6种酶联免疫试剂盒在饲料呕吐毒素检测中的准确性评价

为评估市售各品牌霉菌毒素酶联免疫检测试剂盒在饲料及其原料呕吐毒素检测中的准确性,特选购市售6种品牌试剂盒进行验证,并选定其中一种试剂盒与高效液相色谱法检测结果进行比较。试验结果表明,市售6种品牌试剂盒检测结果存在极大差异;与高效液相色谱法相比,试剂盒检测结果偏高,且相对平均偏差最高为48.4%。因此,选择市售酶联免疫试剂盒进行呕吐毒素含量检测使用前,有必要进行准确性验证,以保证检测结果的准确性,降低饲料安全评估风险,且ELISA检测结果显示为阳性的样品,需结合高效液相色谱法进一步确认,以防误判。     

扭角羚肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定

本试验旨在报告四川省野生扭角羚自然生存过程中致病性细菌的检测及生物学特征。试验对发病死亡扭角羚病变组织进行细菌学检查及分离,对分别从肝脏、脾脏和肺脏分离得到的4株优势菌进行形态特征、生化特性和16SrDNA分子鉴定,判定为肺炎克雷伯氏菌。这4株菌对供试小白鼠均有致病性。测其LD50,分别为2.9×107、2.9×107、4.5×107和1.1×108 CFU/只。4株分离菌对供试的先锋霉素等敏感,对阿米卡星等中度敏感,对红霉素等耐药。推测这4株肺炎克雷伯氏菌是导致扭角羚死亡的主要病原菌。     

三种融合标签对大熊猫轮状病毒结构蛋白VP6-VP7可溶性表达的影响

大熊猫轮状病毒(giant panda rotavirus,GPRV)是引起幼龄大熊猫腹泻的主要病原,对圈养大熊猫产生了较大的危害。轮状病毒结构蛋白VP6是一种载体蛋白,可介导黏膜免疫反应。VP7是轮状病毒结构蛋白中主要的中和抗原。因此,VP6-VP7的融合表达作为候选抗原对该病的防治具有重要的意义。传统大肠埃希菌原核表达存在表达量低、可溶性差以及纯度低等弊端。本研究使用醛缩酶(EDA)、谷胱甘肽S-转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)3种融合标签,以实现获得表达量高和纯度高的GPRV-VP6-VP7重组表达蛋白。将扩增的VP6、VP7基因片段利用同源重组酶构建到含3种融合标签的表达载体pET21b上,将重组质粒转化至大肠埃希菌Rosetta(DE3)感受态细胞中进行低温诱导表达。用Ni-柱亲和层析法纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Image J分析蛋白表达量和可溶性,Western blot分析得到表达的重组表达蛋白正确且具有蛋白活性。实验结果证明,EDA标签能显著促进VP6-VP7蛋白的原核可溶性表达,提高VP6-VP7蛋白表达量。     

纳米技术应用于动物疫病诊断

纳米技术是指在纳米尺度下对物质进行制备、研究和工业化以及利用纳米尺度物质进行交叉研究和工业化的一门综合性技术体系.     

猪“高热病”源嗜麦芽窄食单胞菌16S rDNA基因的克隆和系统发育分析

根据NCBI中已报道的嗜麦芽窄食单胞菌16S rDNA基因序列设计引物,对两株来源于猪“高热病”病料中的疑似嗜麦芽窄食单胞菌PSM-5、PSM-6进行PCR扩增。将扩增产物克隆至pMD18-T载体上,并转化到DH5α中。抽取质粒模板,进行PCR和双酶切鉴定并测序,从分子水平上予以鉴定。两株菌的16S rDNA基因扩增片段的核苷酸序列（GenBank登录号为GQ267816和GQ267817）与已经报道的嗜麦芽窄食单胞菌分离株的16S rDNA序列的相似性均在96.78%以上,最高达99.93%。本试验对通过16S rDNA鉴定嗜麦芽窄食单胞菌提供一定参考,同时对猪“高热病”的诊断治疗奠定细菌学方面的基础,对其发病机制的探讨提供依据。     

