Orexin B在猪下丘脑-垂体-性腺轴的分布及对生殖调节的体外研究

本试验采用免疫组化和放射免疫测定的方法对Orexin B在1月龄健康苏钟猪和和性成熟青年母猪下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的分布定位及其在HPG轴各级水平的直接分子生物学作用进行了研究。结果显示,Orexin B在下丘脑、垂体和性腺均有分布。在下丘脑的分布比较广泛,其中以穹隆周区、外侧区、背内侧核和后区的Orexin B免疫阳性神经元分布最为密集,而下丘脑前区、视前区和视交叉上核的Orexin B免疫阳性神经元分布较少。在垂体Orexin B主要分布在腺垂体的远侧部和中间部的内分泌细胞内。在性腺器官,Orexin B主要分布在初级卵泡、次级卵泡的颗粒细胞以及卵母细胞的细胞质和睾丸、附睾间质细胞内;用不同剂量的Orexin B处理体外培养的下丘脑脑片、腺垂体细胞和卵巢颗粒细胞,其中1000nmol·L-1剂量组Orexin B能极显著的刺激GnRH的释放(P0.01),100和1000nmol·L-1剂量组能显著(P0.05)刺激LH和E2的释放。结果表明Orexin B在HPG轴各级水平直接参与猪生殖活动的调节。     

神经介素B研究进展

神经介素B(neuromedine B,NMB)是1983年从猪脊髓提纯分离的一种神经肽,含10个氨基酸,大分子肽含32个氨基酸,属于蛙肽家族,为铃蟾肽相关肽。NMB通过其受体发挥生物学作用,铃蟾肽受体家族有3～4种(BB1、BB2、BRS-3、BB4或BRS-3.5),NMB优先受体是BB1(NBM-R),与其他受体的亲和力较低。NMB及其受体在中枢神经系统和外周组织广泛分布,具有多种生物学作用,包括刺激平滑肌收缩,改变胃肠道的运动性,抑制垂体促甲状腺素的释放;参与摄食和体温调节,介导应激和恐惧反应,影响行为和记忆,促进肿瘤生长等。     

鸡喉内肌运动神经元在延髓内的分布——CB-HRP法研究

本文用CB-HRP法研究了鸡喉内肌运动神经元在脑干内的分布,结果如下:将CB-HRP注入鸡喉内肌后,标记细胞位于同侧中间带和疑核,在疑核内的多位于腹内侧。注射前切断迷走舌咽交通支后标记细胞消失,这表明,发自疑核的喉内肌运动神经元的轴突出脑后加入迷走神经,尔后经迷走舌咽交通支至舌咽神经,随后者分布于喉内肌。     

胚胎及新生期蛋鸡和肉鸡垂体生长激素基因表达的比较研究

本文采用Northern杂交分析法研究了14胚龄、18胚龄、1日龄、5日龄及10日龄肉鸡和蛋鸡垂体生长激素的基因表达，同时采用放射免疫分析法（RIA）测定了垂体内生长激素的含量。结果表明：14胚龄时在肉鸡和蛋鸡垂体总RNA中均未出生长激素mRNA(GH mRNA)。从18胚龄开始可检测出一条0.8kb的GHmRNA，并且垂体GHmRNA水平的发育性变化在品种间呈现不同的规律：蛋鸡从18胚龄到10日龄垂体GHmRNA水平不断升高，日龄间差异显著（P＜0.05）。肉鸡从18胚龄到出壳1日龄，GHmRNA水平有较大幅度的升高，但从1日龄至10日龄维持在1日龄时的水平。18胚龄肉鸡垂体GH mRNA水平显著高于蛋鸡（P＜0.05），并在1日龄和5日龄均维持在较高水平，与生长速度呈正相关；而10日龄时垂体HGmRNA水平的品种差异发生逆转，蛋鸡GHmRNA水平反而高于肉鸡。垂体HG含量的发育性变化趋势与垂体HGmRNA水平相一致，10日龄时蛋鸡垂体GH含量显著高于肉鸡（P＜0.05），与生长速度呈相反的趋。     

