新城疫单抗ELISA试剂盒检测鸽新城疫病毒

用新城疫（ND）单抗酶联免疫（ELISA）试剂盒检测23例疑似ND的鸽泄殖腔棉拭样品，7份阳性样品用SPF鸡胚均会离到病毒，该病毒凝集鸡红细胞，并就抗新城疫病毒（NDV）阳性血清所抑制，其中4株病毒的MDT在48－68.6h之间，ICPI为1.55-1.85。试验结果表明所分离的病毒为NDV，亦表明ND单抗ELISA试剂盒能够检出鸽NDV，并可作为鸽群中NDV流行病学调查的有效手段。     

基因Ⅶ型新城疫强毒对樱桃谷鸭的致病性试验

用108ELD50基因Ⅶ型新城疫病毒(NDV)强毒对20只樱桃谷鸭和SPF鸡进行攻毒,同时分别设10只同日龄樱桃谷肉鸭和SPF鸡为空白对照,进行同居感染。试验鸭攻毒后1、4、7和14d取喉头、泄殖腔棉拭和肝、脾、肾等内脏组织进行病毒分离,同时采血进行ND抗体检测。SPF鸡攻毒后5d内100%死亡,对照组9d内100%死亡。试验鸭攻毒组和对照组在14d观察期内无明显临床症状,攻毒后第7天开始部分试验鸭喉头、泄殖腔棉拭和内脏分离到NDV,第14天试验鸭血清NDHI抗体阳性。结果表明NDV强毒感染鸭群后并不引起明显的发病、死亡,但是病毒可以在其体内复制,并通过喉头和泄殖腔排毒,具有重要的流行病学意义。     

新城疫单抗酶联免疫试剂盒的完善及其应用

对初步研制的新城疫 (ND)单抗酶联免疫 (EL ISA)试剂盒进行了完善。以 2 .5 m g/ L 的抗 NDV腹水单抗 M2 2 包被酶标板 ,4 % FCS- PBS溶液为阴性对照 ,聚乙二醇 (PEG 10 0 0 0 )浓缩 L a Sota病毒液为阳性对照 ,P/ N≥ 2 .5为临诊样品阳性判定标准 ,对纯化的新城疫病毒 (NDV)蛋白的检出限为 2 μg/ L。用该试剂盒跟踪监测免疫鸡群中个体感染ND强毒后排毒动态 ,并平行测定血凝抑制 (HI)抗体。跟踪采集 2免疫鸡群泄殖腔棉拭和血液一一对应样品 2 317份 ,2实验鸡群棉拭样品 36 30份 ,血液样品 14 4 0份。结果表明 ,HI效价在 2～ 14之间的个体均可检出强毒 ,但 HI在 6以下的个体检出率最高 ,而排毒个体的高水平抗体是强毒感染刺激所致。个体感染强毒后一般排毒 1～ 3周 ,其中 HI抗体水平低者排毒时间相对较长 ;个体在感染后 3～ 6 d和 11～ 14 d出现 2个排毒高峰。强毒一旦侵入鸡群便可在群内巡回传播 ,长期维持下来。 HI抗体在感染初期先下降 ,然后迅速上升 ,且感染前低者上升速度较快 ,幅度亦较大     

Immune protection assay of Newcastle disease live vaccine （LaSota Strain） against a genotype VII NDV isolate

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒（NDV）,命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因VII型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSota后14d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLY01攻毒组第5d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSota活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100％免疫保护,但不能完全抑制基因VIINDV分离株在体内的复制和排毒。     

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒(NDV),命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSot a后14 d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10 d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9 d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLYO1攻毒组第5 d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSot a活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100%免疫保护,但不能完全抑制基因Ⅶ NDV分离株在体内的复制和排毒。     

华东某活禽市场新城疫病毒和低致病性禽流感病毒的初步分离与鉴定

为了解春季活禽市场新城疫病毒(NDV)和低致病性禽流感病毒(LPAIV)的携带情况,2016年3~4月采集华东某活禽市场健康家禽的泄殖腔新鲜棉拭样品100份(鸡源样品40份,鸭源28份,鹅源32份)。以鸡胚接种方法分离病毒,接种后5 d收集鸡胚尿囊液用于血凝试验,共获得7株具有HA活性的病毒,均来源于水禽。采用双重RT-PCR对分离毒株进行鉴定,同时对NDV的F基因和AIV的M基因进行扩增,并对扩增的测序进行分析。结果显示:从样品中分离到NDV 4株,为ClassⅠ系列毒株;分离到AIV 3株,M基因遗传演化分析显示,其中2株病毒与国内流行的H6亚型AIV遗传关系较近,另外1株病毒与国内流行的H9亚型AIV毒株遗传关系较近。     