重组M蛋白间接ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体

用纯化的猪繁殖与呼吸综合征病毒重组M蛋白作包被抗原,建立了检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的间接ELISA方法,并确立了ELISA最佳工作条件:抗原包被浓度为3.5μg/mL,37℃1h加4℃过夜,血清(1:40)和酶标SPA(1:80)分别在37℃温育1h,加底物溶液常温显色5min。经重复性试验、交叉试验、阻断试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、敏感度高;与美国IDEXX公司试剂盒相比较,特异性和敏感性分别为96.3%和93.5%,无显著性差异。用建立的方法检测临床血清样品168份,总阳性率为39.9%。     

一起猪伪狂犬病病毒、猪蓝耳病病毒变异株与猪链球菌混合感染保育猪的诊断报告

2010年4月,四川某猪场将断奶仔猪转入保育舍1周后注射猪伪狂犬病弱毒疫苗,第2天保育猪开始出现体温升高、食欲下降、精神不振,继而出现神经症状、发抖、后肢关节肿大、站立困难,有的病猪伴随着呼吸困难,发病率为6%,死亡率高达75%。解剖后观察到肾脏上有针尖大小的出血点,肝脏有散在的坏死灶,腹股沟浅淋巴结、肠系膜淋巴结水肿     

四川一起山羊地方性鼻内肿瘤疫情的诊断

四川某地区山羊养殖基地发生一起特殊的肿瘤性疾病,通过流行病学及临床症状调查、尸体剖检、病理损伤的显微及超微结构观察和病原的核酸测序等一系列研究,将该病确诊为山羊地方性鼻内肿瘤(ENT)。本次疫病与国外报道的病例基本一致。这是国内首次报道ENT的病原,为该病的进一步研究奠定了基础。     

猪致病性大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为有效监测四川巴中某猪场病死仔猪大肠杆菌的耐药性和致病性,对从该猪场病死仔猪的内脏和组织中分离得到的13株大肠杆菌进行了药物敏感性检测和动物致病性试验。结果表明,菌株对12种药物均存在不同程度的耐药,其中,对强力霉素、氟苯尼考和红霉素等7种药物的耐药率均达100%;对阿米卡星的敏感性最高,为69%。动物致病性结果显示,3号小鼠注射对应菌液16 h内死亡,剖检可见多个脏器组织均有出血;仔猪注射死亡小鼠分离纯化液后都没有死亡,但不同猪只出现不同的临床病理变化。该猪场大肠杆菌耐药性较为严峻,建议制定合理的用药方案实行交替用药,避免长期使用同一种药物。     

重组伪狂犬病病毒SA215(C)株的构建及其对小鼠的免疫原性

为了研制猪2型圆环病毒（PCV2）基因工程疫苗,以伪狂犬病病毒（PRV）基因缺失疫苗株SA215为病毒载体,通过同源重组,构建了共表达PCV2ORF2基因和绿色荧光蛋白基因重组伪狂犬病病毒SA215（C）株。经PCR、Southern blotting、Western blotting等证实SA215（C）构建正确,并能表达具有活性的ORF2基因蛋白和荧光蛋白。SA215（C）在IBRS-2、ST细胞中的增殖滴度与亲本株SA215相比无显著差异,表明外源基因的插入不影响病毒增殖。用SA215（C）免疫BALB/c小鼠10周后检测免疫小鼠PCV2抗体和PRV中和抗体及细胞免疫反应。结果显示,SA215（C）诱导小鼠产生了PCV2和PRV抗体并出现PCV2的细胞免疫反应。另外,以105TCID50的SA215（C）株接种BALB/c小鼠,接种后28d再接种1次,2次接种后2周,用107TCID50PRVFa和PCV2强毒联合进行攻击,结果免疫小鼠抵抗住强毒的攻击,获得了保护;表明该毒株具有很强的免疫原性,为研制安全、有效的PCV2-PRV二价基因工程疫苗奠定了基础。