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重组M蛋白间接ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体 总被引:2,自引:0,他引:2
用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白作包被抗原,建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立了ELISA最佳工作条件:抗原包被浓度为3.5μg/mL,37℃1h加4℃过夜,血清(1:40)和酶标SPA(1:80)分别在37℃温育1h,加底物溶液常温显色5min。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。 相似文献
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将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的M基因和N基因从重组质粒pMD18-T—M—N中亚克隆至pBV220原核表达栽体上,成功构建了重组表达质粒pBVM—N。将pBVM—N转化大肠埃希氏菌DH5α感受态细胞.重组菌经温度敏感诱导表达,其细菌裂解物经SDS—PAGE可检测到分子质量约为19ku的目的蛋白,与M基因表达产物一致;经蛋白质分析软件Bandscan分析,其表达量可达19.1%;Western-blotting分析表明,该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别,与预期的M基因表达产物相一致,而N基因未获表达。 相似文献
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猪传染性胃肠炎病毒SC-1株的分离与基因7的克隆分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从四川某猪场采集疑似病例的腹泻粪样中分离到1株病毒,该病毒经过ST细胞传代培养盲传至第4代时出现病变。通过荧光抗体染色、病毒中和试验、TCID50试验、核酸类型鉴定,结合样品正染后在电镜下的观察结果,确定该毒株为猪传染性胃肠炎病毒,命名为TGEV SC-1株。参照GenBank中收录的TGEV基因7的序列设计了1对特异性引物,以SC-1株的细胞增殖毒的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得了大小约为303 bp的基因片段,包括完整的基因7序列片段(237 bp),在GenBank上的登录号为DQ437507。核苷酸和推导的氨基酸序列比较分析结果表明,该毒株与其他毒株的同源性均在92.4%以上,TGEV SC-1株与美国的PURDUE和中国的TH-98毒株亲缘关系最近;与日本各分离毒株、中国TS株、美国Miller株、中国台湾TFI株和英国96-1933株的同源性较低。TGEV基因7在密码子使用的选择上,存在较大的偏向性;基因7编码蛋白在两端存在有明显的疏水性区域,在2~24和56~75位氨基酸残基处存在跨膜结构。 相似文献
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草鱼呼肠孤病毒的研究进展 总被引:1,自引:0,他引:1
草鱼呼肠孤病毒(GCRV)是呼肠孤病毒科、水生呼肠孤病毒属的病毒中毒力最强的病毒,严重危害着我国淡水渔业的养殖。基因组由11条分节段dsRNA组成,编码11种结构多肽。GCRV能够合成内源性RNA聚合酶,在体外转录。总结了近20年来我国在GCRV形态结构、理化特性、培养特性、分子生物学以及预防治疗等方面的研究成果,提出了GCRV的重要酶类作为RNA干涉靶基因的思路。由于中和效价最高的蛋白基因M6在毒株中具有相对保守性,初步确认了基因工程亚单位疫苗开发的可行性。 相似文献
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以重庆分离病毒株PRRSV-SCQ构建的包含SCQ株ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7 6个结构蛋白基因的cDNA文库质粒pRSF2、pRSF3、pRSF4、pRSF5、pRSF6和pRSF7为基础材料,通过Sanger′s双脱氧末端终止法进行核酸序列分析。测序结果表明,文库质粒DNA中分别含有PRRSV-SCQ株中为结构蛋白编码的阅读框ORF2、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6和ORF7的完全序列,其起始密码子均为ATG,终止密码子分别为TGA、TAG、TGA、TAG、TAA和TGA。阅读框ORF2的cDNA片段长度为721 bp,ORF3的cDNA片段长度为764 bp,ORF4的cDNA片段长度为547 bp,ORF5的cDNA片段长度为621 bp,ORF6的cDNA片段长度为509 bp,ORF7的cDNA片段长度为436 bp。推导的蛋白质序列中,GP2、GP3、GP4、GP5、M和N蛋白的氨基酸数量分别为258,254,178,200,174 aa和123aa。每条多肽链都以甲硫氨酸为起始氨基酸。 相似文献
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猪繁殖与呼吸综合征病毒SCQ株的仔猪回归试验及病毒在体内的分布研究 总被引:7,自引:0,他引:7
猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的一种新的传染性疾病。该病自发现以来已经给各主要养猪国家带来了巨大的经济损列。1998年我们从重庆地区发病猪场的母猪血清中分离到PRRSV—SCQ毒株,经鉴定属美洲型毒株。因为用分离株进行病理机制研究方面的报道则更少。本试验以PRRSV重庆分离株人工感染易感仔猪,以复制出PRRS病症,研究病理变化特征和确定病毒抗原在仔猪体内的定植情况,为临床诊断和有效预防该病提供理论参考,也为进一步确证分离到的SCQ毒株属PRRSV提供佐证。 相似文献
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