贵州省鸭源新城疫病毒强毒株的遗传变异分析及致病性研究

为了科学理解家鸭在新城疫病毒(NDV)流行和传播中的作用,对贵州不同地区分离的5株鸭源NDV强毒株进行遗传变异分析以及对鸭和SPF鸡的致病性研究。结果显示:5株NDV分离株均属于基因Ⅶd亚型,其F蛋白裂解位点基序均为112 RRQKRF117,符合强毒株序列特征,与病毒致病性指数测定结果相符;F和HN蛋白中功能性氨基酸位点均高度保守,但在HN蛋白线性表位区有3株发生E347K突变。交叉血凝抑制试验发现分离株与传统疫苗株LaSota的抗原同源性较低(为83.3%~87.0%),而与新型基因Ⅶ型疫苗株A-Ⅶ的抗原同源性较高(为93.5%~100%)。将5株NDV分离株以0.5mL病毒尿囊液原液通过肌肉注射感染鸭后未见明显发病死亡和病理变化,并且除脾外在其他多个组织脏器未能检测到病毒复制;而以106.0 ELD50·0.1mL-1剂量通过滴鼻点眼感染SPF鸡后6d内100%发病死亡,病死鸡表现出新城疫典型的临床症状和病理变化,病毒在多个组织脏器中均能复制且对脾、胸腺和法氏囊等免疫器官损伤严重。另外,SPF鸡攻毒后喉头和泄殖腔棉拭病毒分离率明显高于试验鸭。本研究结果表明,贵州省鸭群中流行的基因Ⅶd亚型NDV强毒株HN蛋白发生E347K突变的变异株呈上升趋势,并与传统疫苗株产生抗原差异;5株鸭源NDV强毒株对鸭和鸡致病性差异显著,虽然对鸭无明显致病性,但鸭感染后可在较长时间内通过喉头或泄殖腔向体外排毒,因此必须采取有效措施防止NDV强毒由鸭群向鸡群的传播。     

白鹭源新城疫病毒的分离与鉴定

从1只患病的白鹭的咽喉、泄殖腔棉拭子中分离到1株病毒,经血凝、血凝抑制试验和RT-PCR法鉴定为新城疫病毒。根据该毒株对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、鸡胚半数感染量的测定和新城疫强弱毒鉴别的RT-PCR检测,表明该分离株为新城疫强毒株。     

应用兼并引物RT-PCR快速检测及鉴别气载鸡新城疫病毒

为了快速检测并鉴别鸡舍内外空气中的新城疫病毒(NDV),应用AGI-30气体收集器在一大型商品肉鸡舍舍内外收集气体,同时采集鸡的气管和泄殖腔拭子,采用兼并引物RT-PCR检测气体样品和拭子中的NDV,并鉴别NDV的毒力;同时分离、纯化气体样品中的NDV,用常规毒力学试验鉴别分离株的毒力.结果RT-PCR检测到舍内2/15的气体样品和4/15的拭子中同时有强毒和弱毒株,3/15气体样品和13/15的拭子只有弱毒,舍外上风向5 m处气体样品检测结果均为阴性,舍外下风向5 m处1/3的样品只有弱毒;其他样品均为阴性;从RT-PCR检测为阳性的样品中分离到3株强毒和4株弱毒株;从RT-PCR检测为阴性的样品中均未分离到NDV.结果表明兼并引物RT-PCR可直接、快速对气体样品进行检测及鉴别诊断.     

两株新疆新城疫强毒株的分离与鉴定

从新疆乌鲁木齐市郊区疑似新城疫的发病鸡场采集了2份病料,处理后接种鸡胚和非免疫鸡分离鉴定病毒,同时检测病毒血凝特性,观察病毒形态并测定病毒致病力。试验结果表明,分离株均能致死鸡胚,非免疫鸡出现典型的鸡新城疫病病理变化;分离毒株均有血凝特性,而且可被新城疫阳性血清所抑制;病毒形态结构与鸡新城疫病毒一致;EID50分别为10-8.0/0.1mL、10-8.6/0.1mL,MDT分别为57.6h、52.8h,ICPI分别为1.875、1.925,IVPI分别为2.39、2.82,均有很强的致病力,符合NDV强毒株的毒力标准。所有结果显示,以上2个分离株均为新城疫强毒力毒株。病毒免疫原性结果显示,2株病毒均有有良好的免疫原性,同源保护率分别为90%、80%。     

