鸡源p53单克隆抗体的制备和鉴定

转录因子p53广泛参与调节机体生理和病理过程,包括生长发育、新陈代谢、免疫应答、肿瘤发生、发展等,但是禽类p53的生物学功能尚不清楚。本研究扩增鸡p53基因并连入p ET-30a原核表达载体,将载体转化至大肠杆菌BL21中,利用IPTG诱导表达p53蛋白。经SDS-PAGE分离,收集p53蛋白并免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体。取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用免疫印记、间接免疫荧光和酶联免疫吸附法筛选阳性细胞株。共获得6株稳定分泌鸡p53蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1D7、3C4、4D4、4F6、4F7和4H2,均为Ig G亚类,并鉴定了1D7的特异性。本研究成功实现了鸡源p53蛋白的重组表达,制备出特异性较好的抗体,为研究p53在鸡体内的生物学作用奠定了基础。     

热带森林植物种质资源

1月11日，国际竹藤网络中心“热带森林植物种质资源保存与研究基地”开工典礼在海南三亚隆重举行。国家林业局党组副书记、副局长李育材，全国政协人口资源环境委员会副主任、国际竹藤网络中心主任江泽慧．海南省委常委、三亚市委书记江泽林出席开工典礼并讲话。     

农村基层民主决策与科学行政的探讨

通过对农村基层行政的现状及存在问题的分析,强调加强农村基层行政科学化建设的必要性.并就民主决策与科学行政提出如下建议：明确基层行政职能,规范基层行政行为,充分发挥行政作用;提高农村基层行政人员素质和农民群众的素质,让农村基层行政人员和农民群众共同完成农村基层行政的科学化;开明施政,民主决策;坚持农村基层行政文化创新,创建新型农村基层行政文化;加强农村基层行政制度的建设,建立以规范农村基层行政行为为核心的民主监督机制.     

试析监狱法文化的特征——兼论与创建现代化文明监狱的关系

监狱法文化的孕育、衍生和发展始终以监狱行刑、罪犯服刑及其双向互动过程为整合基础。罪犯既是我国监狱行刑活动目标的焦点，又是我国监狱行刑系统赖以有效运作的支点，也应当成为我国创建现代化文明监狱的逻辑起点。现代监狱法律关系和现代人权思想在本质上是一致的，人权性的监狱行刑宗旨无疑是现代监狱法文化的主干和核心。     

2,3-丁二醇脱氢酶基因(BudC)过表达菌株的构建和初步鉴定

旨在过表达BudC进而上调2,3-丁二醇（2,3-Butanediol, 2,3-BD）的合成,通过基因工程手段构建整合载体pR1SW-BudC,经PCR和酶切双重验证后将其电转化至产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca) HD79。结果经卡那霉素筛选,获得一株菌株K. oxytoca HD79-01。以原始菌株为对照,摇瓶发酵检测2,3-BD含量和相关酶活,q RT-PCR检测BudC表达差异,最终BudC在HD79-01中转录水平的表达量为HD79的45.25倍（p<0.01）。摇瓶发酵显示2,3-BD的最高产量、转化率和生产强度分别提高了24.54%、10.97%、45.08%（分别为30.818 ± 0.003 g/L、0.253 ± 0.013 g/g、0.43 ± 0.01 g/(L·h)）,酶活提高了3.61倍(0.563 ± 0.003 U/mg)。因此,2,3-丁二醇脱氢酶基因(BudC)过表达菌株构建不仅成功的提高了2,3-BD的产量也为实现2,3-BD的工业化生产奠定基础。     

新型城镇化视角下旅游小镇社区参与研究

社区参与是近年来旅游小镇开发中的研究热点之一.从相关文献的梳理可以看出,居民由于文化水平低、参与意识淡薄等原因,在开发过程中普遍存在参与程度低、利益受剥夺等问题.以兰州市什川旅游小镇为例,研究旅游开发与小城镇建设相融合的途径.在对旅游产业提档升级的基础上,合理规划以古梨树为核心资源的旅游产业链,通过产业带动引导居民合理就业,从而构建新型的以保护环境资源、拆迁安置、就业引导为核心的旅游小镇模式.     

来源于假单胞菌4-硝基酚降解基因簇中的偏苯三酚1,2-双加氧酶基因克隆和功能鉴定

通过富集培养的方法从农药厂废水曝气池的活性污泥中筛选到了一株既具有甲基对硫磷降解活性又可以有效降解4-硝基酚的高效菌株1-7,经16S rDNA鉴定为假单胞菌（Pseudomonas sp.）。根据4-硝基酚降解相关基因保守区设计简并引物扩增小片段,再应用TAIL-PCR克隆得到偏苯三酚1,2-双加氧酶基因dio1,基因全长873 bp,编码290个氨基酸,酶蛋白理论分子量为32.8 kDa。 doi1基因在E. coli BL21中过量表达,并通过Ni-NTA亲和层析纯化,结果表明该酶具有正常的生物学活性,证明了假单胞菌1-7可以通过偏苯三酚途径降解4-硝基酚。初步探讨了假单胞菌1-7的4-硝基酚降解机制。     

乙酰乳酸合成酶基因(budB)整合表达载体的构建

为了进一步了解2,3-丁二醇合成路径中关键酶的表达量与产量之间的关系,本研究根据Gen Bank中乙酰乳酸合成酶基因(bud B)的基因序列设计引物,以产酸克雷伯氏菌(Klebsiella oxytoca)HD79基因组DNA为模板,通过PCR扩增技术得到目标酶基因,目的片段全长1680 bp。以表达载体p RSFDuet-1为骨架,利用基因工程手段构建整合表达载体p R1SW-bud B。电转化法将其转化至菌株HD79感受态细胞中,通过高浓度Kan筛选和PCR双重鉴定验证后测定ALS酶活力。结果表明,乙酰乳酸合成酶基因整合表达载体构建成功,酶活可达1.0627 U/mg,比原始菌株提高了4.35倍。在一定程度上为实现2,3-丁二醇的工业化生产奠定基础。     

进境木材检验检疫监管的实践与探索

张家港是我国海运木材集散地,从1983年首次进口原木以来,已累计进口六大洲50多个国家和地区的500余种木材,累计已超过3 200万m3,在进境木材的检验检疫监管方面形成了一整套的制度和规范.本文就张家港口岸进境木材检验检疫监管体系的建立及实践进行总结.     

重庆花木大世界即将举行年宵花展

正为了给年宵花生产与经销双方搭建一个面对面的交流平台,推广一站式高效采购模式,降低交易成本,拓展年宵花产品销售渠道,重庆年宵花民俗文化节组委会决定于2014年1月11日~2月14日期间在重庆花木世界举办"中国重庆年宵花民俗文化节暨重庆花木世界年宵花供需