金黄色葡萄球菌β-溶血素基因的克隆与序列分折

1989年,金黄色葡萄球菌β-溶血素基因被命名为hlb,其染色体位于4kb Cla I DNA片段并编码300多个氨基酸多肽,其中分子质量为37～39 ku的镁依赖神经酯酶可以溶解红细胞.研究表明,牛源金黄色葡萄球菌与人源金黄色葡萄球菌相比大部分携带有β-溶血素,而且还表达该基因的表型.     

金黄色葡萄球菌β-溶血素基因的克隆与序列分析

1989年,金黄色葡萄球菌β-溶血素基因被命名为hlb,其染色体位于4kb Cla I DNA片段并编码300多个氨基酸多肽,其中分子质量为37～39ku的镁依赖神经酯酶可以溶解红细胞。研究表明,牛源金黄色葡萄球菌与人源金黄色葡萄球菌相比大部分携带有β-溶血素,而且还表达该基因的表型。     

免病毒性出血症、巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制

应用兔出血症病毒(RHDV)和巴氏杆菌(Pm)联合研制而成的蜂胶佐剂灭活苗，用1mL免疫试验兔，免疫后第5d，对RHDV保护率达100％(5／5)；免疫后第14d，对巴氏杆菌的保护率达100％(4／4)，第7d即产生较强的免疫力。T细胞总玫瑰花环形成率(Et率)、活性玫瑰花环形成率(Ea率)的测定结果表明：蜂胶具有提高机体细胞免疫功能的作用；通过HI法监测兔病毒性出血症抗体水平，结果表明：蜂胶苗产生抗体时间较早，第7d抗体效价可达到较高水平(2^6.8)，第21d达到高峰(2^8.8)。     

复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响

选择长白二元杂交断奶仔猪90头进行试验,断奶日龄为35d。共分为五个组,每组设3个重复,每个重复随机选取健康仔猪6头。试验1组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌);试验2组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、干酪乳杆菌);试验3组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌);试验4组:饲喂基础日粮+0.1%复合制剂(纳豆杆菌、双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌)。对照组饲喂基础日粮。其中复合制剂中益生菌活菌数为l09cfu/g。饲养30d后观察复合活菌制剂对断奶仔猪生长性能及血清溶菌酶含量的影响。结果:在日增重、饲料效率及血清溶菌酶方面,试验1组和2组显著高于对照组(P<0.05);在腹泻率方面,试验组均显著低于对照组(P<0.05)。研究表明,在仔猪日粮中添加复合活菌制剂可提高每头断奶仔猪平均日增重及饲料效率,降低腹泻的发病率,且增高了仔猪血清溶菌酶含量,提高了仔猪的免疫机能,从而提高了经济效益。     

金黄色葡萄球菌β-溶血素基因的克隆及原核表达载体的构建

根据GenBank中的金黄色葡萄球菌β-溶血素（hlb）基因序列,设计合成1对引物,采用PCR方法扩增出与预期设计大小相符的hlb基因特异性条带,将扩增出的DNA片段克隆到pMD18-T载体中,转化感受态细胞,经平板筛选,酶切鉴定,获得阳性重组质粒,对重组质粒进行序列测定,结果表明：金黄色葡萄球菌β-溶血素基因全长982bp,不含终止密码子的目的基因,插入的位点、大小与读码框均正确。将hlb基因插入到原核表达pET-32a中,转化到BL-21感受态细胞中,获得了表达hlb基因的阳性重组质粒。     

牛肠毒素性产气荚膜梭菌的分离及鉴定

对黑龙江省3个地区牛场疫牛进行临床诊断，剖检结果为小肠出血性肠炎和心内外膜严重出血等症状，进行了细菌的分离培养、涂片镜检、生化试验和动物感染试验。结果表明：分离菌株均为革兰氏阳性粗短杆菌，严格厌氧，在血平板上具有双溶血环，能发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和暴酵牛乳，肠毒素检测试验阳性，厌气肉肝汤培养物0．2mL小白鼠尾静脉注射，2～10h可使其致死。试验结果表明3个分离株均为产气荚膜梭菌。     

禽流感的研究进展

禽流感是由A型流感病毒引起的禽类(家禽和野禽)的一种急性传染病，给全世界造成巨大的经济损失，同时对人类的公共卫生也造成了相当大的危害。本文综述了禽流感在病原、致病机理、临床症状、诊断以及防治方面的研究进展情况。     

三种诺氟沙星制剂体外抑菌实验的比较研究

本文研究了酸性、碱性和长效诺氟沙星注射液对8种细菌及7株耐药金葡菌的体外抑菌试验,结果显示:碱性和长效诺氟沙星的抑菌效果相似,对多种细菌的抑菌效果好于酸性诺氟沙星,对耐药金葡菌的抗菌作用优势更为明显。     

猪戊型肝炎病毒ORF2蛋白C端主要抗原表位区的原核表达

利用分子生物学软件分析GenBank公布的猪戊型肝炎病毒DQ1株ORF2的氨基酸序列,确定了其C端抗原性较高的区域,针对此区域设计并合成了一对特异性引物,RT-PCR扩增该区域,并将此片段克隆到原核表达载体pET30a(+)上,命名为pET30a-ORF2C,然后转化大肠埃希菌BL21感受态细胞,1.0 mmol/L IPTG 37℃诱导表达。结果表明,RT-PCR扩增得到301 bp的片段,重组蛋白大小约为18 ku,与预期大小相符。Western blot分析表明,该蛋白与阳性血清发生特异性反应,为进一步利用其建立诊断方法奠定了基础。     

猪圆环病毒2型ORF2-ORF1串联基因的原核表达及活性分析

为探讨原核表达的PCV-2ORF2-ORF1串联蛋白的抗原性及其作为基因工程亚单位疫苗的可能性,以构建好的PCV-2大庆分离株质粒pMD-18T/PCV-2为模板,PCR分别扩增去掉核定位信号的Cap蛋白基因(dNLS-ORF2)和Rep蛋白基因(ORF1),将其串联克隆到原核表达载体pET30a(+)上,经PCR、酶切和测序鉴定,成功构建了重组质粒pET30a-ORF2/ORF1。转化E.coli BL21(DE3)pLysS感受态细胞,经IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳与Western blot分析。纯化的重组蛋白与PCV-2阳性血清发生特异性反应,并能与免疫小鼠的抗血清发生特异性反应。重组蛋白具有较好的免疫学活性,为基因工程亚单位疫苗的研制奠定了基础。