猪流行性腹泻病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据Gen Bank报道的N基因高度保守核苷酸序列,设计并合成一对引物。上下游引物与Gen Bank中登录的153株猪流行性腹泻病毒(PEDV)N基因全长序列匹配度分别是100%和97%。以本实验室分离流行毒株为模板,利用SYBR Green I荧光染料法进行RT-PCR扩增,获得扩增产物构建重组质粒作为阳性对照,建立检测猪流行性腹泻病毒核酸的方法。同一样品进行3次重复试验,变异系数0.9%。通过对临床样品进行检测和测序验证,核酸检测结果中的阳性样品准确率为100%。本研究所建立的荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、准确等优点,可用于临床PEDV的检测及分子流行病学调查。     

奶牛的发情鉴定与适时配种

奶牛发情时会出现一系列的发情症状，怎样根据这些特征来进行准确的发情鉴定和把好奶牛发情后输精适期关，是能否全配全准的关键。根据我们多年的实践，谈谈我们的看法，以供同仁参考。一、正常的发情症状１．乳牛发情为常年发情，只要营养充分，饲养管理好，可终年发情。２．乳牛发情持续期较短，从发情到排卵平均时间为３０小时。３．乳牛的排卵时间是在发情的症状消失以后，其它家畜的排卵则往往是发情之中。４．绝大多数乳牛发情过程中都有爬跨现象，即母牛与母牛之间互爬———俗称“同性爱”。５．乳牛多数都是排单卵（９７％），也有…     

猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBR GreenⅠ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析。结果显示:建立的检测方法灵敏度可达10拷贝/μL,标准曲线线性关系良好(r=0.997),扩增效率高,具有良好的特异性和重复性。使用该方法对124份临床疑似TGEV病料进行检测,阳性样本有17份,检测样本的阳性率为13.7%。该方法可用于兽医临床上TGEV的快速检测和流行病学分析。