鸵鸟新城疫实验病理学研究

用鸡源新城疫(ND)强毒株F48E9和鸵鸟源新城疫强毒株O-XJ99-12,对不同免疫状态下2~4月龄鸵鸟进行动物试验。动物发病后经剖检、组织切片、病毒分离等方法证实:鸵鸟源和鸡源新域疫病毒(NDV)毒株,经静脉和黏膜感染非免疫鸵鸟,均可引起特征性的鸵鸟ND症状和病变,对鸡胚致病力强的NDV毒株,对非免疫鸵鸟的致病力也强;鸵鸟ND的免疫临界点,HI抗体效价最低为5log2。     

新城疫病毒弱毒株对鹅的免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)疫苗株La Sota和NDV基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ为免疫原,分别以活苗和灭活苗的形式免疫2周龄试验鹅,免疫后第7、14天和21天采血分离血清用于抗体效价测定.免疫后3周以基因Ⅶ型强毒分离株JS2-06进行攻毒,攻毒后每天观察各组鹅的发病情况,并于第2、4天和7天分别采集喉气管和泄殖腔棉拭样品,用于病毒的分离.试验结果表明,活疫苗免疫后不能产生有效的免疫应答,而灭活苗免疫鹅对强毒的感染具有较强的抵抗能力,但基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ能更有效抑制鹅体的排毒,其免疫效力明显高于疫苗株La Sota.     

2016—2017年广西4种野生鸟类新城疫病原学检测与遗传进化分析

为研究广西野生鸟类中的新城疫病毒（NDV）感染状况,从4种临床健康鸟类中,采集口咽/泄殖腔棉拭子650份,通过病毒分离、RT-PCR和F基因序列测定,进行NDV感染状况调查和分子特征分析。结果显示：共分离到10株NDV,分离率为1.54%;10株分离株F基因的氨基酸裂解位点基序均为112 R-R-Q-K-R-F 117,符合NDV强毒株的典型特征;分离的10株毒株中,5株来源于斑鸠,3株来源于鸽子,2株来源于鹧鸪,8株为II类NDV基因VI型,2株为XII 型。结果表明,我国野鸟中流行的NDV以II类基因VI型强毒株为主,但已出现了新基因型（基因XII型）。因此,应加大对野鸟NDV监测的力度,防止其将病毒传染给家禽,同时应开展当前疫苗对NDV XII型的免疫效果评估。     

马立克病毒感染对鸡体液免疫的影响

为了验证和探讨马立克病毒(MDV)对肉鸡的免疫抑制作用,同时对比研究MDV疫苗和强毒株对机体免疫力的影响,试验通过人工攻毒MDV,建立MD模型,各组SPF鸡于2日龄注射NDV+H9N2 AIV灭活苗,7日龄时以LaSota株NDV弱毒疫苗饮水免疫,在SPF鸡14,21,28,35,42日龄时,各组无菌采血25份,分离血清,利用血凝/血凝抑制试验研究各组ND和H9N2的体液抗体水平。结果表明:在整个试验周期,疫苗对照组和空白对照组NDV和H9N2 AIV抗体水平差异不显著;攻毒组SPF鸡在21~42日龄时,NDV和H9N2 AIV抗体水平显著或极显著低于对照组。     

鹅源新城疫病毒的分离及生物学特性研究

取山东某地病死鹅的脑和脾脏常规处理,分别接种11日龄SPF鸡胚和16日龄非免疫鹅胚,从死亡胚的尿囊液中分离到毒株,并对分离株进行了血凝性鉴定、毒力鉴定、动物试验以及疫苗保护试验。结果表明:该毒株具有血凝性,为强毒株,血凝性能被新城疫病毒(NDV)阳性血清所抑制,且其他生物学特性与NDV也有很大的相关性,故将其命名为NDVWF216株。用分离的鹅源新城疫病毒WF216株尿囊液制成油乳剂灭活苗和NDV油乳剂灭活苗均可保护鹅和鸡免受鹅源新城疫强毒的攻击。     

