两种新城疫灭活疫苗免疫原性比较

新城疫作为家禽养殖业危害最大的疫病之一,近些年来常发生免疫失败的现象,究其原因,由于免疫压力的增大和变异株的增多,使疫苗的免疫效果受到极大的挑战,因此选择合适的病毒株制备疫苗对免疫效果具有重要的意义。论文通过测定抗体水平比较新城疫基因Ⅶ型A-Ⅶ株和传统基因Ⅱ型La Sota株油乳剂灭活疫苗对鸡只免疫效价的影响,通过攻毒后的保护、排毒情况及病毒载量的研究,综合比较了2种毒株的免疫原性。通过本试验发现,利用基因Ⅶ型A-Ⅶ株灭活苗与基因Ⅱ型La Sota株灭活苗免疫SPF鸡后,A-Ⅶ株灭活苗所产生的HI抗体效价明显高于La Sota株灭活苗。而通过基因Ⅶ型YND株和标准强毒F48E9株攻毒试验结果显示,2种疫苗均能100%的保护鸡只不死亡,但A-Ⅶ株比La Sota株灭活苗能够更好地抑制强毒在体内的复制和排毒。由此可见,基因Ⅶ型A-Ⅶ株对不同基因型强毒的抵抗能力优于基因Ⅱ型La Sota株,具有更好的免疫原性,通过本试验可为新城疫的防控选择合适的疫苗提供一定的参考。     

鸡新城疫病毒的分离鉴定与交叉免疫保护试验

为了评价疫苗免疫保护效果,进而筛选出最佳的免疫方案,将分离到的鸡新城疫病毒(Newcas-tle disease virus,NDV)流行毒株制备成灭活疫苗进行交叉免疫保护试验研究。把采集到的疑似发生新城疫的病鸡肺、气管环等组织经处理后接种10日龄SPF鸡胚进行病毒的分离和增殖,并用血清学和分子生物学方法进行毒株的鉴定;用分离到的NDV/Chicken/TC/1/2011毒株制成油乳剂灭活苗,与La Sota疫苗以不同的疫苗组合免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果显示,共分离到9株新城疫病毒,其F蛋白裂解位点的氨基酸均为112 R-R-Q-K-R-F117,表现为强毒株的分子特征,与致病指数结果一致。分离株灭活苗组和分离株灭活苗+La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最高,其次是La Sota灭活苗+La Sota弱毒苗和LaSota灭活苗,La Sota弱毒苗对试验鸡的免疫保护力最低。NDV分离株与疫苗株La Sota存在明显抗原性差异,这将对新城疫疫苗的发展和疾病控制策略制定至关重要。     

基因Ⅶ型新城疫病毒分离鉴定及免疫原性研究

旨在分离筛选免疫原性好的新城疫病毒(NDV)流行毒株。从发病鸡组织中分离到4株病毒,经血凝和血凝抑制试验鉴定为NDV,进而完成致病指数测定、F基因高变区测序和遗传进化分析,并通过鸡胚交叉中和试验和攻毒试验研究PLK-N-06株对比La Sota疫苗株的抗原差异和免疫保护效力。结果显示,4个分离株的致病指数均属速发型NDV范围,且PLK-N-06株毒力最强;F蛋白裂解位点均为112R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株特征。遗传进化分析表明,分离株均为Ⅶd亚型。交叉中和试验结果显示,PLK-N-06株和La Sota株存在显著的抗原性差异。用PLK-N-06株油乳剂灭活苗免疫接种SPF鸡后产生的HI抗体效价几何平均值为1∶338,显著高于La Sota疫苗(1∶69),且其对PLK-N-06株感染的排毒率为0/10,明显低于La Sota株油乳剂灭活苗的4/10,结果表明PLK-N-06株具有良好的免疫原性,为新城疫基因Ⅶ型新型疫苗的研发奠定了基础。     

鸡新城疫的流行与免疫

门诊病例统计表明，我国鸡群中ND的发病率仍非常普遍。近些年来，世界各地对NDV分离株的研究结果发现，其HN基因和F基因序列的某些位点发生的变化，致使毒株间的毒力差异较大，抗原性亦有差异，但其主要抗原表位未发生变化。山东家禽研究所禽病室对1998－1999年的6个NDV分离株做了比较研究，各毒株的毒力不同且都比经典的F48E9强，其中二个属基因Ⅶ型。但交叉免疫保护试验表明，用La Sota株弱毒苗及其灭活油乳苗免疫的鸡，在用这6个分离毒分别攻毒后，均有1005保护率。同样，用这6个分离毒制成的灭活油乳苗免疫鸡后，对经典毒E48F9亦产生100％保护率。这表明，从目前发病鸡群中分离的NDV毒株与La Sota弱毒株、标准F48E9强毒株间有很好的交叉免疫保护作用。     

