蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及免疫原性鉴定

为获得蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)25型的VP7原核表达蛋白,本试验以蓝舌病病毒重组质粒为模板,PCR扩增VP7基因,将其克隆于pET-24b(+)表达载体中,获得pET-24b-BTV-VP7重组质粒。经酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,IPTG诱导表达His-BTV-VP7蛋白。在变性条件下用镍亲和层析柱纯化His-BTV-VP7蛋白,经Western blotting及ELISA鉴定其免疫原性。结果显示,His-BTV-VP7蛋白以包涵体形式表达,大小约为40 ku;Western blotting和ELISA检测此原核表达蛋白能与山羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。本研究为后续建立蛋白芯片检测方法奠定了基础。     

牙鲆弹状病毒环介导等温扩增检测方法的建立与应用

建立了牙鲆弹状病毒的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法,首先根据牙鲆弹状病毒的糖蛋白的基因保守序列,利用Primer Explorer V3软件设计了6条引物,并对LAMP反应温度和反应时间等条件进行了优化。该方法的检测限为30fgRNA,比常规RT-PCR灵敏度高100倍,与鲤春血症病毒、传染性胰脏坏死病毒、传染性造血器官坏死病毒、海洋双RNA病毒、病毒性出血败血症病毒以及病毒性神经坏死病毒等没有交叉反应。该方法检测时间短,在1h内即可完成检测。用建立的LAMP方法对临床鱼样进行了检测,结果表明40尾石鲽鱼样品中有3尾感染HRV,与病毒分离结果一致,说明LAMP方法比较适合牙鲆弹状病毒的早期及现场诊断。     

进境原木溴甲烷熏蒸除害处理技术

以标记的黑条木小蠹带疫原木及松墨天牛危害马尾松原木作为样木,采用投药剂量80 g/m3、72g/m3、64g/m3、56g/m3,密闭时间12h、16h、20h、24h双因素溴甲烷熏蒸除害处理试验.试验结果表明:常压下,温度高于15℃,密闭时间12h除害效果小于100%,表明12h内溴甲烷未完全穿透原木而发生作用;投药剂量56g/m3,密闭时间大干或等于20h可保证100%对蛀入深度5～10cm的白云杉齿小蠹和黑条木小蠹除害处理效果,或投药剂量64g/m3,密闭时间大于或等于16h亦可保证:100%对白云杉齿小蠹和黑条木小蠹除害处理效果;但对蛀入深度超过10cm的松墨天牛幼虫,投药剂量应大于或等于64g/m3,密闭时间大于或等于20h方能100%达到除害处理效果.因此,熏蒸库帐幕遮盖常压熏蒸的最低投药剂量应大干或等于64g/m3,密闭熏蒸时间应大于或等于20h,能保证对蛀入深度0～15cm害虫的除害处理效果.     

间接酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸系统综合征血清抗体的研究

本研究建立了检测猪生殖与呼吸系统综合征（ＰＲＲＳ）血清抗体的间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ），其抗原包被浓度为２μｇ／ｍｌ，血清最适稀释度为１∶１００。试验结果表明：ＥＬＩＳＡ的敏感性高于间接免疫荧光抗体试验（ＩＦＡ），是一种切实可行的诊断方法。     

用微量IFA法检测猪繁殖呼吸综合征

用微量培养板作载体，建立了检测猪繁殖呼吸综合征的微量间接荧光抗体法（ＩＦＡ）。比较试验证明，微量ＩＦＡ与美国“室玻片ＩＦＡ”有相同的敏感性和特异性。     

进口鱼粉中沙门氏菌的分离和鉴定

1986年3月,从一批秘鲁进口的鱼粉中分离出一株沙门氏菌,经鉴定为E1群中的法尔肯泽血清型(Serogroup E1 Falkensee),这个菌型目前在我国尚未见过报道。现将分离鉴定过程介绍如下:一、接种与培养每份鱼粉样品称取两个12.5g分别接种在盛有125ml四硫磺酸盐增菌液(T.T.增菌液)和125ml亚硒酸盐增菌液(S.F.增菌液)的2个250ml广口瓶中,震荡器震荡10分钟左右,37℃培养24小时后,分别挑取T.T.和S.F.增菌液一环,划线接种于SS平板,37℃     

几种不同细胞对分离PRRS病毒及检测抗PRRS抗体的比较

PRRS的美洲株和欧洲株病毒最早是从肺泡巨噬细胞(PAM)和CL2621细胞分离成功的。在美国许多化验室对PRRS的诊断,通常采用PAM细胞分离病毒,用CL2621检测荧光抗体。但由于PAM细胞需来自SPF猪群,取之不易,而CL2621是专利细胞,用之也难,所以最近有人从MA104中成功地克隆出对PRRS病毒敏感的Marc145细胞,用Marc145T PAMF进行PRRS病毒分离比较,用Matc145与CL2621细胞做IFA试验比较,221份病毒分离样品中有35份是PAM和Marc145分离病毒均阳性,有7份PAM阳性,1份Marc145阳性。Marc145和CL2621做IFA抗体检测,369份样品中329份滴度相同,占89.1％,28份相差1个滴度,占7.6％,9份相差2个滴度,占2.5％,3份相差3个滴度,占0.8％。虽PAM比Marc145分离PRRS病毒稍敏感,但如排出不同毒株对细胞选择性的因素外,这种差异用生物统计的方法进行分析P>0.05,同样Msrc145和CL2621做IFA试验,两者之间的滴度差异P>0.05,说明这种差别无显著意义,用Marcl45细胞可以代替PAM和CL2621细胞。     

猪生殖和呼吸系统综合症

1987年,北美养猪业遭受了一场不明原因的病毒性疾病的侵害,受害的猪群发生严重的繁殖机能障碍及呼吸系统疾病。因为不明起因,所以它的第一个名字就被称为“猪的神秘病”。这种疾病在美国和加拿大的畜群中快速传播。1990年许多欧洲国家也经历了类似的疾病,而且很快传到边界国家。 由于这种疾病侵袭地区的不断扩大,对于它的描述和命名不尽相同。1992年,在美国明尼苏达州圣保罗市召开了该病的国际专题讨论会,与会者们一致     

牙鲆弹状病毒研究进展

牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus,HIRRV)可以引起牙鲆、香鱼等肌肉组织器官及内脏出血,造血器官坏死,给鱼类养殖带来巨大经济损失。HIRRV具有囊膜,属于弹状病毒科粒外弹状病毒属。病毒基因组为单股负链的RNA,长约11 000 bp,主要包含5个基因,可编码核蛋白(nucleoperotein,N)、磷蛋白(phosphoperotein,P)、基质蛋白(matrix preotein,M)、糖蛋白(glycoperotein,G)、依赖RNA的RNA酶(RNA polymerase protein,L)和非结构蛋白(nonvirion perotein,NV)。本文就目前国内外关于HIRRV的流行特点、生物学特征、分类地位、基因组及其蛋白产物的特征以及检测方法等方面进行了较为全面的概述,旨在为该病的预防、控制以及致病机理方面的研究提供依据。