甲硝唑半抗原及全抗原合成与鉴定

在微波加热条件下,将甲硝唑与琥珀酸酐反应,合成半抗原甲硝唑半琥珀酸酯,氢核磁共振、电喷雾质谱、红外光谱方法的鉴定结果表明,目标半抗原合成成功;通过活泼酯法将半抗原与载体蛋白偶联制备甲硝唑全抗原,紫外光谱法鉴定结果表明,全抗原合成成功.     

抗克伦特罗重组抗体发酵条件的优化

为提高抗克伦特罗(clenbuterol,CBL)单链抗体(single chian Fv,seFv)的表达量,考察了Mg2+、Ca2+、NH4+、NaHPO4-等无机离子,初始pH值以及装液量对重组抗体表达量的影响.优化试验结果表明,重组大肠杆菌E.coli BL21在初始pH值为7.2、含2 mmol/L Ca2+和20 mmol/L NaHPO4-的培养基中培养,装液量为25 mL,42℃诱导表达后抗CBL-scFv的表达量为33.7%.     

丁草胺荧光偏振免疫分析——示踪物的合成与鉴定

【目的】为建立除草剂丁草胺的荧光偏振免疫检测方法,对关键试剂示踪物进行合成与鉴定。【方法】以异硫氰酸荧光素、乙二胺和己二胺为原料,合成了异硫氰酸荧光素乙二胺（EDF）和异硫氰酸荧光素己二胺（HDF）两种中间体,薄层层析法分离出目标产物,电喷雾电离质谱法鉴定;然后将5-氨基荧光素（AF）、EDF、HDF分别与丁草胺半抗原（BMPA）连接,得到3种不同间隔臂的示踪物（BMPA-AF,BMPA-EDF和BMPA-HDF）,利用抗血清稀释曲线测定抗血清效价,竞争抑制曲线测定不同示踪物检测灵敏度。【结果】3种示踪物合成成功,抗血清稀释曲线和竞争抑制曲线显示3种示踪物的抗血清效价分别为1/600、1/1500和1/600,半抑制浓度分别为1 292、433和298 ng•ml-1。【结论】合成出3种不同间隔臂的丁草胺示踪物,对示踪物的性质进行初步研究,为下一步建立丁草胺荧光偏振免疫分析方法奠定了基础。     

有机磷农药三唑磷半抗原合成与鉴定

以三氯硫磷、苯唑醇、6-氨基己酸为原料,采用三步反应,合成三唑磷半抗原6-[O-乙基-O-（1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-基）硫代磷酰胺基]己酸,经质谱和1H-NMR鉴定表明合成成功,为进一步制备三唑磷抗体奠定了基础.     

农药克百威单链抗体基因构建及蛋白结构模拟

构建小分子农药克百威(CBF)单链抗体(scFv)基因cbf,进行蛋白质二级、三级预测并对其理化特性进行分析。采用重叠延伸PCR方法,以能特异性分泌抗CBF单克隆抗体的杂交瘤细胞株5D3为原料,构建抗CBFscFv基因cbf,进行测序,采用生物信息软件对氨基酸序列推导并进行结构预测,同时对理化性质进行分析。结果得出,抗CBFscFv基因cbl全长750bp,对应228个氨基酸,单链抗体分子量约为26315.1,等电点预测值5.66,为酸性蛋白质;二级结构显示抗克伦特罗单链抗体含α螺旋18处,β折叠108处,β转角24处,随机卷曲93处。cbf三级结构建模显示VL和VH符合scFv的结构特点,可观察到6个环区形成疏水的"口袋",具有抗原结合位点的空间构象。从而构建了一个抗CBFscFv基因cbf,应用信息学技术所获得的预测和分析结果为抗克伦特罗单链抗体的进一步表达、纯化和活性研究提供了大量的信息。     

除草剂丁草胺直接竞争ELISA检测方法研究

制备出3种不同结合比的酶标抗体,对检测条件进行了优化,建立了标记抗体固相抗原直接竞争ELISA(cdELISA)检测丁草胺的方法。结果表明,酶标抗体克分子比为1.55时偶合物活性最高,包被浓度1μg·mL-1,酶标抗体800倍稀释,稀释液采用2×PBS,不含BSA、甲醇,建立的标准曲线IC50=1.7ng·mL-1,检测限为0.006ng·mL-1,检测范围0.06～2616.7ng·mL-1,批内变系数9.25%,批间变异系数23.55%。蒸馏水以及稀释10倍后的矿泉水、池塘水、稻田水添加1ng·mL-1和10ng·mL-1的丁草胺,用所建立的方法检测,平均回收率分别为93.27%、158.50%、119.75%、124.51%。本研究为进一步开发丁草胺免疫分析试剂盒奠定了基础。     

魔芋葡甘聚糖的辐照降解研究

研究了不同剂量的Coγ-射线对魔芋葡甘聚糖(KGM)的辐照降解作用。黏度测定结果表明,辐照后KGM60的黏度随着辐照剂量的增加而显著下降;凝胶渗透色谱(GPC)结果显示,KGM分子量随着辐照剂量的增加而下降,经5.0kGy和100.0kGy辐照后,KGM的重均分子量Mw从未辐照的4.81×105下降到3.70×105和3.98×104;热重分析(TG)结果表明,辐照并未对KGM的热性能造成显著影响,100.0kGy辐照后,KGM的热分解温度只比对照下降20℃。对KGM辐照前后的酶解结果表明,辐照提高了KGM对β-葡甘聚糖酶的敏感性,从一定程度上促进了酶解效果。     

农兽药多残留免疫分析检测方法研究进展

综述了免疫分析法在拟除虫菊酯、氨基甲酸酯、有机磷、氟喹诺酮、磺胺5种农兽药多残留检测上的应用情况,着重讨论了抗原设计、抗体制备和方法建立等核心技术的研究进展,并对检测方法的发展进行了展望。