新城疫病毒Class Ⅰ与Class Ⅱ毒株交叉血凝抑制试验速分类

Class Ⅰ新城疫病毒(NDV)分离自健康家禽泄殖腔棉拭子,其基因序列与class Ⅱ NDV存在很大差异,为了建立简单快速的NDV分类方法,用SPF鸡制备Class Ⅰ和Class Ⅱ毒株多价抗血清分别与选取的Class Ⅰ和Class Ⅱ代表毒株进行交叉血凝抑制反应.结果表明所有Class Ⅰ毒株比同Class Ⅱ毒株的交叉血凝抑制值高8-64(3-61og2)倍;而Class Ⅱ毒株与Class Ⅱ抗血清的HI效价比同Class Ⅰ毒株的交叉血凝抑制值高2-8(1-31og2)倍,结果与基因分型高度一致,说明可以用交又血凝抑制试验进行初步分类.本研究结果显示,NDV Class Ⅰ弱毒株血凝性与广泛应用的NDV弱毒疫苗株不同,基因序列分析可以部分解释这种差异,另外可能HN蛋白的空间结构也会影响其与血凝素结合的特性.     

实时荧光定量RT-PCR检测中、强毒力新城疫病毒RNA

根据新城疫病毒（NDV）核苷酸序列，设计针对中、强毒力NDVF基因编码融合蛋白裂解位点的核苷酸序列引物和TaqMan探针，建立了实时荧光定量反转录荧光定量PCR（RRT—PCR）检测中、强毒力NDVRNA的方法。该方法能从舍有NDVI系疫苗毒、NDV标准强毒株F48E9（基因Ⅸ型）、分离鸡源强毒株（基因Ⅶ型）和鸽源强毒株（基因VI型）样本中检出NDVRNA，不与NDV弱毒株（LaSota、Clone30、B1、V4）、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒及健康鸡组织RNA发生交叉反应，对NDV核酸的最小检出量为60个拷贝，具有检测速度快、特异性强、灵敏度高、重复性和稳定性好等特点。从9个临床样本中均检测出阳性信号（9／9），PCR产物经测序证明均舍有NDV强毒株F基因裂解位点；用其中8份病料接种SPF鸡胚分离病毒，分离率为5／8。     

新城疫病毒ClassⅠ与ClassⅡ毒株交叉血凝抑制试验快速分类

ClassⅠ新城疫病毒(NDV)分离自健康家禽泄殖腔棉拭子,其基因序列与ClassⅡNDV存在很大差异,为了建立简单快速的NDV分类方法,用SPF鸡制备ClassⅠ和ClassⅡ毒株多价抗血清分别与选取的ClassⅠ和ClassⅡ代表毒株进行交叉血凝抑制反应。结果表明所有ClassⅠ毒株比同ClassⅡ毒株的交叉血凝抑制值高8～64(3～6log2)倍;而ClassⅡ毒株与ClassⅡ抗血清的HI效价比同ClassⅠ毒株的交叉血凝抑制值高2～8(1～3log2)倍,结果与基因分型高度一致,说明可以用交叉血凝抑制试验进行初步分类。本研究结果显示,NDVClassⅠ弱毒株血凝性与广泛应用的NDV弱毒疫苗株不同,基因序列分析可以部分解释这种差异,另外可能HN蛋白的空间结构也会影响其与血凝素结合的特性。     

应用 BA-ELISA 诊断鸡新城疫的研究

应用 BA-ELISA 和 ELISA 对人工感染新城疫病毒鸡的口腔和泄殖腔棉拭样品中的 DNV 抗原进行了检测.结果表明.BA-ELISA 较普通 ELISA 有更高的敏感性,其对口腔和泄殖腔的检出率分别为78.95%和71.93%,这一结果与鸡胚病毒分离结果基本相吻合.     

表观健康鹅群新城疫病毒的分离及生物学特性

自江苏、山东、安徽3省不同地区的表观健康鹅群采集泄殖腔棉拭子样品,分离、鉴定新城疫病毒（NDV）,研究其生物学特性和分子流行病学特征,结果从1 108份样品中分离到11株NDV。依据鸡胚平均死亡时间（MDT）及融合蛋白（F）裂解位点氨基酸序列,判定其中6株病毒为NDV弱毒株,3株病毒为NDV中等毒力株,2株病毒为NDV强毒株。对F基因的序列测定及分析表明,6个弱毒株与La Sota株高度同源,3个中等毒力株与Texas GB株高度同源,2个强毒株则与1997年以来流行的对鹅具高度致病性的NDV有较高的同源性,只是其F蛋白信号肽序列及另外3个特征性位点的氨基酸显著不同。