猪肺炎支原体抗体胶体金免疫层析检测方法的建立

旨在建立猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae,Mhp)抗体胶体金免疫层析检测方法,从而快速地对Mhp的感染和免疫情况进行监测,预防和控制猪支原体肺炎传播。通过柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,确定Mhp特异性抗原P46蛋白的最适标记pH和标记浓度并进行标记,作为金标液。将P46蛋白包被检测线T线,抗P46蛋白单抗包被质控线C线,组装检测试纸条。经优化,建立可同时用于Mhp血清抗体和黏膜抗体检测的胶体金免疫层析检测方法。利用该检测方法对76份临床血清样品和40份临床鼻拭子样品进行检测,并与ELISA检测结果进行比较。用该试纸条检测血清样品时,灵敏性、特异性、重复性较好,与商品化Mhp ELISA抗体检测试剂盒符合率为96.1%;该方法检测呼吸道鼻拭子样品时,存在微弱的非特异性反应,检测结果与本实验室建立的sIgAELISA检测方法符合率为87.5%。本研究成功建立了Mhp抗体胶体金免疫层析检测方法,整个过程只需10 min。检测血清样品具有较好的特异性和灵敏性,检测鼻拭子样品时特异性还有待提高。     

基于GC/TOF-MS技术对流感感染小鼠粪便代谢组学的研究

为了探讨小鼠感染流感病毒后粪便代谢物的变化情况,寻找潜在生物标志物及相关的代谢通路,本研究运用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC/TOF-MS)检测对照组和病毒组小鼠的粪便。结果显示:在正交偏最小二乘法分析(OPLS)模型中,对照组与病毒组的得分图呈现明显差异,病毒组中一些代谢物发生了显著性的改变。α-酮戊二酸、甲硫氨酸、果糖-6-磷酸、苯丙氨酸、草酸、乳糖、棕榈酸、正缬氨酸、腺嘌呤、胆固醇、葡萄糖-6-磷酸、油酸、甘油、十五烷酸、β-丙氨酸等代谢物显著降低,而L-苹果酸、天冬氨酸、乳酸等代谢物显著上升。结论:病毒组与对照组之间存在脂类代谢、氨基酸代谢及糖代谢的差异,代谢组学的研究可以为流感病毒引起的肠道损伤机制提供新的依据。     

氯丙嗪和赛庚啶对黄羽肉种鸡产蛋性能的影响

黄羽肉鸡是利用我国地方优良的三黄鸡品种经过系统选育后培育的专门化肉鸡种群,其肉鸡产品具有皮肤黄、肉味香的特点,非常适合我国及东南亚地区消费者的消费习惯,近年来饲养规模得到不断扩大.     

山羊眼球退缩肌运动神经元及感觉神经元的定位——HRP法研究

将辣根过氧化物酶(HRP)注入山羊一侧眼球退缩肌后,被标记的运动神经元主要位于同侧副外展核,在同侧副外展核周围的网状结构及动眼神经核的前部也发现少数标记细胞,在一例外展核也见到少数标记细胞。副外展核内的标记细胞为典型的多极运动神经元,胞体直径为13.3～39.6微米,以20～30微米者最多(59.8％)。被标记的感觉神经元位于三叉神经节,主要分布在神经节的背部,中部较少,下部没有。三叉神经节内的标记细胞为圆形、卵圆形或纺锤形,以胞体直径为25～35微米者为最多(42.5％)。实验结果表明,山羊眼球退缩肌的运动神经元主要位于副外展核,感觉神经元定位于三叉神经节。     

猪颈前神经节脊髓颈部和胃内Leptin长形受体mRNA的分布定位

用原位杂交法研究了10头长白猪(n=5)和梅山猪(n=5)颈前神经节、脊髓颈部和胃内Ob—Rb mRNA的分布定位。实验结果表明，Ob—Rb mRNA标记神经元位于长白猪和梅山猪颈前神经节、脊髓颈部和胃内。在颈前神经节，Ob—Rb mRNA标记神经元散在分布，胞体呈圆形或卵圆形。在脊髓颈部，Ob—Rb mRNA标记神经元分布于背侧角和腹侧角，以背侧角分布密集。在胃内，Ob—Rb mRNA标记细胞分布于黏膜层和黏膜下层。长白猪和梅山猪上述结构内Ob—Rb mRNA的分布定位无明显差异。     

