牦牛源BVDV非结构蛋白NS5A的原核表达及抗原表位分析

【目的】利用原核表达系统体外表达牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)NS5A基因,获得非结构蛋白NS5A,对其进行核苷酸、氨基酸序列分析,以解析BVDV非结构蛋白NS5A的功能。【方法】参考BVDV-1型毒株V006的NS5A基因序列(GenBank登录号:KX170647)设计并合成1对特异性引物,以分离到的牦牛BVDV GSTZ毒株cDNA为模板,PCR扩增NS5A基因片段,并克隆至表达载体pET-28a (+)中,构建重组原核表达载体pET28a-NS5A。经酶切初步鉴定及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,然后利用IPTG诱导表达。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting分析鉴定重组蛋白的表达,并根据NS5A基因的序列构建遗传发育进化树,利用DNAStar软件预测NS5A蛋白的亲水性、表面可塑性和抗原性等特性,并结合二级结构的预测对NS5A蛋白的B细胞抗原表位进行预测。【结果】PCR扩增NS5A目的基因片段为1 488 bp,双酶切和测序鉴定结果证明,重组质粒pET28a-NS5A构建成功。经10% SDS-PAGE电泳及Western blotting鉴定重组蛋白,表达出了大小为55 ku的目的蛋白,大小与预期结果相符。通过对不同BVDV毒株NS5A基因序列构建遗传发育进化树,显示GSTZ毒株NS5A在遗传进化特征上属于BVDV-1型。NS5A蛋白的亲水性主要位于12—21、32—69、75—113、120—135、143—147、152—163、165—180、215—230、265—274、296—340、348—378、389—447、455—463、469—495位氨基酸处,表面可塑性主要位于14—18、37—42、76—81、86—109、154—160、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373、414—442、430—437、454—460位氨基酸处,柔性区域较多,主要位于14—21、37—43、67—82、86—93、97—110、152—158、169—179、218—231、240—255、296—310、313—328、344—359、364—373、413—422和472—483位氨基酸处。NS5A蛋白的B细胞抗原表位主要位于15—18、76—81、154—158、169—178、218—228、297—309、348—358、365—373和414—422位氨基酸处。【结论】成功表达并鉴定了牦牛源BVDV的非结构蛋白NS5A,系统发育进化树表明BVDV GSTZ株基因型属于BVDV-1型,NS5A蛋白具有良好的抗原性,为深入解析BVDV非结构蛋白NS5A的自身结构功能、免疫学特性以及进一步研究非结构蛋白对病毒复制的影响提供参考。     

鲜食玉米果穗外观品质分级的计算机视觉方法

在HSI颜色模型下,通过计算机视觉检测技术实现对鲜食玉米果穗外观品质分级.提出垂直投影法确定秃尖位置并去除秃尖.对H值进行双向一次微分运算以实现缺陷的识别.在此基础上获取果穗缺陷比、穗长、果穗最大直径、长宽比和矩形度作为外观品质特征参数,并以此为输入向量构建广义回归神经网络对果穗外观品质分级.试验结果表明:秃尖位置、穗长和果穗最大直径的平均误差分别为2.27 mm、1.96 mm和0.54 mm,缺陷误判率为3.00%,分级平均准确率为95.91%.     

我国小龙虾产业价值链、市场影响因素研究及产业发展建议

小龙虾是重要的淡水养殖品种之一,但近年来发展遇到了瓶颈,养殖量和消费量没有明显的发展.如何进一步开拓淡水小龙虾的市场是影响该产业发展的关键因素.本文以我国主要产区及消费地区的调查数据为基础,分析了小龙虾产业价值链的构成,并对影响市场开拓的因素进行了系统的分析,为政府及养殖业户进一步发展壮大小龙虾产业提供了参考.     