miR-15a对猪卵泡颗粒细胞BDNF基因表达的影响

为探索miR-15a对猪卵泡发育的影响,选取健康大卵泡、中等卵泡和闭锁卵泡,研究不同卵泡中miR-15a的相对表达量以及其是否对卵巢颗粒细胞中有BDNF表达具有调节作用。分别抽取直径3-5 mm、大于5 mm健康卵泡和3-5 mm闭锁猪卵泡,采用q PCR检测发现闭锁卵泡中miR-15a表达显著升高。免疫组化结果显示中等健康卵泡颗粒细胞上BDNF、Tr KB均有表达,而在靠近卵泡腔的凋亡颗粒细胞BDNF免疫阳性反应较弱。分离培养猪卵巢颗粒细胞,过表达miR-15a能显著上调BDNF基因表达水平,Bcl-2基因表达有下降趋势但差异不显著;抑制miR-15a表达能显著抑制BDNF、bcl-2基因表达水平。Western-Blot结果发现,过表达miR-15a显著下调BDNF蛋白水平,而抑制miR-15a表达则能显著上调BDNF蛋白水平。实验结果显示miR-15a可能经由其靶基因BDNF参与猪卵泡的发育和闭锁。     

鸡颈皮神经的感觉神经元和交感节后神经元—HRP法研究

此项研究用了体重1.0～2.5kg的成年母鸡18只,以追寻鸡颈皮神经的感觉神经元和交感节后神经元。将C_6～C_(11)皮神经断端浸渍于20％HRP溶液中2～3天以引入酶。取相应的颈交感干神经节和脊神经节及其前后相邻的神经节,制成厚50μm的连续冰冻切片。TMB反应,明视野光镜观察。标记的交感节后神经元胞体出现于与酶引入皮神经相连的交感干神经节。少数出现于相邻的后一个交感神经节。标记的脊神经感觉神经元胞体只出现于与酶引入皮神经相连的脊神经节。     

猪中脑中央灰质和中缝背核向大脑皮质的投射

用辣根过氧化物酶法研究了２０头仔猪中脑中央灰质和中缝背核向大脑皮质的投射。结果表明，中脑中央灰质和中缝背核投射至广泛的新皮质区。包括十字前回和后回，冠状回，缘回，外缘回，薛氏回和外薛氏回。     

妊娠期奶山羊下丘脑GnRH和OT免疫反应双标记细胞的分布

为了探讨促性腺激素释放激素（GnRH）和催产素（OT）是否在下丘脑细胞中共存,采用免疫组织化学双标记法对妊娠期奶山羊下丘脑中GnRH与OT的分布进行了检测。结果显示：室旁核、视上核、视前交叉上核、弓状核、下丘脑外侧区、乳头体内侧核、乳头体后核等核团（区）有GnRH和OT免疫反应双标记细胞,在妊娠的不同时期,GnRH和OT免疫反应双标记细胞数量有显著差异。这些结果为GnRH与OT相互调节提供了形态学证据。     

山羊黄体弥散性神经内分泌细胞的分布

为了探查山羊卵巢黄体中是否存在弥散性神经内分泌细胞,采用免疫组化链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法对12~18月龄妊娠奶山羊卵巢中弥散性神经内分泌细胞标志物的分布进行了研究。结果显示:黄体组织中各区均含有催产素、神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺样免疫反应阳性细胞。这些细胞散在或成团分布,多呈圆形、卵圆形和三角形,一些细胞具有明显的突起。阳性细胞数由多至少顺序为:催产素、突触素、S-100蛋白、神经元特异性烯醇化酶、5-羟色胺。鉴于神经元特异性烯醇化酶、S-100蛋白、突触素和5-羟色胺是弥散性神经内分泌系统广谱的、共同的细胞标记物,结果提示山羊卵巢黄体中存在弥散性神经内分泌细胞。     

1株牛传染性鼻气管炎病毒的分离鉴定

在对进口种用奶牛隔离检疫期间,从1头IBRV中和抗体阳性奶牛中分离出1株病毒。该分离株表现类似于IBRV特征的细胞病变,细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞。用特异性抗IBRV阳性血清与其进行中和试验,发现IBRV标准阳性血清对分离株的中和抗体滴度为27,与IBRV标准株的中和抗体滴度相差不到1个滴度。用OIEV推荐的IBR特异性引物对分离病毒进行PCR扩增,获得与设计基因片段大小一致的特异性条带,表明分离到的病毒为IBRV。