用单抗夹心ELISA自免疫鸡群检测新城疫强毒

本研究用单抗夹心ELISA检测人工感染新城疫病毒(NDY)Muktoswar、B_1、F、LaSota疫苗毒株和F_4~8E_8强毒株鸡的两周内各脏器病毒的动态分布。发现4种疫苗接种鸡的口腔和泄殖腔棉拭样品均查不到病毒抗原。而强毒感染鸡的相同样品均显示阳性,用本法检测从疑有NDV强毒感染的免疫鸡中采集的泄殖腔棉拭样品1312份,共检出阳性样品581份:对206份阳性样品进行平行病毒分离,经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验证明均含有NDV;选择从不同地区阳性样品得到的8个NDV分离物作进一步生物学鉴定,结果均为强毒。本法为ND的确诊、免疫鸡群强毒感染的监测和流行病学研究提供了新的有力手段,将在ND的控制中发挥重要作用。     

湖南省鸽新城疫病毒的分离与鉴定

用SPF鸡胚从疑似命ND病鸽群中分离到一株病毒。根据HA、HI及病毒中和试验结果表明该分离毒为鸽NDV。其生物学特性ICPI为1.38，IVPI为1.0，MDT为99.8h，表现出与鸡NDV不同的生物学特性。     

鸽新城疫病毒在鸡胚上的增殖动态

采用红细胞凝集试验（HA），通过对鸽新城疫病毒（NDV）在鸡胚上增殖动态的研究表明，ND－gs01病毒经尿囊腔接种9－10日龄鸡胚、24h内病毒处于“掩蔽期”，24h后开始增殖，72h左右鸡胚死亡。新城疫病毒在尿囊膜、羊膜、尿囊液、羊水中含量较高，增殖动态趋于一致。卵黄、胚体中含量较低。上述结果，为该病毒的进一步研究和应用提供了科学依据。     

海安地区鸡新城疫病毒的分离与鉴定

新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的禽类急性高度接触性传染病,给养禽业造成重大经济损失.2011～2012年间,我们对20个来海安县兽医站就诊的疑似ND发病鸡群进行临床症状和病理变化观察,病鸡以呼吸困难、腹泻和头颈扭曲为主要症状.全身浆膜、粘膜出血,尤其是消化道和呼吸道最明显.腺胃乳头和肌胃角质层下出血,盲肠扁桃体肿大、出血、坏死,肠粘膜出血、纤维素性坏死,形成伪膜及溃疡.采集病料,接种9～ 10日龄的SPF鸡胚,分离到8株有血凝性的病毒.其中5株病毒能够凝集鸡的红细胞,并且血凝性可以被NDV阳性血清所抑制,最小致死量病毒致死鸡胚的平均时间（MDT）在49 ～60.8 h之间,鉴定为NDV强毒株.     

鸵鸟新城疫病毒野毒株的分离及其生物学特性

用鸡胚从疑似鸵鸟新城疫的送检病料中分离到 2株病毒。 2株病毒均能凝集鸡红细胞 ,且能被抗新城疫病毒 ( NDV)阳性血清抑制 ;用抗 NDV单抗 PEG夹心 ELISA测定 2株分离毒均为阳性。对其中 1株作进一步生物学特性鉴定 ,按照国际上规定的 NDV毒力判定标准测定的该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间 ( MDT)为 54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)为 1 .88,6周龄雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)为2 .75。结果表明 ,本分离株为鸵鸟新城疫病毒强毒     

鸽新城疫的诊断及病原分离鉴定

20 0 1年 1 0月中旬 ,江苏某养鸽专业户饲养的 30 0多对美国白羽王肉用鸽 ,部分鸽出现以神经症状和腹泻为主要特征的疫病 ,发病率为 30 %左右 ,死亡率为 2 0 %左右。经临床检查 ,病理剖检 ,初步诊断为鸽新城疫 (ND)。立即对全群鸽用新城疫疫苗紧急接种 ,迅速扑灭了疫情 ,同时从病死鸽体内分离到1株新城疫病毒 (NDV)。1　材料与方法病料 :无菌采集病死鸽脑、肝、肺及提取的气管拭子。血清 :发病鸽血清共 30份 ;ND、EDS阳性血清 ,自制 ;SPF鸡血清 ,由江苏省家禽研究所提供。鸡胚 :1 0日龄非免疫鸡胚 ,从江苏省家禽研究所购进种蛋 ,37℃…     