Leptin长形受体mRNA与LHRH在猪前脑内共存

为了寻找Leptin在下丘脑水平调控生殖内分泌的形态学证据，用原位杂交和免疫组织化学相结合的方法，研究了5头三元杂交仔猪前脑内Leptin长形受体（OB-Rb）mRNA和黄体生成素释放激素（LHRH）免疫反应阳性物质的共存关系。结果表明，OB-Rb mRNA和LHRH免疫反应阳性神经元在下丘脑、海马结构、大脑皮层和杏仁核内共存，即上述结构内一些表达Leptin长形受体mRNA的神经元也含有LHRH免疫反应阳性物质。在下丘脑，双阳性神经元主要位于室旁核、室周核、腹内侧核、外侧区、弓状核；在大脑皮层（额叶和顶叶）内，双阳性神经元主要位于Ⅲ～Ⅴ层；在海马结构内，双阳性神经元主要位于齿状回的多形层和颗粒层以及海马的锥体细胞层。结果提示，Leptin可能通过其受体直接作用于下丘脑的促性腺激素释放激素（GnRH）神经元调节动物的生殖和内分泌活动。     

GnIH对母猪生殖调控的研究

【目的】研究促性腺激素抑制激素(GnIH)mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量GnIH对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨GnIH在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究GnIH mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量GnIH(10-6、10-8、10-10和10-12 mol·L-1)对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素(雌二醇,孕酮)的合成、细胞增殖相关蛋白(cyclin B1,PCNA)表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】GnIH mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的GnIH作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10-6和10-10 mol·L-1 GnIH能极显著地抑制雌二醇的分泌(P0.01),但不同剂量的GnIH对孕酮分泌的影响并不显著。GnIH能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达(P0.01)。此外,激光共聚焦结果显示GPR147与GnRH在下丘脑室旁核及视前区存在密切联系。【结论】GnIH可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,GnIH可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。     

神经肽W和神经肽B的研究进展

神经肽W和神经肽B是近年发现的一种神经肽,为G蛋白耦联受体GPR7和GPR8的内源性配体。神经肽W和神经肽B及其受体(NPB-WR)广泛分布于中枢神经和其他组织器官,具有调节摄食行为、能量平衡、神经内分泌、炎性痛觉等作用,可能还具有调节应激反应、情绪、焦虑和恐惧等作用。     

兔神经肽W及其受体NPWR1基因克隆及分布定位

【目的】研究神经肽W（NPW）及其受体1（NPWR1,GPR7）mRNA 在兔各器官组织的表达情况。【方法】利用基因克隆方法克隆出兔神经肽W及其受体的cDNA序列片段,以GAPDH 为内参基因,采用相对定量RT-PCR 方法检测NPW及NPWR1 mRNA 在兔体内各组织中的表达情况,用原位杂交方法研究NPWR1阳性细胞在兔脑的分布定位。【结果】克隆出兔NPW及其受体NPWR1的基因部分序列,NPW基因片段长234 bp,NPWR1基因片段长508 bp,GenBank 登录号分别为HQ596517和HQ596518;经DNAStar软件分析,不同物种之间NPW及其受体基因序列的同源性较高。NPW及其受体在兔各组织广泛分布;NPWR1 mRNA在脑内主要分布于海马、小脑、下丘脑、延髓等部位。【结论】兔NPW及其受体基因在进化上是保守的;NPW及其受体在兔体内广泛表达,提示其参与多种生理功能的调节。     

副结核分支杆菌Hed蛋白的抗原性分析及在间接ELISA中的应用

从副结核分支杆菌K-10菌株克隆出840 bp的hed基因片段,插入原核表达载体pET-32a(+),转化至Escherichia coliBL21(DE3),在0.8 mmol.L-1 IPTG诱导下进行表达,纯化重组蛋白,将其进行Western-blot分析、小鼠免疫试验,包被ELISA板,建立间接ELISA方法。结果显示:重组蛋白具有良好的抗原性,方阵滴定法确定了间接ELISA方法的抗血清最佳稀释度(100倍)和抗原包被浓度(4.4μg.mL-1),该方法具有较好的特异性和敏感性。