鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

选取对新城疫病毒(NDV)易感的鸡胚成纤维细胞(CEF),Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质(M)蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响.结果表明:提取的细胞总RNA的D260nm/D...     

不同基因型新城疫病毒对美国白羽王鸽的致病性研究

为比较鸽源Ⅵb亚型新城疫病毒(NDV)与其它不同基因型NDV对鸽的致病性差异,本研究选取JS-7-05-Ch(基因Ⅲ型)、WX-10-07-Pi(基因Ⅵb型)、JS-5-05-Go(基因Ⅶd型)和F48E8(基因Ⅸ型)4个病毒株,分别人工感染2月龄实验鸽。接种后,观察实验鸽临床症状、病理剖解变化、同时检测HI抗体水平变化、喉气管和泄殖腔排毒以及病毒在组织分布情况。4株NDV均能导致接种鸽的发病,但死亡率分别为0、0、100%、50%。WX-10-07-Pi接种组鸽泄殖腔排毒时间最长、而且病毒检出率比其它组高。另外,在接种组鸽的多种组织器官中均可检测出病毒。实验结果表明,不同基因型NDV对鸽均有致病性,但致病力强弱与NDV毒株特性有关;基因Ⅵb型NDV在鸽体内可长期的带毒与排毒,与其它基因型NDV相比更易在鸽群中传播。     

2008年江苏地区基因Ⅶd亚型新城疫病毒遗传变异分析

为了研究基因Ⅶ d亚型新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的分子流行病学及遗传变异规律,作者对2008年分离自江苏地区16株具有一定代表性NDV分离株的F和HN基因片段进行了扩增.根据F基因和HN基因序列绘制的2个遗传进化树基本一致,表明分离株中不存在囊膜糖蛋白基因发生重组的NDV;同时,HN蛋白线性表位发生E347K突变的变异株的分离率在我国呈上升趋势.基因Ⅶd亚型变异株的出现应引起相关领域从业者们的高度重视.     

新城疫病毒弱毒株对鹅的免疫效力试验

用新城疫病毒(NDV)疫苗株La Sota和NDV基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ为免疫原,分别以活苗和灭活苗的形式免疫2周龄试验鹅,免疫后第7、14天和21天采血分离血清用于抗体效价测定.免疫后3周以基因Ⅶ型强毒分离株JS2-06进行攻毒,攻毒后每天观察各组鹅的发病情况,并于第2、4天和7天分别采集喉气管和泄殖腔棉拭样品,用于病毒的分离.试验结果表明,活疫苗免疫后不能产生有效的免疫应答,而灭活苗免疫鹅对强毒的感染具有较强的抵抗能力,但基因Ⅶ型致弱株AND/Ⅶ能更有效抑制鹅体的排毒,其免疫效力明显高于疫苗株La Sota.     

Class Ⅰ新城疫病毒NP因分子特征的研究

为分析2002～2007年Class Ⅰ新城疫病毒分离株NP基因的分子特征,以及其在新城疫病毒演化过程中所起的作用,采用RT-PCR方法扩增分离株的核衣壳蛋白(NP)基因,并进行了测序,应用生物信息学软件分析NDV NP基因的分子特征.根据NP基因序列的遗传发生分析表明,Class Ⅰ NDV 2型毒株与DE/R49-99和美国株亲缘关系较近,而3型毒株与其他Class Ⅰ毒株遗传关系较远,具有地区特色,形成一个独立的分支.生物信息学软件分析表明,NP蛋白N端1～400氨基酸比较保守,而C端序列(特别是氨基酸残基400～480)高度变异.ClaSs Ⅰ病毒2型毒株与国外分离株亲缘关系较近,可能有共同的起源;而3型毒株独立于其他Class Ⅰ毒株,具有独特性,这两种毒株的来源不同;不同基因型NP蛋白之间比较保守,但是P蛋白的C端发生了多个氨基酸的变异,对其功能的影响还需进一步探讨.     

