核酸适体检测赭曲霉毒素A荧光方法的建立

赭曲霉毒素A(Ochratoxin A,OTA)普遍存在于谷物等粮食和动物饲料中,是一种可以引起癌症的霉菌毒素。为了快速检测OTA,利用荧光染料PicoGreen识别双链DNA原理,建立了一种基于核酸适体与PicoGreen检测毒素OTA的方法。在10 mmol/L Tris,120 mmol/L Na Cl,5 mmol/L KCl,20 mmol/L CaCl2(pH8.5)缓冲液中,PicoGreen与双链DNA结合后,释放的荧光在3 min内达到峰值(激发波长为480 nm,发射波长为520 nm)。从加样到荧光检测,整个流程可在40 min内完成。检测OTA的灵敏度为1μg/L;检测范围为1μg/L~200μg/L。特异性实验表明:OTA核酸适体-Pico Green方法与黄曲霉毒素B1、伏马毒素B1、桔毒素和玉米赤霉烯酮等霉菌毒素无交叉反应。本方法在检测敏感性和特异性方面与传统抗体ELISA方法相当(Kappa值为:0.857)。由于核酸适体成本比抗体低,因此本方法比抗体ELISA方法更具实用价值。     

奶牛皱胃变位病因及发病机制研究进展

奶牛皱胃变位(displaced abomasum,DA)是指皱胃正常解剖位置发生改变,引起消化道梗阻,导致消化机能障碍的内科疾病.皱胃变位(DA)可分为左方变位(LDA)和右方变位(RDA)[1].自1950年由Begg H[2]首次对本病做了较为详细的报道以来,近60年内,国内外通过大量的流行病学调查和试验研究发现众多与皱胃变位有关的发病因素,但该病的主要原因尚不十分明确.大多数的研究者认为,皱胃的运动力受损和气体蓄积是皱胃变位的两个必要条件[3].     

山羊皱胃平滑肌细胞的培养及鉴定

用外科手术方法取山羊皱胃的平滑肌组织,采用组织块培养的方法,在体外进行山羊皱胃平滑肌细胞的分离培养,为反刍动物皱胃疾病的研究提供了实验材料。结果表明,本研究成功培养出山羊皱胃的平滑肌细胞。倒置显微镜下,细胞生长状态良好,呈现平滑肌细胞特征性的"峰-谷"状结构,活细胞达95%以上,免疫组化染色显示细胞浆内平滑肌肌动蛋白呈阳性表达。     

猪圆环病毒2型Taqman探针法实时荧光定量PCR检测方法的建立

猪圆环病毒2型（PCV2）是一种引起仔猪Sus scrofa多系统衰竭综合征、免疫抑制、皮肤肾病综合征等疾病的病原体。根据GenBank中PCV2 ORF1基因序列设计合成特异性引物和探针,以PCV2基因组DNA为模板,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增目的片段,并将目的片段克隆至pMD18-T载体,构建阳性标准品。以阳性标准品为模板,优化荧光定量PCR反应条件,建立标准曲线,进行灵敏性、重复性和特异性验证,并应用此方法对临床样品进行检测。结果表明:阳性质粒标准品构建成功,该检测方法的引物与探针的最佳浓度皆为0.2 μmol·L-1,线性检测范围为2.1×1013~2.1×106拷贝·L-1,最低检测限值为8.828×106拷贝·L-1,且与其他相关疾病无交叉反应;各批次检测变异系数低,检测方法稳定性好。本研究建立的敏感性高、特异性好的实时荧光定量PCR方法,为PCV2的快速检测提供了新工具。     

手术致奶牛真胃左方变位对其瘤胃、真胃和血液相关指标的影响

[目的]建立奶牛左方真胃变位模型,为深入探讨该病的发病机理和早期诊断方法提供理论依据。[方法]选取经产荷斯坦奶牛6头,随即分为2组,利用手术法制作奶牛左方真胃变位模型,并于手术前后采样测定。[结果]奶牛真胃人工变位后,瘤胃液和真胃液中的K＋和Cl-浓度升高（P〈0.05）,Na＋浓度降低（P〈0.05）;而血清中Na＋浓度升高,K＋,Cl-和Ca2＋的浓度降低。瘤胃液中pH值和乙酸浓度降低（P〈0.05）,丙酸和丁酸的含量上升;真胃液中乙酸、丙酸的含量上升,丁酸和pH值含量下降。[结论]真胃人工变位可导致奶牛瘤胃和真胃内环境发生改变,酸度增加,发酵类型改变,进而影响奶牛的生理功能。     

“三维一体”教学模式在动物医学人才培养中的应用初探

在"同一个世界,同一个健康"的前提下,动物医学专业人才的培养提出更高要求,需要既有丰富的理论知识,同时又懂得实验室诊断方法和临床诊断方法,并具有有效的解决临床疾病问题的能力。创造性利用"三维一体"教学模式,以"宠物医师""猪场兽医"为例,把课堂教学、实验室诊断技术教学、临床兽医方案分析教学有机结合,学生所学专业知识在实践基地中进行临床实践,评价学生各种能力提升情况。为动物医学人才培养提供新的思路,使执业兽医师的培养能紧随国际兽医人才培养步伐,同时也满足社会对人才的真正需求,提升动物医学人才培养质量。     

一例京巴犬尿结石的诊治

一、基本情况 京巴犬，7岁，体重6．5kg，雌性。一月前发现患犬尿中带血，后尿中红色逐渐加深，前日发现患犬尿频且排尿时出现疼痛，饮水量较大，食欲正常，大便正常。     

一例犬肝腹水混合附红细胞体感染的诊治

腹水也叫腹腔积水,是以腹腔积聚大量的液体为特征的一种慢性继发性疾病,常继发于心血管疾病、肝脏疾病、腹膜炎、肾脏疾病、营养障碍、卵巢肿瘤、结缔组织病变和某些寄生虫病。本病多发生于幼犬和老龄犬,该病死亡率较高,是犬病中的常见疾病,危害很大,近年来该病的发病率逐年上升,应用传统的治疗方法效果不理想,如与附红细胞体混合感染,则更难治愈,多预后不良。最近我院收治一腹水病例,经过治疗取得了较好的效果。     

猪猝死症4种重要病原多重连接探针扩增鉴别检测技术的建立与应用

为了快速检测引起猪猝死的病原,本研究针对临床引起猪猝死症的4种疾病病原(猪尼帕病毒、非洲猪瘟病毒、猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌)分别设计特异性探针,建立了同时检测这4种病原的多重连接探针扩增技术(MLPA)。对扩增产物进行毛细管电泳分析,结果显示该方法,探针之间没有交叉反应,特异性强。对不同病原核酸的最低检测限可以达到140拷贝μ/L～370拷贝μ/L,敏感性较高。应用该MLPA方法对129份临床样品进行检测,并与国家相关标准进行比较。结果显示,两种方法的符合率为100%,且该方法检测猪产气荚膜梭菌和猪胸膜肺炎放线杆菌的特异性和敏感性均达到100%,Kappa值均为1。该方法的检测结果与国家或行业标准PCR的检测结果一致性较高,且克服了后者无法同时进行多重检测的缺点,最多可以同时检测45种病原,对于复杂症候群的快速和高通量检测具有重要临床意义。该方法可推广到其它多重病原体的检测中,显示出广阔的应用前景。     

猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据Gen Bank报道的N基因高度保守核苷酸序列,设计并合成一对引物。上下游引物与Gen Bank中登录的153株猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板,利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增,获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照,建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验,变异系数0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证,核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点,可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。