鸡体内鹅源新城疫病毒抗原的免疫组织化学检测

为研究鹅新城疫（ND）的发病机理,用3株鹅新城疫病毒强毒株分别人工感染25日龄雏鸡,以单克隆抗体介导的免疫组化（IHC）法检测攻毒鸡体内NDV抗原的分布及定位,研究了鹅新城疫病毒（NDV）对鸡的组织嗜性。结果显示。在试验鸡多种组织器官中均能检测到NDV抗原,病毒抗原主要定位于淋巴细胞、网状细胞、巨噬细胞、肝细胞及各种上皮细胞的胞浆内。结果表明,鹅NDV强毒株对鸡是一种泛嗜性病毒。     

鸽新城疫病毒弱毒株的分离与鉴定

对某鸽场送检的6只通过病理剖检疑似新城疫(ND)的病鸽进行实验室诊断,包括细菌分离、新城疫病毒荧光RT-PCR检测、SPF鸡胚分离与鉴定,并测定其鸡胚分离物F3代EID50和ICPI.结果为内脏病料新城疫病毒荧光RT-PCR检测为阳性;SPF鸡胚分离到一株有血凝活性的病毒,经HA和HI鉴定为NDV,其F3代血凝价为1∶26,EID50为107.63,ICPI为1.19.根据病鸽的临床症状、鸡胚分离物EID50和IC-PI,确定该鸽新城疫病毒分离株为弱毒株.     

鸡新城疫的诊断与控制

鸡新城疫（ND）是由鸡新城疫病毒（NDV）引起的一种主要侵害鸡和火鸡的急性高度接触性传染病，亦能感染雉、鸽和野生鹦鹉等多种鸟类，以呼吸困难、下痢、神经机能紊乱、粘膜和浆膜出血为主要特征。近年来，虽然总体养鸡水平不断提高，对鸡新城疫防疫越来越重视，但仍有不少养鸡场不断发生非典型新城疫，有的养鸡场还爆发典型新城疫。所以，目前鸡新城疫仍是危害养鸡业的主要疾病之一。一、病原与流行病学1．病原 鸡新城疫的病原是新城疫病毒，病毒性质稳定，经55℃ 45分钟仍可存活。粪便或组织中的病毒可保持传染性达数月之久。NDV能凝…     

3株单抗对新城疫病毒HN抗原变异的分析

以新城疫病毒(NDV)LaSota株为免疫原研制了3株针对NDVHN蛋白的单抗,分别命名为1E5、C3-B7和E6-F11。3株单抗与NDV不同毒株在血凝抑制试验(HI)、ELISA和病毒中和试验中的反应性不同,而同一株单抗与同一个NDV毒株在HI、ELISA以及病毒中和试验中的反应性一致。其中,单抗1E5与NDV标准株(LaSota、F48E8)、8个NDV分离株反应阳性,而与9个NDV分离株反应阴性;单抗C3-B7、E6-F11与所有NDV毒株反应均为阳性。结果表明,3株单抗均是针对HN蛋白上的中和位点,国内部分NDV流行株的HN抗原至少有1个抗原位点发生了变异。     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

鸭源新城疫病毒的分离鉴定

从病死肉鸭肝脏中分离到2株病毒(ZH1、ZH2),均能够凝集鸡、肉鸭、绵羊、山羊、猪、人、兔、牛等的红细胞,且这种血凝性可被NDV标准阳性血清所抑制.参照NDV毒力判定标准及其方法对分离毒株ZH1、ZH2进行了鸡胚最小致死量平均死亡时间(MDT)、鸡胚半数感染量(EID50)以及1日龄鸡脑内接种致病指数(ICPI)测定,结果ZH1、ZH2株的MDT为52 h和44 h,EID50为106.4/0.1mL和108.64/0.1mL,ICPI为1.93和1.975.表明这2株分离病毒均为NDV强毒株.     

山东省新城疫病毒的分离、鉴定及其毒力测定

在山东多个疑似新城疫的鸡群中,分离到13株具有血凝性的病毒,与多种阳性血清进行血凝抑制交叉试验,确定11株分离株均为新城疫病毒。为评价ND分离株的致病特性,对此11株病毒的毒力进行了测定,具体包括1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)、6周龄雏鸡静脉内接种致病指数(IVPI)和最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间(MDT),结果表明:这些分离株均为新城疫强毒株。     

鸭源新城疫病毒分离株的生物学特性鉴定

从河北某鸭场产蛋锐减而无其他典型新城疫症状的高抗体蛋鸭群中分离到1株病毒(命名为HB/1/06/Dk).经过鉴定,该分离株具有血凝性,可被新城疫病毒(NDV)标准阳性血清所抑制,不能被禽流感病毒(AIV H5与H9亚型)阳性血清和减蛋综合征病毒(EDSV)标准阳性血清抑制;该病毒致死鸡胚的平均时间(MDT)为67.2 h,1日龄SPF雏鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为0.86,表明该病毒属中等毒力毒株.     