鸭源新城疫病毒P基因遗传变异分析

为分析2002～2007年分离的鸭源弱毒新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)磷蛋白(P)基因的分子特征,以及在新城疫病毒演化过程中所起的作用,采用RT-PCR方法扩增NDV弱毒分离株的P基因,进行测序,并应用生物信息学软件(SNAP和CODEML)研究了作用于NDV P基因的选择压力.根据P基因序列的遗传发生分析表明,NDV Ⅰ类(Class Ⅰ)2型毒株与德国鸭源毒株DE/R49-99和美国株亲缘关系较近,而3 b型毒株与其他Ⅰ类病毒遗传关系较远,具有地区特色,形成一个独特的分支;NDV Ⅱ类(Class Ⅱ)中基因Ⅰb型与中国广泛使用的基因Ⅰ型疫苗毒Qeensland V4(QV4)以及Ⅰ型代表株亲缘关系较远.生物信息学软件分析表明,P基因不同片段受到正选择压力的作用不一样,P基因的两端受到负选择压力的作用不易发生变异,而中间(aa 62～113和137198)片段多个位点受到正选择压力的作用.可见,Ⅰ类病毒中3 b具有地域特色,不同基因型P蛋白之间变异较大,而且P蛋白不同位置变异不均匀.     

鹅源新城疫病毒单克隆抗体的研制及其与不同NDV毒株的反应性

以鹅源新城疫病毒(NDV)作为免疫原免疫BALB／c小鼠，获得了5株具有HI特性的单克隆抗体，分别命名为2G5、3A4、385、6B1和8C5，其腹水HI效价分别为2^14、2^12、2^9、2^15和2^8。竞争ELISA结果表明，2G5、3A4、385和6B1在HN蛋白上所针对的表位属于同一抗原区，而8C5针对的表位为另一抗原区。将上述5株单抗与不同来源的NDV进行了HI排谱试验。结果显示，同一抗原区4株单抗的反应谱比较一致，而与另一抗原区单抗8C5的反应谱明显不同。5株单抗与鹅源NDV毒株的反应性较强，而与鸽源NDV毒株的反应性较弱。这5株单抗用HRP标记后再与不同单抗进行交叉夹心ELISA，得到了一个新的系统(2G5—8C5)。用该系统对NDV分离株做排谱试验。结果显示，该系统与鹅源NDV分离株的反应性较好，表明所建立的新系统可用于鹅源NDV的检测。     

当前新城疫的流行特点及其原因分析

新城疫(ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种急性、高度致死性的禽类传染病,被国际兽疫局(Office International des Epizooties,OIE)列为对畜禽危害最大的A类传染病之一。自1926年从印度瓜哇分离到NDV以来,在世界上已发生了4次ND大流行,造成了巨大的经济损失。ND也是一直严重危害着我国的养禽业的疫病之一,但由于疫苗的广泛使用,此病已基本上得到了较好的控制。近年来ND的流行出现了以下新特点:1非典型新城疫发生普遍由于几乎所有的鸡场都使用ND疫苗,临床上典型的ND病例大大减少。自上世纪九十年代初以…     

H9亚型禽流感病毒分型单克隆抗体的研制及初步应用

禽流感(AI)是由A型流感病毒所引起的禽类(家禽和野禽)的感染和／或疾病综合征。禽流感病毒(AIV)的宿主谱很广，水禽类常可表现为显性感染，或为隐性感染而成为重要的传染源。不同亚型的AIV对家禽的致病性不同，H9亚型禽流感病毒主要引起肉鸡呼吸道症状和蛋鸡产蛋下降。目前禽流     

鸡痘病毒ORF073基因克隆及原核表达

根据已经发表的鸡痘病毒(FPV)美国致病株的ORF073基因序列,设计1对引物,分别以282E4FPV、LP株FPV、102E6FPV为模板,扩增出目的片段,将其克隆到pGEM-TEasy载体中,经酶切鉴定证实,并进行序列测定。目的片段包含了大小为522 bp的ORF073基因,与GenBank上的AF198100(FPVUS)和AJ581527(FP9)序列进行序列比较分析表明:3种病毒株的ORF073基因与鸡痘病毒美国致病株(FPVUS)和英国弱毒株(FP9)完全一致。克隆的ORF073基因与原核表达载体pET-28a构建重组表达载体,经IPTG诱导,在BL21(DE3)细菌中表达了分子质量约32 ku的蛋白。