新时代高校思想政治理论课面临的挑战及对策

2019年3月,习近平总书记在京召开了学校思想政治理论课教师座谈会,他在会中深刻分析了思政课在当今社会中的重要性,为推动思政课的进一步发展提出了具体要求,指明了前进的方向.但是,各大高校在具体推行思政课时却遇到了许多挑战,影响到了思想政治教育的效果.高校必须严肃对待这些问题,找到在推进思政课过程中遇到的阻力,用实际行动来改变思政课的困境,发挥思政课应有的作用.     

浅析印台区生猪疫病防控中存在的主要问题和对策

印台区生猪疫病防控中存在诸多问题,如：猪病类型复杂多样、饲养环境差,混合感染普遍存在、养殖户疫病防控意识淡薄等,针对以上存在的问题,笔者提出了如;广泛宣传,深入贯彻防疫法律法规、改变原始粗放的养殖模式等防控策略。     

小反刍兽疫病毒宿主细胞受体的研究进展

小反刍兽疫(PPR)是由小反刍兽疫病毒(PPRV)引起的一种接触性的病毒性传染病,是我国农业农村部规定的、已被列入世界卫生组织的Ⅰ类动物疫病之一,主要宿主是绵羊和山羊.小反刍兽疫在世界范围内广泛传播,危害严重,其发病率高达100％,并且病死率占90％～100％,其对养殖业的发展造成严重的经济损失.目前,PPRV有两种己...     

膜技术在含油废水处理中的研究进展及膜组件概述

指出了膜分离技术因为其占地面积小,操作简单、耗能低,并且膜种类多,对废水适应性较强,比较适合含油废水处理,目前在水处理方面应用广泛。综述了膜技术的发展历程,分析了不同膜材料的适用性以及可能造成的膜污染的影响因素及注意事项。     

职业病防治呼唤"执法从严"

最近卫生部发布了新版《尘肺病诊断标准》，并启动全国职业病诊断与鉴定现状调查。时有发生的职业病危害事件，接连不断的健康维权，使职业病防治问题引起了国家有关部门的高度重视。我国虽有《职业病防治法》等法律法规，但执法中存在的问题使职业病防治未能取得应有的成效。     

5种谷物胚乳表层细胞的比较研究

通过光学显微镜及透射和扫描电镜研究水稻、大麦、小麦、高粱、玉米5种谷物胚乳表层细胞的结构.结果表明:胚乳表层细胞的分化具有位置效应,且不同谷物胚乳表层细胞的发育程度不同.一般而言,粒重较大的谷物其胚乳表层细胞比粒重较小的谷物发达.谷物胚乳传递细胞中壁内突皆为肋状内突,其长轴方向与溶质流运输方向一致.玉米、高粱胚乳传递细...     

小麦胚乳传递细胞发育的结构观察

为从细胞学方面了解小麦产量和品质的形成机制,以扬麦5号为材料,利用光镜和透射电镜观察了小麦颖果发育过程中胚乳传递细胞的结构变化,并探讨了胚乳传递细胞的生理功能。结果表明：（1）胚乳传递细胞是胚乳发育过程中最早分化的细胞类型,它们发生在紧邻胚乳腔的胚乳表层,由位于外侧1~2层糊粉层传递细胞和位于内侧1~2层内胚乳传递细胞构成;（2）颖果发育成熟时,内胚乳传递细胞核衰亡,糊粉层传递细胞核依然完整;（3）胚乳传递细胞发育呈明显的极性,且具时空性;（4）糊粉层传递细胞胞质较浓,富含粗面内质网、线粒体、高尔基体和脂质体;质膜皱褶,在局部区域外翻,形成众多的原生质管;（5）内胚乳传递细胞胞质较稀,液泡化程度较高,富含淀粉体;（6）胚乳传递细胞未加厚以及未形成壁内突的壁区域分布有大量的胞间连丝;（7）胚乳传递细胞中线粒体呈极性分布,即质膜附近线粒体的密度较大。根据胚乳传递细胞的结构特点推测,经胚乳传递细胞的养分输送既可通过质外体途径又可通过共质体途径来完成。