Sota株为抗源液，经福尔马林灭活后，与油佐剂混合，分别制成分离株灭活苗、La Sota株灭活苗及分离株与La Sota株二价灭活苗。将这三种灭活疫苗分别免疫SPF鸡后，均获得100%抵抗NDV分离株及F48株强毒攻击的保护力；而用这3种灭活苗与La Sota活苗单独或联合使用，免疫带有ND母源抗体的普通鸡后，3种灭活苗的免疫效力不同，分离株灭活苗与价灭活苗对NDV分离株攻击的免疫保护效力明显优于La Sota灭活苗；灭活苗与活苗同时使用，其免疫效力明显优于单独使用灭活苗或活苗。     

新城疫V_4 C_(30)复合疫苗的制备和免疫研究

将新城疫病毒V4株与克隆_3 0株组成复合疫苗 ,两疫苗株在等浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )条件下不存在明显的相互干扰现象 ,高浓度 ( 1∶10稀释 )V4株可以抑制低浓度 ( 1∶5 0 0稀释 )C30 株致死鸡胚的能力 ,免疫研究表明 ,复合疫苗兼顾了两种疫苗株的优点。     

不同新城疫疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果比较

为探讨不同新城疫（ND）疫苗对贵州三穗麻鸭的免疫效果,选用NDⅠ系活疫苗（CS2株）、Ⅳ系灭活疫苗（LaSota株）和重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）分别对三穗麻鸭进行免疫实验,检测疫苗最小免疫剂量、免疫鸭的抗体滴度和消长规律,以及病毒感染免疫鸭后的排毒情况。结果显示,活疫苗CS2株、灭活疫苗LaSota株、灭活疫苗A-Ⅶ株的最小免疫剂量分别为1.0 mL/只、0.5 mL/只和0.2 mL/只;3种疫苗2次免疫要高于1次免疫产生的抗体滴度,但各免疫组不同免疫次数鸭的抗体滴度均在第60天达到高峰,其中以灭活疫苗A-Ⅶ株1次或2次免疫诱发的抗体滴度最高（分别为7.5log2和8.1log2）,并且抗体持续期长,在免疫后第150天抗体水平仍能达到免疫保护要求;对免疫鸭的排毒检测发现,活疫苗CS2株免疫后的鸭持续排毒,灭活疫苗LaSota株免疫后的鸭排毒量少且时间短,而灭活疫苗A-Ⅶ株免疫后的鸭未检测到排毒。试验结果表明,重组基因Ⅶ型NDV灭活疫苗（A-Ⅶ株）在免疫剂量、免疫次数、免疫鸭的抗体滴度和持续时间,以及抑制免疫鸭排毒方面均明显优于传统ND疫苗。     

新城疫病毒基因组与基因演化

新城疫在世界范围内出现了4次大流行,造成了极大的经济损失和贸易影响。虽然新城疫病毒仅有1个血清型,但不同毒株生物学特性和毒力相差很大。近来,病毒宿主谱扩大,开始感染水禽,造成鹅的大规模发病。经典的新城疫病毒基因组长度为15 186个核苷酸(nt),如La Sota和V4毒株等,而我室报道的鹅源毒株ZJ1全长为15 192 nt。我们对基因组进行比对分析,发现新城疫病毒是在基因组水平上整体演化的。