鸡新城疫病毒分离株与La Sota株灭活疫苗效力比较试验

用NDV分离株及La Sota株为抗源液，经福尔马林灭活后，与油佐剂混合，分别制成分离株灭活苗、La Sota株灭活苗及分离株与La Sota株二价灭活苗。将这三种灭活疫苗分别免疫SPF鸡后，均获得100%抵抗NDV分离株及F48株强毒攻击的保护力；而用这3种灭活苗与La Sota活苗单独或联合使用，免疫带有ND母源抗体的普通鸡后，3种灭活苗的免疫效力不同，分离株灭活苗与价灭活苗对NDV分离株攻击的免疫保护效力明显优于La Sota灭活苗；灭活苗与活苗同时使用，其免疫效力明显优于单独使用灭活苗或活苗。     

鸡新城疫-传染性支气管炎二联油乳剂苗的研制

以NDV La Sota株，IBV呼吸道型H120株和肾型SN9301株为制苗毒株，病毒经鸡胚繁殖后甲醛灭活，灭活毒液依毒价按比例混合加入油佐剂中，乳化制成ND—IB二联油乳剂疫苗。对该疫苗的安全性、稳定性和免疫效果等进行了测定。结果表明：疫苗安全稳定，物理性状良好；将该苗与相应弱毒苗配合用于雏鸡首免，可获得稳定的免疫保护；单用该苗给雏鸡首免，或用相应弱毒苗免疫雏鸡，免疫效果均较差。     

我国新城疫病毒的分子流行病学及新疫苗研制

当前我国及周边地区流行的新城疫病毒主要为基因Ⅶ型,而目前所使用的疫苗主要为基因Ⅱ型La Sota株,其与流行株的遗传距离较远。疫苗株与流行株之间的基因型差异被认为是免疫禽群中新城疫强毒发生感染的主要原因之一,为提高疫苗的免疫效力,成功研制出了基因Ⅶd亚型新城疫病毒致弱株,该致弱株在控制当前新城疫的发生和流行方面具有较大的优势和潜力。     

强毒鸡新城疫病毒的分离鉴定及免疫防制研究

从陕西发病鸡群中分离出8株病毒，分离毒大多为速发型NDV强毒株，对经典NDV La Sota株免疫的雏鸡及52周龄高抗体母鸡仍有强的致病力，采用NDV SH1－SH8病株制备成多价油乳剂灭活苗，免疫鸡群有良好的保护力。     

新城疫病毒样颗粒(ND-VLPs)免疫效力的研究

为了研究ND-VLPs的免疫原性,利用共表达NDV F、HN、NP和M蛋白的重组杆状病毒rBac-F-HN-NP-M感染Sf9细胞,采用蔗糖密度梯度离心法纯化释放到细胞培养上清的VLPs,免疫60只,18日龄SPF鸡,监测血清中NDV特异性抗体滴度的变化.2周后用相同剂量的VLPs加强免疫.二免后2周以3.16×103EID50的F48E9株强毒滴鼻攻毒.攻毒前,La Sota灭活苗、La Sota 20μg VLP和不同剂量VLPs组(10 μg、20 μg、25 μg)HI效价分别为28.3、28.9、24.1、26.1、26.7;攻毒后,10 μg和20 μg VLP免疫组仅能提供了80%和90%的保护率,但与La Sota灭活苗、La Sota 20 μg VLP一样,25 μg VLP试验组却能够完全抵抗致死剂量的NDV强毒攻击.本试验表明,ND-VLPs具有良好的免疫原性,25 μg VLP诱导机体产生的免疫应答能抵抗致死剂量强毒的攻击.ND-VLPs有可能用来研制针对新城疫流行变异株的高效疫苗.     

新城疫LaSota活疫苗对基因Ⅶ型分离株的免疫保护性试验

从山东省发病鸡群分离鉴定了一株新城疫病毒(NDV),命名为SDLY01。经蚀斑纯化后进行毒力测定和序列分析表明分离株SDLY01属于基因Ⅶ型NDV强毒。20只7日龄SPF鸡免疫新城疫活疫苗LaSot a后14 d分别用NDV标准强毒F48E8和分离株SDLY01攻毒,同时设同日龄SPF鸡为对照组,未免疫任何疫苗。攻毒后观察10 d,免疫组在攻毒后食欲、精神均正常;对照组在攻毒后2～4d发病死亡,并表现ND典型的临床症状和病理变化。攻毒后第3、5、7、9 d对免疫组试验鸡取喉头、泄殖腔棉拭进行病毒分离,F48E8攻毒组病毒分离均为NDV阴性,SDLYO1攻毒组第5 d病毒分离NDV阳性,第3、7和9d病毒分离阴性。本研究结果表明LaSot a活疫苗对F48E8和SDLY01均能提供100%免疫保护,但不能完全抑制基因Ⅶ NDV分离株在体内的复制和排毒。