13株新城疫病毒强毒株的分离鉴定及部分生物学特性

2004年-2005年从黑龙江省11个地区鸡场、鸽场、鹅场疑似新城疫(ND)病死鸡、鸽、鹅体内分离到24株具有血凝活性的病毒,经HA、HI试验和电镜观察证实了13株病毒为NDV。其鸡胚平均死亡时间(MDT)和1日龄雏鸡脑内接种致病指数(IC-PI)分别为36.8 h~73.6 h和1.51~2.00之间,属于NDV强毒株或中强毒株。除HLJ-12-04株外,强毒株的血凝素热稳定性较差,属快速或中速血凝解脱型;弱毒株的血凝素热稳定性好,属慢速血凝解脱型。所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大,对马和兔的红细胞凝集无规律。     

鸡新城疫病毒的分离及生物学特性的鉴定

用SPF鸡胚及鸡胚成纤维细胞,从有神经症状的病死鸡的脑组织中分离出一株病毒,该病毒可凝集鸡的红细胞,而且此凝集可以被新城疫的特异性血清所抑制。通过对分离株进行MDT(77h)、ICPI(1．1)、IVPI(2．63)等生物学试验、空斑试验及电镜观察等,证实该分离株为鸡新城疫病毒中等毒力的毒株,并命名为SNND。     

Characterization of pigeon-origin Newcastle disease virus isolated in China

Fourteen pigeon-origin Newcastle disease virus (NDV) isolates were obtained from sick pigeons in China between 1996 and 2005. The mean death time (MDT) of embryonated eggs and the intracerebral pathogenicity indices (ICPI) were tested to determine the virulence of the field isolates. The result indicated that most isolates were proved to be mesogenic (MDT 60-90 hr and ICPI > 1.2). The main function regions of F protein gene of the isolates were amplified and sequenced for phylogenetic and residue substitutive analysis. The fusion protein cleavage site sequences of most isolates had multiple basic amino acids R/KRQKRF at positions 112-116 and a phenyl alanine at position 117, characteristic of velogenic isolates. In the phylogenetic tree, the majority of the isolates were clustered into a single genetic lineage, termed genotype VIb, and were typical pigeon paramyxovirus type 1, whereas a small number of recent isolates (three strains) were grouped into genotype VIId, a predominant genotype responsible for most Newcastle disease outbreaks in chickens and geese since the end of last century. One isolate, PK9901, was proved to be a lentogenic strain, of genotype II NDV, to which the vaccine strain La Sota belongs.     

Sensitive, semi-nested RT-PCR amplification of fusion gene sequences for the rapid detection and differentiation of Newcastle disease virus

A rapid, sensitive and specific semi-nested RT-PCR was developed to detect and differentiate virulent and avirulent strains of Newcastle disease virus (NDV). For a total of 67 NDV strains, the results obtained from the semi-nested RT-PCR were consistent with those from nucleotide sequence analysis, plaque forming assays, mean death time (MDT) measurements and intracerebral pathogenicity index (ICPI). Furthermore, 13 class I NDV strains can be characterized by the semi-nested RT-PCR approach, which was feasible by the conventional methods. The detection limit for the semi-nested RT-PCR was two plaque forming units (PFU) both for NDV strain F48E9 in allantoic fluid and for isolate APMV1/ch/ChinaND4031 in oral or cloacal swabs. In conclusion, this semi-nested RT-PCR method offers a new assay for the rapid detection and differentiation of NDVs.     

新城疫病毒西藏分离株的生物学特性鉴定及遗传进化分析

从西藏病死藏鸡中分离到具有血凝活性的病毒、经血凝抑制试验、电镜观察、PCR扩增和测序鉴定为新城疫病病毒(NDV),通过动物致病性试验证明该病毒对鸡具有致病性;分离毒株毒力测定结果显示,MDT为120h,EID50为10-8.44、IVPI为0.5、ICPI为0.6,均符合NDV弱毒株特征。血凝解脱及血凝素热稳定性试验显示:各分离株的血凝解脱时间短,血凝素热稳定性较差,符合NDV弱毒株的特征。F基因的序列测定遗传进化分析表明,西藏分离毒株之间的核苷酸序列具有99%的同源性,与疫苗株LaSota的同源性为90%;与国内标准强毒株F48E8同源性为81%。推导其氨基酸序列分析表明,各分离株的F蛋白的裂解位点氨基酸112 G-K-Q-G-R-L117,具有NDV弱毒株特征,与毒力测定结果相符。本研究首次报道了NDV西藏分离毒株遗传进化情况和生物学特性情况,为进一步研究高海拔、缺氧环境下NDV生物学特性变化研究奠定了基础。