羊体外寄生虫病的危害及药浴治疗方法

体外寄生虫病是羊群中发生概率较高的一种慢性病,潜伏期较长,极易被羊饲养户忽视。文章以羊体外寄生虫病的危害为切入点,对羊体外寄生虫病的药浴治疗方法进行了简单分析,以期为羊体外寄生虫病的防治提供一定借鉴。     

结核分枝杆菌rv0394c基因在耻垢分枝杆菌中的表达及其粘附特性的鉴定

本实验室前期研究鉴定出结核分枝杆菌的rv0394c基因产物具有透明质酸酶的活性,但对于该酶在分枝杆菌致病中的作用尚不清楚。为了鉴定该蛋白对细胞是否具有粘附特性,本研究利用大肠杆菌表达纯化的重组蛋白RV0394c与人肺泡上皮细胞(A549细胞)互作,通过激光共聚焦显微镜观察到蛋白对细胞的特异性粘附。为进一步验证该试验结果,将rv0394c基因克隆至大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒p MV262中,将重组质粒电转化于非致病性的耻垢分枝杆菌中进行表达。构建的重组菌与A549细胞进行互作,结果表明重组菌可以粘附于A549细胞表面,而且这种粘附能够被RV0394c重组蛋白所阻断,这些结果表明RV0394c蛋白具有粘附细胞的能力,属于该菌的粘附蛋白之一。RV0394c蛋白粘附特性的鉴定为进一步研究该蛋白在致病性中的作用提供了实验依据。     

猪链球菌蛋白表面展示系统的构建及展示蛋白的初步观察

为构建猪链球菌(Streptococcus suis)蛋白表面展示系统,本研究通过序列分析,确定猪链球菌的LPxTG蛋白及其信号肽(SP)和胞壁锚定基序(CWA),通过PCR扩增Peno-SP、GFP、CWA的DNA片段并融合,构建强启动子Peno控制表达编码SP-GFP-CWA融合蛋白的DNA片段,将该重组DNA片段连接pSET2载体,获得蛋白表面展示质粒,转化猪链球菌,构建得到以GFP为报告蛋白的猪链球菌蛋白表面展示系统。结果显示,利用猪链球菌的10个LPxTG蛋白及其SP和CWA序列,构建了10个含有Peno-SP-GFP-CWA融合片段的重组pSET2表面蛋白展示质粒pSsPSD1至pSsPSD10,分别转化猪链球菌05ZYH33,PCR鉴定显示其中7个转化猪链球菌。采用western blot初步检测其展示蛋白,结果显示,7个转化阳性菌株均能有效表达GFP蛋白,以成熟GFP条带为指标,均表现出了一定的外源GFP表面展示水平,分别命名为SsPSD1、SsPSD2、SsPSD4、SsPSD7-SsPSD10,其中SsPSD1、SsPSD4、SsPSD8和SsPSD9表面展示水平相对较好,在猪链球菌表面展示外源蛋白方面具有很好的潜力。本研究首次尝试建立猪链球菌蛋白表面展示系统,为猪链球菌表面递呈外源蛋白或抗原提供了新的策略。     

丽水市森林资源管理问题与对策

指出了随着社会经济的发展,人们的生活水平逐渐提高,人们对生态环境越来重视,加强森林资源保护越来越重要,针对该市森林资源保护建设中存在的诸多问题进行了分析,提出一些森林资源保护建议,以期为相关人士提供有价值的参考。     

村务公开是村级领导班子的关键

村务公开是指村民委员会将村里涉及村民利益的重大事项和村民普遍关心的问题定期向村民公开,接受村民的监督. 加强村务公开要与农村小康社会建设相结合.在实施村务公开工作中要围绕“农业增效、农民增收、农村稳定”的总目标,切实加强对农业和农村工作的领导,突出抓好农业和农村经济结构的战略性调整,努力增创农业发展的后发优势,调动广大人民群众参与建设的积极性,全面建设农村小康社会,大力实施村务公开.     

禽分枝杆菌副结核亚种重组蛋白r22-ag85B的表达及纯化

为表达并纯化禽分枝杆菌副结核亚种主要抗原基因的串联重组蛋白r22-ag85B,期望研制出一种新型副结核病疫苗,以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增了22KD基因和ag85B基因。采用重叠延伸剪接PCR技术（SOE-PCR）获得了融合基因22-agS5B,将基因连接于表达载体pET32a（＋）,构建了重组质粒pET22-ag85B。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,以IPTG（终浓度1mmol／L）诱导后对表达产物进行Western blot检测。检测结果显示,成功表达并纯化了重组蛋白r22-ag85B,其分子质量约为65ku。Western blot检测表明此蛋白具有良好的免疫学活性。禽分枝杆菌副结核亚种22-ag85B重组蛋白的成功表达及纯化为副结核病疫苗的研究工作奠定了基础。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型信号标签诱导突变体库的构建

本研究以自杀性质粒pUT携带含有信号标签的Mini-Tn5转座子对猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌进行转座诱变,构建了带有12对特异性信号标签的Mini-Tn5转座子的pUT自杀质粒,转化到供体菌E.coliβ2155后,利用双亲本滤膜杂交法与受体猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌(APP1)进行接合转移,构建并优化了接合转移体系.利用抗性和营养缺陷培养平板筛选得到接合突变体,通过抗性通用引物与12个特异标签引物和胸膜肺炎放线杆菌毒素IV(ApxIV)鉴定引物分别对这些突变体进行了PCR鉴定和测序验证.结果表明,经过加入标签的MinI-Tn5转座子可以通过接合转移的方式从供体菌E.COliβ2155中插入到APP1基因组当中,并成功构建了12个含有特异信号标签的重组质粒,获得了APP1的12个转座突变体库,经筛选鉴定后得到561个突变株.这为研究APP1的功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础.     

PCR方法快速检测鸡传染性支气管炎病毒

本试验建立了一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒的通用性 Ｐ Ｃ Ｒ 方法。通过对纯化后 Ｉ Ｂ Ｖ核蛋白基因进行直接 Ｐ Ｃ Ｒ及套式 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增表明，两次 Ｐ Ｃ Ｒ 产物的大小为０．７ ｋｂ 和０．５ ｋｂ，与实际设计相符。而对照的 Ｎ Ｄ Ｖ 及 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 的 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增产物均为阴性。用 Ｉ Ｂ Ｖ Ｈ Ｂ株感染 Ｓ Ｐ Ｆ鸡后，应用我们所建立的 Ｐ Ｃ Ｒ 方法去检测不同时期所采集的肾脏、气管、盲肠扁桃体、肺脏和肝脏中的 Ｉ Ｂ Ｖ，在 Ｓ Ｐ Ｆ鸡感染 Ｉ Ｂ Ｖ后的２１ ｄ 仍然能够检测到 Ｉ Ｂ Ｖ 的基因组， Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 杂交试验证明了我们获得的 Ｐ Ｃ Ｒ 产物为 Ｉ Ｂ Ｖ 的核蛋白基因。该 Ｐ Ｃ Ｒ 检测方法比免疫荧光抗体（ Ｆ Ａ）法更具敏感、特异、快速等特点，完全适用于不同来源及不同血清型 Ｉ Ｂ Ｖ 的检测。     

牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析

为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析.用glutathione sepharose 4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性.结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60 kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性.