牛传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)保守基因gB和gE序列,分别设计两对引物及其相应的TaqMan探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释的病毒进行扩增以检测其灵敏度,同时对伪狂犬病病毒(PRV)、马立克病病毒(MDV)、鸭瘟病毒(DPV)进行特异性检测.结果显示,建立的扩增gB和gE基因的荧光PCR可用于检测IBRV,其灵敏度为0.02 TCID50,而与PRV等非IBRV无交叉反应.本研究所建立的荧光PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点,可用于IBRV的检测.     

Ghrelin及其受体在兔淋巴器官的分布及发育性变化

利用免疫组化法研究Ghrelin在3月龄新西兰大白兔免疫器官内的分布定位。结果显示:Ghrelin免疫阳性细胞分布于脾、胸腺和腘淋巴结,以脾中的分布密度为最高。利用RT-PCR方法研究Ghrelin及其受体在1,3,6和12月龄兔免疫器官内的发育性变化。PCR结果显示:Ghren-lin及其受体mRNA在兔脾、胸腺和腘淋巴结均表达,Ghrenlin mRNA在腘淋巴结的表达水平较高,在脾脏和胸腺的表达较低;3种器官内Ghren-lin基因表达的发育变化趋势一致,以1月龄和3月龄表达较高,6月龄和12月龄较低。Ghrenlin受体mRNA的表达以胸腺为最高,在其他2种器官内的表达基本相似;胸腺内Ghrenlin受体基因表达的发育变化趋势与Ghrenlin基因表达的趋势一致,但在其他2种器官内的发育性变化则相反,以12月龄和6月龄较高。这表明Ghrelin及其受体在兔免疫器官内呈发育性变化。     

兔神经肽S及其受体基因的克隆、组织表达及热应激对其表达的影响

 【目的】研究神经肽S(NPS)及其受体（NPSR）mRNA在兔全身各组织的表达情况,以及热应激对兔下丘脑、垂体和肾上腺轴NPS及NPSR mRNA表达的影响。【方法】利用基因克隆方法克隆出兔神经肽S及其受体的cDNA序列,以GAPDH为内参基因,采用相对定量RT-PCR方法检测NPS及NPSR mRNA在兔体内各组织中的表达情况以及热应激对NPS及NPSR mRNA在下丘脑-垂体-肾上腺轴表达的影响,【结果】克隆出兔NPS及其NPSR cDNA序列,兔NPS cDNA全序列为270 bp,NPSR的部分序列为847 bp,GenBank登录号分别为EU978456和FJ713102;经DNAStar软件分析,不同物种之间NPS及其受体基因序列的同源性较高,进化树分析显示NPS与大鼠和小鼠亲缘性最近,符合物种之间的进化关系。NPS及其受体在兔各组织广泛分布,主要集中在中枢神经系统、甲状腺、唾液腺和乳腺。持续热应激处理后,下丘脑和肾上腺中NPS mRNA的表达均为先升高后降至对照组水平,且分别在热应激1 h和0.5 h时表达丰度达到最高,与对照组差异极显著（P＜0.01）;垂体中试验组NPS mRNA均呈下降趋势,与对照组差异极显著（P＜0.01）;NPSR与NPS mRNA在下丘脑、垂体和肾上腺中的表达模式相似。【结论】兔NPS及其受体基因在进化上是保守的;NPS及其受体在兔体内广泛表达,具有组织特异性;热应激时NPS及其受体mRNA在HPA轴上的表达发生了变化。     

对母猪生殖调控的研究

【目的】研究促性腺激素抑制激素（GnIH）mRNA在母猪组织器官中的分布,不同剂量GnIH对母猪卵巢类固醇激素合成和细胞增殖相关蛋白表达的影响,及GPR147与GnRH的形态学关系。从分子、细胞水平和形态学角度,探讨GnIH在下丘脑-垂体-性腺轴对母猪生殖调控的作用机制,丰富神经内分泌学的内容。【方法】以30日龄健康仔母猪为研究对象,采用半定量RT-PCR方法研究GnIH mRNA在母猪24个组织中的分布定位。采集青年母猪卵巢样品,分离卵巢颗粒细胞,研究不同剂量GnIH（10^-6、10^-8、10^-10 和 10^-12 mol·L^-1）对体外培养的母猪卵巢颗粒细胞类固醇激素（雌二醇,孕酮）的合成、细胞增殖相关蛋白（cyclin B1,PCNA）表达的影响。取30日龄健康仔母猪下丘脑,制作脑片,采用荧光双标记,激光共聚焦显微镜观察拍照分析GPR147与GnRH的形态学关系。【结果】GnIH mRNA主要在母猪的中枢神经系统中表达,尤其是在间脑表达含量最高。在外周组织,如子宫、卵巢、垂体中也有一定量表达。不同剂量的GnIH作用于体外培养的卵巢颗粒细胞,其中10^-6和10^-10 mol·L^-1 GnIH能极显著地抑制雌二醇的分泌（P＜0.01）, 但不同剂量的GnIH对孕酮分泌的影响并不显著。GnIH能极显著地抑制卵巢增殖相关蛋白PCNA和cyclin B1的表达（P＜0.01）。此外,激光共聚焦结果显示GPR147与GnRH在下丘脑室旁核及视前区存在密切联系。【结论】GnIH可在下丘脑水平通过其受体直接作用于GnRH神经元,影响GnRH的合成和分泌,进而在中枢水平调控母猪的生殖活动。在外周生殖器官中,GnIH可通过影响卵巢激素的分泌和细胞增殖相关蛋白的表达参与母猪的生殖调控。     

Preproorexin和OX1R mRNA在苏钟猪发情周期下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达

选取苏钟种母猪16头,在第2个发情期后,按发情前期、发情期、发情后期和间情期随机分成4组。用RT-PCR检测苏钟猪发情周期不同时期preproorexin和orexin 1受体（OX1R）mRNA在下丘脑-垂体-卵巢轴中的表达。结果显示：发情周期不同时期preproorexin mRNA在下丘脑、垂体和卵巢中变化趋势一致,preproorexin mRNA在猪的发情前期表达最高,随后其表达量开始下降,在发情后期其表达最少,在间情期时又开始上升。下丘脑中OX1R mRNA在发情前期开始上升,在发情后期达到最高,随后在间情期又开始下降。垂体和卵巢中OX1R mRNA的变化与下丘脑中OX1R mRNA的变化趋势一致。上述结果表明：orexin可能参与调控动物生殖过程。     

4种神经递质调节剂对黄羽肉种鸡产蛋性能的影响

为探讨4种神经递质调节剂对黄羽肉种鸡繁殖性能的影响,对200只健康的27周龄新兴黄3号父母代种母鸡随机分为组进行试验.结果表明:使用溴隐停、左旋多巴和氯丙嗪处理后第1周能够提高试验鸡群的产蛋率,但在第2周后这种效应则消失;4种药物处理均能提高种蛋合格率和平均蛋重;4周内溴隐停和赛更啶处理后的合格数种蛋高于对照,而左旋多巴和氯丙嗪处理后的合格种蛋数则低于对照组.